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Previous issue date: 2008 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Os citocromos P450 (CYP) desempenham importantes papéis na biotransformação de xenobióticos e no metabolismo de substâncias endógenas. A subfamília CYP1A foi bem conservada ao longo da evolução dos vertebrados, tendo sido encontrada em todas as espécies de peixes mandibulados estudadas até o momento. Em trabalho anterior, verificamos que algumas espécies de cascudos da família Locariidae não apresentavam atividade da etoxiresorufina-O-desetilase (EROD) em microssomos hepáticos. Como EROD é atividade catalisada predominantemente por CYP1A em diversos vertebrados, esse achado nos motivou a investigar em detalhe os CYP, em especial da subfamília 1A, em cascudos. Este trabalho é um estudo comparativo da capacidade de cascudos (Hyposthomus luetkeni e H. affinis), tilápias do Nilo (Oreochromis niloticus; Cichlidae) e camundongos, controles e tratados com indutores conhecidos de CYP1A [50 mg/kg ip; B-naftoflavona (BNF), ou 7-12 dimetil-benzoantraceno (DMBA)] de: i - catalisar diversas reações químicas sabidamente mediadas por CYP, ii - expressar a proteína CYP1A no tecido hepático, e iii - ativar o pró-mutágeno DMBA. Nos microssomos hepáticos das tilápias e dos camundongos, detectamos atividades constitutivas de EROD e também de desalquilação de outros ésteres da resorufina (MROD, PROD e BROD). Nessas duas espécies, as atividades dessas monooxigenases foram induzidas pelos tratamentos com BNF e DMBA. Nos cascudos, controles e tratados com os indutores de CYP1A, as atividades das alcoxi-resorufina-O-desalquilases não foram detectadas. A atividade da etoxicumarina desetilase (ECOD) foi cerca de cinco vezes maior no fígado de cascudos e de camundongos do que no das tilápias. O CYP1A não parece ter papel importante na catálise de ECOD nessas duas espécies de peixes
Os resultados também mostraram que dois anticorpos anti-CYP1A de peixe reconheceram proteínas com massa moleclar compatível com o de CYPs nos microssomos hepáticos de tilápias e camundongos tratados com indutores de CYP1A. Nos cascudos, entretanto, a detecção de CYP1A por immunoblotting com esses anticorpos não foi consistente. Com o emprego de espectrometria de massas, identificamos o CYP1A em microssomos hepáticos de tilápias induzidas, mas não nos cascudos controles ou induzidos. Em conjunto, os resultados sugerem que, em contraste com o observado com tilápias e camundongos, os cascudos não exibem atividade catalítica de CYP1A e não expressam as proteínas correspondentes no fígado, ou as expressam apenas em níveis constitutivos extremamente baixos. Apesar de não apresentarem atividade catalítica de CYP1A, os cascudos foram capazes de ativar o pró-mutágeno DMBA que, em outras espécies, é ativado por enzimas da família CYP1, em especial das subfamílias 1A e 1B / The cytochrome P450 (CYP) superfamily plays im
portant roles in the biotransformation of
xenobiotic and endogenous compounds. The CYP1A
subfamily is well conserved in
vertebrates and has been found in all jawed fish studied to date. In a previous study, we had
found that suckermouth armored catfishes of the Loricariidae family (
Hyposthomus luetkeni
and
H.affinis
) did not show ethoxy-resorufin-
O
-deethylase (EROD) activity in liver
microsomes. Since EROD is a marker of CYP1
A catalytic activity in vertebrates, this
unexpected finding prompted us to investigate
in depth the CYP system of loricariid
catfishes, particularly the CYP1A subfamily. In
this study, we compared the capacities of
suckermouth armored catfishes (Loricariidae), Nile tilapias (
Oreochromis niloticus
, Cichlidae)
and mice (Swiss Webster), control and treated with CYP1A-inducing agents (50 mg/kg ip ß-
naphthoflavone, BNF, and 7-12 dimethyl-benzoanthracene, DMBA) to: i - catalyze several
activities that are known to be catalyzed by CYPs, ii - express CYP1A protein in liver tissue
and iii – activate the pro-mutagen DMBA. In liver microsomes of tilapias and mice,
constitutive activities of EROD, and of other alkoxy-resorufin-
O
-dealkylases (XROD: MROD,
PROD and BROD) were found. In the two species, activities of these monooxygenases were
induced after treatment with BNF and DMBA. In suckermouth armored catfishes (control and
induced) no XROD activities were noted. In liv
er microsomes of suckermouth catfishes and
mice, the ethoxycoumarin-deethylase activity
(ECOD) was found to be approximately five-
fold the ECOD activity recorded in tilapias. CYP1A apparently did not take part in the
catalysis of ECOD reaction in the two fish species. Results also showed that two antibodies
against- fish CYP1A recognized liver microsomal
proteins with a CYP-compatible molecular
weight in induced tilapias and mice. These putative CYP1A proteins, however, were not
consistently detected in suckermouth catfish liv
er microsomes. Taken together, findings from
this study suggested that, in contrast to t
ilapias and mice, suckermouth catfishes do not
show CYP1A catalytic activity and do not express, or do express only tiny amounts of
constitutive CYP1A proteins in the liver. Alt
hough not showing CYP1A catalytic activity in the
liver, armored suckermouth catfishes were able to convert the pro-mutagen DMBA into its
genotoxic metabolites, a metabolic activation us
ually mediated by CYP1 family enzymes, in
particular, CYP1A and 1B.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.arca.fiocruz.br:icict/13493 |
| Date | January 2008 |
| Creators | Martins, Thiago Estevam Parente |
| Contributors | Cascudos (Hyposthomus luetken e H. affinis), Tilápias do Nilo, Ferreira, Ana Gisele C. Neves, Teixeira, Ana Maria Rossini, Araújo, Francisco Gerson, Basto, Jayme da Cunha, Valente, Richard Hemmi, Paumgartten, Francisco Jose Roma |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ, instname:Fundação Oswaldo Cruz, instacron:FIOCRUZ |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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