Neurocysticercosis (NC) is a polymorphic disease and the immune response in
human carrier is heterogenic. In this study, 35 primers were used for amplifications by
Random Amplified Polymorphic DNA (RAPD) of Taenia solium metacestodes, from five
different geographic areas in Brazil: 1) Distrito Federal (DF), Center West; 2) Barreiras
(BA), Northeast and Southeast; 3) Hydro Basin of the Mosquito River (North of Minas
Gerais, RM-MG), 4) São Paulo (SP) and 5) Uberaba (Minas Gerais, UB-MG).
Metacestodes saline crude extracts of four populations (DF, BA, RM-MG e SP) were used
for the detection of specific IgG antibodies by ELISA and Western Blotting (WB). A total
of 157 serum samples of three groups, (G1): 49 NC patients; (G2): 68 patients with other
helminthiasis: hydatidosis (10), taeniasis (20), strongyloidiasis (20), schistosomiasis (10)
and hymenolepiasis (8); and (G3): 40 healthy individuals; were analyzed by ELISA. From
these, the 98 serum samples were assayed by WB; G1 (49), G2 (39) and G3 (10). The
genetic distances, in disagreement percentage, between the metacestode populations were
calculated from of 15 RAPD markers and showed 49.5% (DF), 48% (BA), 38.5% (UBMG)
and 28% (RM-MG and SP) of genetic distances. Six primers identified polymorphic
fragments and the primers 26 (GGGTTTGGCA) and 29 (TCGCCAGCCA) allowed a
better differentiation of populations. The fragments of 1000, 500 and 326 pb (pairs of
bases) in the UB-MG and of 600 and 244 pb in RM-MG were amplified by primer 26. The
fragments generated by primer 29 were 500, 800 and 1191 pb, 300 and 1377 pb, 1000 pb
and 244 and 434 pb in SP, UB-MG, DF and BA populations, respectively. In G1, the
positivity by ELISA was: 90% (DF), 69% (BA), 71% (MG) and 67% (SP). The DF extract
was more antigenic than others (p=0.02). In WB, the 64-68 kDa antigens were recognized
in all extracts, exclusively, in serum samples from active NC patients (p=0.001). Variation
in banding pattern was detected between the extracts (p<0.05). In G2, the serum samples
of hydatidosis patients presented from 70 to 90% positivity by ELISA in antigenic
extracts (p<0.05); however, the bands recognition pattern in WB was different from that
presented in G1 samples. The 77 kDa band was significantly identified in hydatidosis
samples (p=0.0001). In conclusion, the T. solium populations analyzed showed genetic
variability and antigenic differences. / A neurocisticercose (NC) constitui doença polimórfica, apresentando
heterogeneidade da resposta imune no hospedeiro humano. Nesse estudo, o teste Random
Amplified Polymorphic DNA (RAPD) foi utilizado com 35 primers na detecção de
polimorfismo em metacestódeos de Taenia solium provenientes de cinco áreas geográficas
distintas do Brasil: 1) Distrito Federal (DF), região Centro-Oeste; 2) Barreiras (BA), região
nordeste e da região sudeste: 3) Bacia Hidrográfica do Rio Mosquito (norte de Minas
Gerais, RM-MG), 4) São Paulo (SP) e 5) Uberaba (Minas Gerais, UB-MG). Os extratos
salinos totais de metacestódeos de quatro populações (DF, BA, RM-MG e SP) foram
utilizados na detecção de anticorpos IgG específicos pelo ELISA e Western Blotting
(WB). As 157 amostras de soro de três grupos (G) de indivíduos: G1: 49 pacientes com
NC; G2: 68 pacientes com outras helmintíases, sendo hidatidose (10), teníase (20),
estrongiloidíase (20), esquistossomose (10) e himenolepíase (8) e G3: 40 indivíduos
saudáveis (controles); foram analisadas pelo ELISA. Foram ensaiadas 98 amostras de
soro: G1 (49), G2 (39) e G3 (10) pelo WB. As distâncias genéticas, por porcentagem de
desacordo, foram de 49,5% (DF), 48% (BA), 38,5% (UB-MG) e 28% (RM-MG e SP) nas
populações de metacestódeos, calculadas a partir de 15 marcadores de RAPD. Seis
primers geraram fragmentos polimórficos nos isolados analisados, sendo que os
primers 26 (GGGTTTGGCA) e 29 (TCGCCAGCCA) permitiram melhor diferenciação
entre as populações, o primer 26 gerou os fragmentos de 1000, 500 e 326 pb (pares de
bases) na amostra de UB-MG, e de 600 e 244 pb em RM-MG. O 29 gerou fragmentos em
quatro das populações analisadas, sendo 500, 800 e 1191 pb em SP, 300 e 1377 pb em UBMG,
1000 pb no DF e 244 e 434 pb na BA. No G1, as freqüências de positividade no
ELISA, foram: 90% (DF), 69% (BA), 71% (MG) e 67% (SP), sendo o extrato do DF mais
antigênico que os demais (p = 0,02). No WB, o peptídeo de 64-68 kDa foi reconhecido em
todos os extratos, exclusivamente, em amostras de pacientes com NC ativa (p=0,001).
Detectou-se variação no padrão de reconhecimento de bandas entre os extratos (p<0,05).
No G2, as amostras de soro de pacientes com hidatidose apresentaram de 70 a 90% de
positividade no ELISA frente aos extratos analisados (p<0,05); porém, o padrão de
reconhecimento de bandas no WB diferiu do apresentado pelas amostras do G1, sendo que
a banda de 77 kDa foi significativamente identificada pelas amostras de pacientes com
hidatidose (p=0,0001). Concluiu-se que as populações de T. solium analisadas nesse
estudo, apresentaram variabilidade genética e diferenças de antigenicidade. / Doutor em Imunologia e Parasitologia Aplicadas
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/urn:repox.ist.utl.pt:RI_UFU:oai:repositorio.ufu.br:123456789/16559 |
| Date | 07 April 2006 |
| Creators | Barcelos, Ivanildes Solange da Costa |
| Contributors | Costa-cruz, Julia Maria, Bonetti, Ana Maria, Souza, Maria Aparecida de, Silva, Luciana Pereira, Paula, Fabiana Martins de |
| Publisher | Universidade Federal de Uberlândia, Programa de Pós-graduação em Imunologia e Parasitologia Aplicadas, UFU, BR, Ciências Biológicas |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFU, instname:Universidade Federal de Uberlândia, instacron:UFU |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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