En este trabajo se ha estudiado la posibilidad de desarrollar un método de regeneración y transformación para producir plantas transgénicas de albaricoquero con cotiledones y secciones de hipocotilo a partir de semillas maduras de las variedades de albaricoquero
‘Canino’, ‘Moniquí’ y ‘Dorada’ y de la subespecie de albaricoquero, Prunus armeniaca L. var. ansu Maxim, cuyas semillas se utilizan para producir patrones paraalbaricoquero y otros frutales en China.
Se ha conseguido establecer un protocolo de regeneración con los cotiledones de semillas de ‘Canino’ y del patrón, Prunus armeniaca L. var. ansu Maxim obteniendo
porcentajes de regeneración muy elevados (66%) que no se vieron afectados por el
genotipo. Sin embargo, la falta de coincidencia de las células que regeneran con las
células que son transformadas por Agrobacterium ha impedido la obtención de plantas
transformadas hasta el momento.
Utilizando los explantos de secciones de hipocotilos de semillas maduras de tres
variedades comerciales de albaricoquero, ‘Dorada’, ‘Moniquí’ y ‘Canino’, se ha
establecido un protocolo de regeneración eficiente, con un mínimo del 32% de
regeneración para las tres variedades estudiadas, que ha permitido abordar experimentos
de transformación. Además, se han conseguido plantas transgénicas de las variedades
‘Dorada’ y ‘Moniquí’.
El principal interés de la transformación genética de especies frutales reside en la
posibilidad de transformar variedades comerciales con interés agronómico y
ampliamente aceptadas. Sin embargo, para que la transformación genética se convierta
en una herramienta de uso común en los programas de mejora de frutales leñosos se
requiere que los procedimientos sean reproducibles, de elevada eficiencia e
independientes del genotipo. La utilización de material adulto garantiza la identidad
genética del material vegetal y evita los problemas de juvenilidad en aquellas especies
en las que estos periodos son muy largos. Con el fin de explorar la posibilidad de
desarrollar un protocolo de transformación independiente del genotipo, en esta tesis se
ha estudiado el desarrollo de una nueva metodología basada en la transformación de
células con capacidad meristemática. Se ha conseguido transformar cuatro variedades
de albaricoquero, ‘Helena’, ‘Canino’, ‘Rojo Pasión’ y ‘Lorna’, con eficiencias de
transformación que se encuentran entre las más elevadas descritas en especies de
Prunus. Las ventajas de esta metodología son la sencillez del protocolo utilizado, su
consistencia y rapidez. Sin embargo, hemos detectado que con mucha frecuencia se
producen plantas quiméricas al transformar las células meristemáticas.
Otro inconveniente en los protocolos de transformación es la utilización de genes
marcadores de resistencia a antibióticos o herbicidas. Estos genes producen un rechazo
social e incluso existe una directiva europea (2001/18/CE) que regula las plantas
transformadas con genes de resistencia a antibióticos. El uso del gen pmi como
marcador de selección podría reducir el rechazo de la opinión pública y facilitar los
trámites legales para la comercialización de plantas transgénicas, ya que la proteína que
codifica este gen no representa un riesgo para la salud humana ni para el medio
ambiente. En la presente tesis se ha estudiado el desarrollo de un protocolo de
transformación genética de albaricoquero que utiliza el sistema pmi/manosa para
seleccionar las plantas transformadas. Con este sistema se ha conseguido producir
plantas transgénicas de albaricoquero con una eficiencia similar a la obtenida con genes
marcadores de selección que confieren resistencia a antibióticos, demostrando que
puede ser un sistema de selección alternativo al uso de antibióticos. / In this Ph.D. thesis a methodology to develop such a
procedure has been studied, based in cells with meristematic capability. We have
transformed the apricot cultivars ‘Helena’, ‘Canino’, ‘Rojo Pasión’ and ‘Lorna’, with
transformation efficiencies, based on PCR analysis, among the highest reported after
transformation of other Prunus species. The advantages of this methodology are that is
simple, fast and consistent. However, a large frequency of chimerical plants has been
detected when transforming meristematic cells.
Another problem of most transformation procedures is that they use antibiotic resistance
marker genes. These genes produce a social rejection and there is an European law that
neither allow deliberate release of plants carrying antibiotic resistance genes, used in
veterinary or medicine, after 2004 nor their commercialisation after 2008 (Directive
2001/18/EEC of the European Parliament and the Council of the European Union).
Since the PMI protein has revealed no adverse effects on human health and on the
environment, the use of the pmi gen as a selectable marker could reduce the social
rejection, facilitating legalisation and commercialisation of transgenic plants.
In this Ph.D. thesis we have evaluated a transformation procedure using the
pmi/mannose system for selecting apricot transgenic plants. Transformation efficiencies
were similar to those obtained using antibiotic selection, demonstrating that this system
could be an alternative for producing apricot transgenic plants under safe conditions for
human health and the environment.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:TDX_UM/oai:www.tdx.cat:10803/42941 |
| Date | 27 May 2011 |
| Creators | Wang, Hong |
| Contributors | Alburquerque Ferrando, Nuria, Burgos Ortiz, Lorenzo, Universidad de Murcia. Departamento de Genética y Microbiología |
| Publisher | Universidad de Murcia |
| Source Sets | Universidad de Murcia |
| Language | Spanish |
| Detected Language | Spanish |
| Type | info:eu-repo/semantics/doctoralThesis, info:eu-repo/semantics/publishedVersion |
| Format | 168 p., application/pdf |
| Source | TDR (Tesis Doctorales en Red) |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess, ADVERTENCIA. El acceso a los contenidos de esta tesis doctoral y su utilización debe respetar los derechos de la persona autora. Puede ser utilizada para consulta o estudio personal, así como en actividades o materiales de investigación y docencia en los términos establecidos en el art. 32 del Texto Refundido de la Ley de Propiedad Intelectual (RDL 1/1996). Para otros usos se requiere la autorización previa y expresa de la persona autora. En cualquier caso, en la utilización de sus contenidos se deberá indicar de forma clara el nombre y apellidos de la persona autora y el título de la tesis doctoral. No se autoriza su reproducción u otras formas de explotación efectuadas con fines lucrativos ni su comunicación pública desde un sitio ajeno al servicio TDR. Tampoco se autoriza la presentación de su contenido en una ventana o marco ajeno a TDR (framing). Esta reserva de derechos afecta tanto al contenido de la tesis como a sus resúmenes e índices. |
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