Le traitement des leucémies myéloïdes et lymphoblastiques aiguës a connu des avancées importantes dans la dernière décennie. Malgré ces progrès, le taux de rechutes reste élevé et le
besoin médical est réel. Ces leucémies sont caractérisées par une expression aberrante d’antigènes qui peuvent provenir de protéines mutées, mais aussi de séquences rapportées comme non codantes. Les réponses contre ces néoantigènes tumoraux « cryptiques » demeurent non caractérisées. Afin de définir l’existence d’un répertoire varié de récepteurs des lymphocytes T
(TCR) qui reconnaitraient ces néoantigènes, des cellules mononuclées du sang périphérique de
patients sains sont isolées puis enrichies en cellules T CD8+ naïves. L’expansion et l’activation de
ces cellules sont ensuite réalisées avec des cellules dendritiques autologues chargées avec
l’antigène d’intérêt puis triées à l’aide de multimères HLA-peptides spécifiques. L’ARN des
cellules avec TCR spécifiques aux antigènes spécifiques des tumeurs (TSA) leucémiques est isolé
afin de réaliser un séquençage du TCR-bêta. L’expansion cellulaire a été réalisée de façon
suffisante pour effectuer le séquençage des cellules identifiées comme positives par le marquage
avec dextramères. Une réponse T est obtenue pour 50% des néoantigènes testés avec une réactivité montrée par ELISpot et se traduisant par une sécrétion de cytokines inflammatoires. Des
lymphocytes T spécifiques aux TSA d’intérêt sont donc présents dans le sang périphérique de
donneurs sains. Le séquençage de ces cellules a permis d’identifier les clonotypes pour lesquels
une réponse anti-leucémique forte est possible. Il serait intéressant d’utiliser ces clonotypes
spécifiques aux tumeurs cryptiques dans le développement de nouveaux traitements d’immunothérapie adoptive. / The treatment of acute myeloid and lymphoblastic leukemia has seen significant advances in the
past decade. Despite this progress, the relapse rate remains high and the medical need is real. These leukemias are characterized by an aberrant expression of antigens, some from mutated proteins but also from sequences of DNA that were reported as non-coding. Responses against these “cryptic” neoantigens remains uncharacterized. In order to verify whether a diverse repertoire of T cell receptors (TCR) does recognize these neoantigens, mononuclear cells from peripheral blood of healthy patients are isolated and enriched with naive CD8+ T cells. The expansion and activation of these cells are then carried out with autologous dendritic cells loaded with the antigen of interest and then sorted using HLA-peptide specific multimers. RNA from cells with TCR specific for leukemic tumor-specific antigens (TSA) is isolated in order to perform TCR-beta sequencing. Cell expansion was sufficient to perform the sequencing of cells identified as positive by staining with dextramers. A T-cell response is obtained for 50% of the neoantigens tested with reactivity shown by ELISpot and resulting in a secretion of inflammatory cytokines. T lymphocytes specific to the TSA of interest are therefore present in the peripheral blood of healthy donors. Sequencing of these cells made it possible to identify clonotypes for which a strong anti-leukemic response can be expected. It would be interesting to use these cryptic tumor-specific clonotypes in the development of new adoptive immunotherapy treatments.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:umontreal.ca/oai:papyrus.bib.umontreal.ca:1866/25200 |
| Date | 08 1900 |
| Creators | Rulleau, Caroline |
| Contributors | Delisle, Jean-Sébastien |
| Source Sets | Université de Montréal |
| Language | fra |
| Detected Language | French |
| Type | thesis, thèse |
| Format | application/pdf |
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