O presente estudo objetivou avaliar os efeitos da inflamação e das expressões de metalotioneínas (MTs) e ciclooxigenase-2 (COX-2) na desnervação associada à carcinogênese experimental colônica, através da avaliação de imunoexpressão de COX-2, mieloperoxidase (MPO), neutrophil elastase (NE) e cluster de diferenciação 68 (CD68). Ainda, para analisar a presença de mutações e de danos ao material genético, realizou-se a técnica de imunoistoquímica para identificação de células imunomarcadas para MTs e histonas gamma-H2AX (H2AX). 52 ratos machos Wistar foram divididos em seus respectivos grupos: C (controle), B (controle dos animais desnervados), D (aplicação de DMH 30 mg/Kg ou 125 mg/Kg), BD (Cloreto de benzalcônio 0,3% na serosa intestinal, com posterior aplicação de DMH) e DB (aplicação de DMH, com posterior administração de BAC), sendo subdivididos de acordo com o tempo em que foram mortos, sendo: 24 horas, 72 horas (para avaliação da fase de iniciação) e 20 dias (para avaliação da fase de promoção). Como resultado, a desnervação foi capaz de proteger as células colônicas contra os efeitos desse carcinógeno, o que pode ser observado através da diminuição significativa da imunomarcação de MTs e de H2AX nos grupos desnervados. Ainda, através do aumento do número de células positivamente marcadas para MPO, NE e CD68, neutrófilos, macrófagos e/ou monócitos podem estar estritamente relacionados ao papel protetor da desnervação contra o câncer em um período de 20 dias após administração do DMH, uma vez que os animais desnervados apresentaram uma significativa diminuição desses marcadores. A desnervação aumentou o número de células imunomarcadas para MTs em animais que receberam apenas a aplicação do DMH e foram mortos após 20 dias - o que possivelmente diminuiu a expressão de COX-2 encontrada nesse estudo. Assim, sugere-se que os possíveis mecanismos protetores desempenhados pela desnervação contra o câncer sejam: (i) o aumento de MTs - conhecidamente protetoras à célula, e (ii) atuação da desnervação sobre o processo inflamatório, mais especificamente sobre neutrófilos e macrófagos e/ou monócitos. / This study evaluated the effects of inflammation and expression of metallothionein (MTs) and cyclooxygenase-2 (COX-2) on denervation associated to colonic experimental carcinogenesis by immunohistochemical evaluation of COX-2, myeloperoxidase (MPO), neutrophil elastase (NE) and cluster of differentiation 68 (CD68). Also, to analyze the presence of mutations and damage to DNA, was performed the immunohistochemical technique to identify positive immunostained cells for MTs and histone gamma-H2AX (H2AX). 52 male Wistar rats were divided into their respective groups: C (control), CB (control related to denervated animals), D (application of DMH 30 mg/Kg or 125 mg/kg), BD (0.3% benzalkhonium chloride administration in the intestinal serosa, and subsequent application of DMH) and DB (application of DMH with subsequent administration of BAC, in serous). The animals were subdivided according to euthanasia time: 24 hours, 72 hours (for evaluation of the initiation phase of the carcinogenesis process) and 20 days (for assessment of promoting phase). As result, the denervation process was able to protect colonic cells against the carcinogen effects, which can be seen through the significant decrease in immunostained cells for MTs and H2AX. Moreover, through the increased expression of MPO, NE and CD68, we found that neutrophils, macrophages and/or monocytes are closely related to inflammation on development of early colonic experimental carcinogenesis (20 days groups) - which was reverted by denervation. The denervation increased the number of immunostained cells for MTs in denervated animals that received application of DMH - what could possibly decreased COX-2 expression found in this study. Thus, it is suggested that the possible protective mechanisms performed by denervation against cancer are: (i) increased MTs - known to be protective to the cell, and (ii) actuation on inflammatory process, more specifically on neutrophils and macrophages and/or monocytes.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:usp.br/oai:teses.usp.br:tde-06012017-101332 |
| Date | 01 July 2016 |
| Creators | Minto, Stefania Bovo |
| Contributors | Garcia, Sergio Britto |
| Publisher | Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP |
| Source Sets | Universidade de São Paulo |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | Dissertação de Mestrado |
| Format | application/pdf |
| Rights | Liberar o conteúdo para acesso público. |
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