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Previous issue date: 2017-05-11 / Ascorbic acid (AA) is a water soluble vitamin and also is widely used as an antioxidant in the
food, chemical and pharmaceutical industry. Among vitamins, this chemical compost is known
as one of the most unstable, due to its stability can be affected by temperature, oxidation, light,
enzymes, pH and metal catalysts. With the use of nanotechnology, the AA can be encapsulated
in liposomes, which play the role of a shield, protecting the AA from all those factors mentioned
above. The liposomes are biocompatible and biodegradable vesicular structures formed by bilayers
of phospholipids around an aqueous core, but more unstable than other nanoparticles. The
purpose of the liposomes usage is to protect the AA from degradation. Thus, this work aims
to prepare liposomes containing ascorbic acid, to characterize and to analyze its antioxidant
activity. First, an analytical method for the quantification of ascorbic acid by high performance
liquid chromatography (HPLC) was co-validated. After co-validation, liposomal formulations
containing 1 mg/mL ascorbic acid (LIP-A) and blank liposomal formulations (LIP-B) - without
the active ingredient - were prepared for comparison using the reverse phase evaporation method.
After preparation of these formulations, they were characterized according to their refractive
index, average particle diameter, polydispersity index (PDI), zeta potential, pH, content, encapsulation
efficiency, stability and, DPPH• and ABTS• free radical scavenging activity. In stability,
three formulations were prepared and each formulation was divided into three vials, each vial
was stored in a different condition. Here are the conditions: climatic chamber (40 0 °C), room
temperature (25 2 °C) and refrigerator (4 1 °C). Through the results of the co-validation
it was possible to realize that the ascorbic acid‘s quantification method is linear, specific and
precise and, can be used for the quantification of ascorbic acid in LIP-A. The prepared liposomes
presented 161 6 nm of mean vesicle diameter, a 0,231 0,02 polydispersity index, -7.3
1,1 mV zeta potential, 3,2 0,04 pH and a 19 1,1% encapsulation efficiency. The initial AA
content of LIP-A was 1 mg/mL , and the initial antioxidant activity of LIP-A was 12.0 1,1
mMol and 11.4 1,4 mmol of TE/ml for the DPPH• and ABTS• radicals, respectively. The
content and free radical scavenging activity varied according to the condition in which LIP-A
were stored (climatic chamber, room temperature or refrigerator), because the AA’s stability
depends on temperature in which it is stored. During the stability analysis, it was possible to
see that LIP-B in climatic chamber condition presented instability from 15º on, while LIP-A
remained stable till day 30. These results suggest that the AA, It is suggested that AA as an
antioxidant leaves the liposomes more stable. The best condition for the LIP-A storage was
the refrigerator one. In this condition the liposome remained stable for 30 days regarding to its
mean diameter, PDI, zeta potential and pH. This condition also presented a higher content and
antioxidant activity for longer than in the other ones. / O ácido ascórbico (AA) é uma vitamina hidrossolúvel e um antioxidante amplamente utilizado
pela indústria alimentícia, química e farmacêutica. Entre as vitaminas, é conhecida como uma
das mais instáveis, pois sua estabilidade pode ser afetada pela temperatura, oxigênio, luz, enzimas,
pH e catalisadores metálicos. O AA pode ser protegido destes fatores sendo encapsulado
em lipossomas, através da nanotecnologia. Os lipossomas são estruturas vesiculares formadas
por bicamadas de fosfolipídios ao redor de um núcleo aquoso, são vesículas biocompatíveis e
biodegradáveis, mas são mais instáveis. O objetivo da utilização de lipossomas neste trabalho
é que estas vesículas protejam o AA da degradação. Sendo assim, a proposta deste trabalho
é preparar lipossomas contendo ácido ascórbico, caracterizá-los e analisar sua atividade antioxidante.
Primeiramente foi co-validado um método analítico para a quantificação de ácido
ascórbico por cromatografia a líquido de alta eficiência (CLAE). Após a co-validação foram
preparadas formulações lipossomais contendo ácido ascórbico (LIP-A) na concentração de 1
mg/mL e formulações lipossomais brancas – sem o ativo (LIP-B) para fins de comparação,
através do método de evaporação em fase reversa. Após a preparação destas formulações, elas
foram caracterizadas de acordo com seu índice de refração, diâmetro médio de partícula, índice
de polidispersão (IPD), potencial zeta, pH, teor, eficiência de encapsulação, atividade sequestrante
de radicais livres DPPH• e ABTS• e estabilidade. Na estabilidade foram preparadas três
formulações e cada formulação foi dividida em três frascos, cada frasco foi armazenado em
uma condição diferente: câmara climática (40 0 °C), temperatura ambiente (25 2 °C) e
geladeira (4 1 °C). Através dos resultados da co-validação foi possível perceber que o método
para quantificação do ácido ascórbico é linear, específico e preciso e pode ser utilizado para a
quantificação de ácido ascórbico em LIP-A. Os lipossomas preparados apresentaram 161 6
nm de diâmetro médio de vesícula, 0,231 0,02 de índice de polidispersão, - 7,3 1,1 mV
de potencial zeta, 3,2 0,04 de pH e uma eficiência de encapsulação de 19 1,1 %. O teor
de AA inicial do LIP-A foi de 1 mg/mL, e a atividade antioxidante inicial do LIP-A para o
radical DPPH foi de 12,0 1,1 μMol de TE/mL e para o ABTS 11,4 1,4 μMol de TE/mL.
O teor e a atividade antioxidante variaram de acordo com a condição em que os LIP-A foram
armazenados (câmara climática, temperatura ambiente ou geladeira), pois a estabilidade do
AA depende da temperatura em que ele é armazenado. Durante as análises de estabilidade foi
possível perceber que o LIP-B na condição de câmara climática ficou instável a partir do 15º,
enquanto o LIP-A permaneceu estável até o dia 30, sugere-se que o AA por ser um antioxidante
deixou os lipossomas mais estáveis. A melhor condição para o armazenamento do LIP-A foi
em geladeira, nesta condição os lipossomas se mantiveram estáveis em relação ao seu diâmetro
médio, IPD, potencial zeta e pH por 30 dias. E apresentou um maior teor e atividade antioxidante
por mais tempo que nas outras condições.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:tede.universidadefranciscana.edu.br:UFN-BDTD/561 |
| Date | 11 May 2017 |
| Creators | Favarin, Fernanda Reis |
| Contributors | Ourique, Aline Ferreira, Fogaça, Aline Oliveira, Bochi, Viviani Caetano, Mortari, Sergio Roberto |
| Publisher | Centro Universitário Franciscano, Programa de Pós-Graduação em Nanociências, UNIFRA, Brasil, Biociências e Nanomateriais |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional Universidade Franciscana, instname:Universidade Franciscana, instacron:UFN |
| Rights | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
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