L’endometri és el revestiment interior de la mucosa de l’úter.
Histològicament, en l’endometri podem diferenciar dos tipus cel·lulars
epitelials: l’epiteli luminal i l’epiteli glandular. Els teixits epitelials es
caracteritzen per ser teixits polaritzats que presenten unes característiques
morfològiques distingibles com són: polarització apico-basal, contactes cèl·lula -
cèl·lula específics i adhesió a la membrana Basal. El primer objectiu d’aquest
treball va ser la creació d’un cultiu en tres dimensions (3D) de cèl·lules epitelials
d’endometri de ratolí, que permetés la possibilitat d’estudiar els diferents
processos relacionats amb la morfogènesi i carcinogènesi endometrial.
Un cop desenvolupat el sistema de cultiu, vam estudiar els factors
extracel·lulars que influïen en la correcta formació del lumen glandular, així
com l’establiment de la polaritat de les cèl·lules epitelials que formen les
glàndules. D’aquesta manera hem pogut determinar un nou paper de les
citocines TNF-α i IL-1α en la formació i manteniment del lumen. A més a més,
també hem pogut demostrar que els glucocorticoides són els encarregats de
reprimir l’expressió d’aquestes citocines a través de l’acció del receptor
d’estrògens.
En segon lloc, hem utilitzat el model de cultiu desenvolupat per estudiar
aspectes relacionats amb la polaritat cel·lular i la carcinogènesi. Recentment
s’ha suggerit que l’establiment de la polarització cel·lular podria actuar com a
supressor tumoral mentre que la pèrdua de la mateixa, és un reconegut
marcador de la progressió tumoral. Per aquest motiu, i utilitzant el nostre
sistema de cultiu, vam voler caracteritzar l’acció del TGF-β tant en cèl·lules
polaritzades com en no polaritzades. En aquest treball demostrem que la
pèrdua de la polaritat canvia la resposta pro-apoptòtica del TGF-β en cèl·lules
polaritzades a una resposta associada a la progressió del fenotip tumoral (EMT)
en cèl·lules no polaritzades.
Finalment vam voler estudiar els efectes de l’hiperestrogenisme en
relació a pèrdues del gen supressor de tumors PTEN en la carcinogènesi
endometrial. Per una banda, les pèrdues del supressor tumoral PTEN
constitueixen una de les principals alteracions en el carcinoma d’endometri. Per
altra banda, l’hiperestrogenisme és un conegut factor de risc en el
desenvolupament de neoplasies endometrials. Tanmateix, no està clara si l’acció
de l’estradiol sobre les cèl·lules epitelials, és directa o és dóna a través d’un
efecte paracrí de les cèl·lules del estroma; i si la pèrdua d’expressió de PTEN té
repercussió en els efectes produïts pels estrògens sobre l’endometri. Per aquest
motiu, vam voler investigar els efectes de l’estradiol en cèl·lules polaritzades
que creixen en un medi definit, sense la interferència de factors paracrins
provinents de les cèl·lules de l’estroma. Els nostres estudis indiquen que
l’estradiol i la Insulina cooperen en la regulació de la proliferació de cèl·lules
endometrials a través del receptor d’estrògens α. A més a més, pèrdues
al·lèliques en PTEN donen lloc a una proliferació desmesurada en resposta a
Insulina i estradiol, similar a la que es troba en les hiperplàsies endometrials.
Fa més d’una dècada que es va suggerir, per primera vegada, la
rellevància de la polarització cel·lular a l’hora d’entendre els mecanismes
involucrats en la morfogènesi cel·lular així com en la progressió tumoral. Tot i
això, avui en dia encara es desconeixen molts dels mecanismes involucrats en
aquest processos. En aquest context, el nostre treball és important perquè: per
primer cop, hem generat un cultiu en 3D de cèl·lules no immortalitzades i no
transformades; hem determinat quins són els factors extracel·lulars involucrats
en el manteniment i formació de la cavitat luminal; hem aportat evidencies què
la polaritat epitelial actua com a supressor tumoral no canònic i; hem demostrat
que pèrdues en PTEN causen una hiperplàsia de les cèl·lules endometrials en
resposta a l’exposició a l’estradiol i la Insulina. / El endometrio es el revestimiento interior de la mucosa del útero.
Histológicamente en el endometrio podemos diferenciar dos tipos celulares
epiteliales: el epitelio luminal y el glandular. Los tejidos epiteliales se
caracterizan por ser tejidos polarizados que presentan unas características
morfológicas distinguibles como son: polarización apico-Basal, contactos célula
- célula específicos y adhesión a la membrana Basal. El primer objetivo de este
trabajo fue la creación de un cultivo en tres dimensiones (3D) de células
epiteliales de endometrio de ratón, que presentara algunas ventajas a los
cultivos ya existentes, a la vez que permitiera la posibilidad de estudiar los
diferentes procesos relacionados con la morfogénesis y la carcinogénesis
endometrial.
Una vez obtenido el sistema de cultivo, quisimos estudiar los factores
extracelulares que influían en la correcta formación del lumen de las glándulas,
así como el establecimiento de la polaridad de las células epiteliales que forman
las glándulas. De esta manera hemos podido determinar un nuevo papel de las
citoquinas TNF-α y IL-1α en la formación y mantenimiento del lumen. Además,
también hemos podido concluir que los glucocorticoides son los encargados de
reprimir la expresión de estas citoquinas a través de la acción del receptor de
estrógenos.
En segundo lugar, utilizamos el modelo de cultivo desarrollado, para
estudiar aspectos relacionados con la polaridad celular y la carcinogénesis.
Recientemente se ha sugerido que el establecimiento de la polarización
celular podría actuar por si misma como un supresor tumoral, mientras que la
pérdida de dicha polarización es un reconocido marcador de la progresión
tumoral. Por este motivo, y utilizando nuestro sistema de cultivo, quisimos
caracterizar la acción del TGF-β tanto en células polarizadas como en no
polarizadas. En este trabajo demostramos que la pérdida de la polaridad,
cambia la respuesta pro-apoptótica del TGF-β en células polarizadas a una
respuesta asociada a la progresión del fenotipo tumoral (EMT) en células no
polarizadas.
Finalmente quisimos estudiar los efectos del hiperestrogenismo en la
tumorogénesi endometrial. El hiperestrogenismo es un factor de riesgo muy
importante en el desarrollo de neoplasias endometriales. Sin embargo, no está
claro si la acción del estradiol es directa o se da mediante un efecto paracrino
de las células del estroma. Por este motivo, quisimos investigar los efectos del
estradiol en células polarizadas que crecían en un medio definido, sin la
interferencia de factores paracrinos procedentes de las células del estroma.
Gracias a nuestro estudio, hemos podido determinar que la acción del estradiol
mediante el receptor de estrógenos alpha, actúa por debajo de la acción de
PTEN en la tumorogénesis endometrial.
Hace más de una década se sugirió, por primera vez, la relevancia de la
polarización celular a la hora de entender los mecanismos involucrados en la
morfogénesis celular así como la progresión tumoral. Sin embargo, hoy en día
todavía se desconocen muchos de los mecanismos involucrados en estos
procesos. En este contexto, nuestro trabajo es importante porque: por primera
vez hemos generado un cultivo en 3D de células no transformadas, hemos
determinado cuáles son los factores extracelulares involucrados en el
mantenimiento y formación de la cavidad luminar, hemos aportado
evidencias de que la polaridad epitelial actúa como supresor tumoral no
canónico y que el hiperestrogenismo ligado a una deficiencia en la expresión de
PTEN da lugar a un fenotipo de hiperplasia. / The endometrium is innermost glandular layer of the uterus. It functions
as a lining for the uterus. Histologically, we can distinguish two types of
epithelial cells: luminal and glandular epithelium. The epithelial tissues have
some distinct morphological features such as: apico-Basal polarity, cell-cell
specific contacts and adhesion to the basement membrane.
The first objective of this work was to establish a three dimensional
culture (3D) of mouse endometrial epithelial cells suitable for the study of
endometrial morphogenesis and carcinogenesis. Once the 3D culture protocol
was established, our next step was to analyze the influence of the extracellular
factors in the formation and maintenance of the glandular lumen. To this
regard, we have identified a new role of cytokines TNF-α and IL-1α in the
formation and maintenance of the lumen. In addition, we demonstrate that
glucocorticoids are the responsible of cytokine down-expression, in an estrogen
receptor alpha dependent manner.
Our next step was to use our culture model to study the issues related
with the cellular polarity and malignance development.
Recently it has been suggested that the establishment of cell polarization
is a potent tumor suppressor mechanism. Loss of this polarization is a wellknown
marker of tumor progression. Taking advantage of our 3D culture
system, we sought to characterize the action of TGF-β in both polarized cells
and in non-polarized. In this study, we show that loss of polarity changes the
pro-apoptotic response of TGF-β (in polarized cells) to a response associated
with tumor progression phenotype (EMT) in non-polarized cells.
Finally we wanted to study the effects of hyperestrogenism.
Hyperestrogenism represent a major risk for development of endometrial
neoplasia. However, it is unclear whether estradiol action occurs direct or
trough a paracrine effect of stromal cells. For this reason, we wanted to
investigate the effects of estradiol on polarized cells growing in a defined
medium without interference of paracrine stromal factors. With our study, we
could conclude that estradiol trough its receptor, acts as downstream mediator
on PTEN mediated tumorogenesis.
More than one decade ago, cell polarization was as an important
mechanisms involved in cellular morphogenesis and tumor progression.
However, most of the mechanisms involved in these processes are still
unknown. Our study provides new insights about mechanisms involved in
those processes. In this context, we have generated, for the first time, a 3D
culture from untransformed cells, we have determined the extracellular factors
involved in maintaining and formation of the luminal cavity, we have provided
evidence that epithelial polarity acts as a non-canonical tumor suppressor and
PTEN deficient expression leads an exacerbated response to estrogen, which
leads to loss of cell polarity and glands structure, two alterations observed in
cancer.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:TDX_UDL/oai:www.tdx.cat:10803/78942 |
| Date | 27 January 2012 |
| Creators | Eritja Sánchez, Núria |
| Contributors | Dolcet Roca, Xavier, Guiu Guía, Xavier Matías, Universitat de Lleida. Departament de Ciències Mèdiques Bàsiques |
| Publisher | Universitat de Lleida |
| Source Sets | Universitat de Lleida |
| Language | Catalan |
| Detected Language | Spanish |
| Type | info:eu-repo/semantics/doctoralThesis, info:eu-repo/semantics/publishedVersion |
| Format | 262 p., application/pdf |
| Source | TDX (Tesis Doctorals en Xarxa) |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess, ADVERTIMENT. L'accés als continguts d'aquesta tesi doctoral i la seva utilització ha de respectar els drets de la persona autora. Pot ser utilitzada per a consulta o estudi personal, així com en activitats o materials d'investigació i docència en els termes establerts a l'art. 32 del Text Refós de la Llei de Propietat Intel·lectual (RDL 1/1996). Per altres utilitzacions es requereix l'autorització prèvia i expressa de la persona autora. En qualsevol cas, en la utilització dels seus continguts caldrà indicar de forma clara el nom i cognoms de la persona autora i el títol de la tesi doctoral. No s'autoritza la seva reproducció o altres formes d'explotació efectuades amb finalitats de lucre ni la seva comunicació pública des d'un lloc aliè al servei TDX. Tampoc s'autoritza la presentació del seu contingut en una finestra o marc aliè a TDX (framing). Aquesta reserva de drets afecta tant als continguts de la tesi com als seus resums i índexs. |
Page generated in 0.0027 seconds