La thrombasthénie de Glanzmann (TG) est une maladie caractérisée par un défaut d’agrégation plaquettaire. C’est une maladie génétique autosomale récessive causée par une anomalie du récepteur plaquettaire pour
le fibrinogène. Ce récepteur est une intégrine localisée à la surface
plasmatique qui est formée par un complexe composé des sous‐unités αIIb et β3. Nous avons identifié un cheval démontrant les caractéristiques clinicopathologiques de la TG. Des études par cytométrie de flux ont révélé une déficience au niveau de la portion αIIb du récepteur. Ces résultats suggèrent une ou plusieurs mutations au niveau du gène codant pour cette portion αIIb
du récepteur. L’objectif de notre étude était de caractériser l’ADNc et l’ADN
génomique codant pour les gènes ITGA2B et ITGB3 codant respectivement pour les deux sous‐unités αIIb et β3 chez un cheval atteint de la TG. L’ADNc a été synthétisé par RT‐PCR en utilisant l’ARN total récolté à partir des plaquettes. L’ADN génomique a été extrait à partir des globules blancs. Des
amorces spécifiques ont été utilisées pour l’amplification par PCR d’ITGA2B et d’ITGB3. Les séquences d’ADNc et d’ADN génomique de notre patient ont été caractérisées par séquençage et comparées par l’analyse BLAST
(GenBank). Une substitution d’une guanine par une cytosine a été mise en évidence au niveau de l’exon 2 d’ITGA2B amenant à la substitution d’une arginine (Arg72) par une proline (Pro72). Ce changement d’acide aminé
pourrait résulter en une conformation structurelle anormale qui amènerait à
une sous‐unité αIIb inactive. L’analyse de l’ADN génomique a démontré que ce cheval était homozygote pour cette mutation. Le séquençage de l’ADN génomique des parents et de la grand‐mère du patient a démontré que ces individus étaient hétérozygotes pour cette mutation. Le séquençage d’ITGB3
n’a démontré aucune anomalie. / Glanzmann thrombasthenia (GT) is characterized by a defect of platelet aggregation. This autosomal recessive genetic disorder is caused by an abnormality of the platelet receptor for fibrinogen. This receptor is an integrin located on the plasma membrane formed by a complex of αIIb‐β3 subunits. Recently, we identified a horse with clinical and pathological features of GT. Flow cytometry studies revealed a deficiency of the αIIb subunit suggesting the presence of one or several mutations in the gene encoding for the αIIb subunit.
The aim of this study was to describe this case of GT at the molecular level by
characterizing the cDNAs encoding for the β3 (ITGB3) and αIIb (ITGA2B) subunits. Total RNA was extracted from platelets and converted into cDNA by reverse transcription using a poly‐dT primer. Genomic DNA was
extracted from white blood cells. Specific primers for αIIb and β3 sequences were used to amplify by PCR the corresponding cDNA or genomic regions that were further characterized by sequencing and compared by BLAST analysis (GenBank). A point mutation from G to C in exon 2 of ITGA2B was
identified, causing a substitution of the expected amino acid arginine 72 (Arg72) by a proline (Pro72). This amino acid change may result in abnormal structural conformations that yield an inactive αIIb subunit. The analysis of genomic DNA showed that this horse was homozygous for the missense
mutation. The genomic DNA sequences encoding exon 2 of the dam, grand dam and the sire were heterozygous for this nucleic acid change and were clinically normal. The analysis of ITGB3 was unremarkable.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:LACETR/oai:collectionscanada.gc.ca:QMU.1866/5237 |
| Date | 12 1900 |
| Creators | Macieira Moutinho Neves, Susana Maria |
| Contributors | Bédard, Christian, Lussier, Jacques G. |
| Source Sets | Library and Archives Canada ETDs Repository / Centre d'archives des thèses électroniques de Bibliothèque et Archives Canada |
| Language | French |
| Detected Language | French |
| Type | Thèse ou Mémoire numérique / Electronic Thesis or Dissertation |
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