Thesis (Ph. D.)--Auburn University. / Abstract. Vita. Includes bibliographical references (p. 76-102).

La thrombasthénie de Glanzmann (TG) est une maladie autosomique récessive liée à undéficit quantitatif et/ou qualitatif de l’intégrine αIIbβ3, principale glycoprotéine présente à la surfacedes plaquettes. Ce complexe sert de récepteur au fibrinogène plasmatique, permettant ainsi auxplaquettes de s’agréger entre-elles. Notre étude visait à caractériser les anomalies génétiquesresponsables de TG chez 76 familles d’origine différente. Les signes hémorragiques présentés parles patients étaient principalement des épistaxis, des pétéchies, des saignements gastro-intestinauxou des ménorragies. Les mutations présentes dans les gènes ITGA2B ou ITGB3 ont été identifiéespar séquençage direct. Tous les exons, ainsi que les régions introniques flanquantes, ont étéétudiées, permettant ainsi d’identifier 78 variations génétiques, dont 57 n’avaient jamais étérapportées. Des mutations tronquantes ou de l’épissage étaient présentes dans près de la moitié descas. Les mutations faux-sens représentaient également une forte proportion des anomaliesmoléculaires retrouvées (50% environ). Le caractère délétère de ces mutations a été confirmé parl’utilisation de méthodes in silico et/ou in vitro, permettant de caractériser les domaines essentiels àla structure et à la fonction des sous-unités αIIb et β3. En termes de corrélation génotype-phénotype,notre étude n’a pas permis de mettre en évidence d’association claire entre certaines mutations et lesyndrome hémorragique présenté par les patients. Cependant, ce travail permet de mieuxcomprendre les mécanismes impliqués dans la structure et le fonctionnement de la principaleintégrine plaquettaire. / Glanzmann thrombasthenia (GT) is a rare autosomal recessive disorder characterized byquantitative and/or qualitative defect of the platelet αIIbβ3 integrin. Naturally occurring mutations inITGA2B or ITGB3 genes are responsible for the disease. Sanger sequencing analysis was applied tomutation screening of 83 diagnosed GT patients. 78 different sequence variations were identified ofwhich 57 had never been previously described. Among the novel identified mutations, truncative,missense and splice site mutations were observed. Therefore, we have identified a spectrum ofunreported mutations that may be of value to decipher the role of specific regions within αIIbβ3.

La thrombasthénie de Glanzmann (TG) est une maladie caractérisée par un défaut d’agrégation plaquettaire. C’est une maladie génétique autosomale récessive causée par une anomalie du récepteur plaquettaire pour le fibrinogène. Ce récepteur est une intégrine localisée à la surface plasmatique qui est formée par un complexe composé des sous‐unités αIIb et β3. Nous avons identifié un cheval démontrant les caractéristiques clinicopathologiques de la TG. Des études par cytométrie de flux ont révélé une déficience au niveau de la portion αIIb du récepteur. Ces résultats suggèrent une ou plusieurs mutations au niveau du gène codant pour cette portion αIIb du récepteur. L’objectif de notre étude était de caractériser l’ADNc et l’ADN génomique codant pour les gènes ITGA2B et ITGB3 codant respectivement pour les deux sous‐unités αIIb et β3 chez un cheval atteint de la TG. L’ADNc a été synthétisé par RT‐PCR en utilisant l’ARN total récolté à partir des plaquettes. L’ADN génomique a été extrait à partir des globules blancs. Des amorces spécifiques ont été utilisées pour l’amplification par PCR d’ITGA2B et d’ITGB3. Les séquences d’ADNc et d’ADN génomique de notre patient ont été caractérisées par séquençage et comparées par l’analyse BLAST (GenBank). Une substitution d’une guanine par une cytosine a été mise en évidence au niveau de l’exon 2 d’ITGA2B amenant à la substitution d’une arginine (Arg72) par une proline (Pro72). Ce changement d’acide aminé pourrait résulter en une conformation structurelle anormale qui amènerait à une sous‐unité αIIb inactive. L’analyse de l’ADN génomique a démontré que ce cheval était homozygote pour cette mutation. Le séquençage de l’ADN génomique des parents et de la grand‐mère du patient a démontré que ces individus étaient hétérozygotes pour cette mutation. Le séquençage d’ITGB3 n’a démontré aucune anomalie. / Glanzmann thrombasthenia (GT) is characterized by a defect of platelet aggregation. This autosomal recessive genetic disorder is caused by an abnormality of the platelet receptor for fibrinogen. This receptor is an integrin located on the plasma membrane formed by a complex of αIIb‐β3 subunits. Recently, we identified a horse with clinical and pathological features of GT. Flow cytometry studies revealed a deficiency of the αIIb subunit suggesting the presence of one or several mutations in the gene encoding for the αIIb subunit. The aim of this study was to describe this case of GT at the molecular level by characterizing the cDNAs encoding for the β3 (ITGB3) and αIIb (ITGA2B) subunits. Total RNA was extracted from platelets and converted into cDNA by reverse transcription using a poly‐dT primer. Genomic DNA was extracted from white blood cells. Specific primers for αIIb and β3 sequences were used to amplify by PCR the corresponding cDNA or genomic regions that were further characterized by sequencing and compared by BLAST analysis (GenBank). A point mutation from G to C in exon 2 of ITGA2B was identified, causing a substitution of the expected amino acid arginine 72 (Arg72) by a proline (Pro72). This amino acid change may result in abnormal structural conformations that yield an inactive αIIb subunit. The analysis of genomic DNA showed that this horse was homozygous for the missense mutation. The genomic DNA sequences encoding exon 2 of the dam, grand dam and the sire were heterozygous for this nucleic acid change and were clinically normal. The analysis of ITGB3 was unremarkable.

La thrombasthénie de Glanzmann (TG) est une maladie caractérisée par un défaut d’agrégation plaquettaire. C’est une maladie génétique autosomale récessive causée par une anomalie du récepteur plaquettaire pour le fibrinogène. Ce récepteur est une intégrine localisée à la surface plasmatique qui est formée par un complexe composé des sous‐unités αIIb et β3. Nous avons identifié un cheval démontrant les caractéristiques clinicopathologiques de la TG. Des études par cytométrie de flux ont révélé une déficience au niveau de la portion αIIb du récepteur. Ces résultats suggèrent une ou plusieurs mutations au niveau du gène codant pour cette portion αIIb du récepteur. L’objectif de notre étude était de caractériser l’ADNc et l’ADN génomique codant pour les gènes ITGA2B et ITGB3 codant respectivement pour les deux sous‐unités αIIb et β3 chez un cheval atteint de la TG. L’ADNc a été synthétisé par RT‐PCR en utilisant l’ARN total récolté à partir des plaquettes. L’ADN génomique a été extrait à partir des globules blancs. Des amorces spécifiques ont été utilisées pour l’amplification par PCR d’ITGA2B et d’ITGB3. Les séquences d’ADNc et d’ADN génomique de notre patient ont été caractérisées par séquençage et comparées par l’analyse BLAST (GenBank). Une substitution d’une guanine par une cytosine a été mise en évidence au niveau de l’exon 2 d’ITGA2B amenant à la substitution d’une arginine (Arg72) par une proline (Pro72). Ce changement d’acide aminé pourrait résulter en une conformation structurelle anormale qui amènerait à une sous‐unité αIIb inactive. L’analyse de l’ADN génomique a démontré que ce cheval était homozygote pour cette mutation. Le séquençage de l’ADN génomique des parents et de la grand‐mère du patient a démontré que ces individus étaient hétérozygotes pour cette mutation. Le séquençage d’ITGB3 n’a démontré aucune anomalie. / Glanzmann thrombasthenia (GT) is characterized by a defect of platelet aggregation. This autosomal recessive genetic disorder is caused by an abnormality of the platelet receptor for fibrinogen. This receptor is an integrin located on the plasma membrane formed by a complex of αIIb‐β3 subunits. Recently, we identified a horse with clinical and pathological features of GT. Flow cytometry studies revealed a deficiency of the αIIb subunit suggesting the presence of one or several mutations in the gene encoding for the αIIb subunit. The aim of this study was to describe this case of GT at the molecular level by characterizing the cDNAs encoding for the β3 (ITGB3) and αIIb (ITGA2B) subunits. Total RNA was extracted from platelets and converted into cDNA by reverse transcription using a poly‐dT primer. Genomic DNA was extracted from white blood cells. Specific primers for αIIb and β3 sequences were used to amplify by PCR the corresponding cDNA or genomic regions that were further characterized by sequencing and compared by BLAST analysis (GenBank). A point mutation from G to C in exon 2 of ITGA2B was identified, causing a substitution of the expected amino acid arginine 72 (Arg72) by a proline (Pro72). This amino acid change may result in abnormal structural conformations that yield an inactive αIIb subunit. The analysis of genomic DNA showed that this horse was homozygous for the missense mutation. The genomic DNA sequences encoding exon 2 of the dam, grand dam and the sire were heterozygous for this nucleic acid change and were clinically normal. The analysis of ITGB3 was unremarkable.