La thrombasthénie de Glanzmann (TG) est une maladie autosomique récessive liée à undéficit quantitatif et/ou qualitatif de l’intégrine αIIbβ3, principale glycoprotéine présente à la surfacedes plaquettes. Ce complexe sert de récepteur au fibrinogène plasmatique, permettant ainsi auxplaquettes de s’agréger entre-elles. Notre étude visait à caractériser les anomalies génétiquesresponsables de TG chez 76 familles d’origine différente. Les signes hémorragiques présentés parles patients étaient principalement des épistaxis, des pétéchies, des saignements gastro-intestinauxou des ménorragies. Les mutations présentes dans les gènes ITGA2B ou ITGB3 ont été identifiéespar séquençage direct. Tous les exons, ainsi que les régions introniques flanquantes, ont étéétudiées, permettant ainsi d’identifier 78 variations génétiques, dont 57 n’avaient jamais étérapportées. Des mutations tronquantes ou de l’épissage étaient présentes dans près de la moitié descas. Les mutations faux-sens représentaient également une forte proportion des anomaliesmoléculaires retrouvées (50% environ). Le caractère délétère de ces mutations a été confirmé parl’utilisation de méthodes in silico et/ou in vitro, permettant de caractériser les domaines essentiels àla structure et à la fonction des sous-unités αIIb et β3. En termes de corrélation génotype-phénotype,notre étude n’a pas permis de mettre en évidence d’association claire entre certaines mutations et lesyndrome hémorragique présenté par les patients. Cependant, ce travail permet de mieuxcomprendre les mécanismes impliqués dans la structure et le fonctionnement de la principaleintégrine plaquettaire. / Glanzmann thrombasthenia (GT) is a rare autosomal recessive disorder characterized byquantitative and/or qualitative defect of the platelet αIIbβ3 integrin. Naturally occurring mutations inITGA2B or ITGB3 genes are responsible for the disease. Sanger sequencing analysis was applied tomutation screening of 83 diagnosed GT patients. 78 different sequence variations were identified ofwhich 57 had never been previously described. Among the novel identified mutations, truncative,missense and splice site mutations were observed. Therefore, we have identified a spectrum ofunreported mutations that may be of value to decipher the role of specific regions within αIIbβ3.

L’hémostase primaire est un processus permettant la formation d’un clou plaquettaire qui sera stabilisé par un réseau de fibrine. Ce caillot est également consolidé grâce à des phases tardives de l’hémostase primaire résultant des fonctions plaquettaires ; il s’agit principalement de la rétraction qui diminue la taille du caillot afin de le stabiliser. Cette phase est déclenchée par une signalisation « outside-in », consécutive à l’activation de l’intégrine αIIbβ3 et à l’agrégation plaquettaire, et est dépendante d’une réorganisation du cytosquelette. Le premier objectif de ce travail a été d’étudier la signalisation impliquée dans la rétraction, et en particulier l’implication des protéines ROCK, MLCK, Rac-1 et de l’actine dans l’activité de la chaine légère de la myosine (MLC) . MLC est en effet une protéine clé de la réorganisation du cytosquelette. Nous avons mis en évidence une phosphorylation biphasique de MLC dont le deuxième pic, corrélé à la rétraction, est dépendant de Rac1 et de la polymérisation de l’actine. Cette étude a été appliquée à une pathologie, le syndrome de Lowe. Il s’agit d’une maladie génétique rare, également appelée OCRL (Oculo cérébro rénal de Lowe) en référence aux organes majoritairement touchés. Suite à l’observation d’événements hémorragiques per et postopératoires suggérant une instabilité du caillot et l’observation dans une étude précédente d’un temps d’occlusion allongé au PFA100®, nous avons mis en place une étude sur 15 patients et 15 témoins pour lesquels nous avons étudié les différentes phases de l’hémostase primaire. Outre une anomalie et un retard de maturation des mégacaryocytes, nous avons mis en évidence pour la première fois chez ces patients un défaut de la voie « outside-in » responsable d’une anomalie de l’étalement plaquettaire et de la rétraction du caillot. Ce défaut de rétraction, dû à un défaut d’activation de MLC, pourrait être en partie responsable des événements hémorragiques observés chez ces patients. / Primary hemostasis is a mechanism allowing platelet clot formation that is thereafter stabilized by a fibrin network. Fibrin clot is also consolidated following post occupancy events, mainly clot retraction that decrease clot size and thus strengthen it. This phase is triggered by « outside-in » signaling. It is consecutive to αIIbβ3 integrin activation and platelet aggregation, dependent on cytoskeleton organization. Our first objective was to investigate signaling events underlying retraction, and particularly the involvement of ROCK, MLCK, Rac-1, and actin in MLC (Myosin Light Chain) phosphorylation. Indeed, MLC, involved in cytoskeleton rearrangement, is a key protein of this mechanism. We described a MLC biphasic phosphorylation profile, which second peak was dependent of Rac1 and actin polymerization. In a second part, we studied clot retraction signaling in patients with the Lowe syndrome. It is a rare genetic disease, caused by absence of OCRL (oculo cerebro renal of Lowe) protein in reference to the majority of affected organs. The rationale of this study was a previous observation of hemorrhagic events during and after surgeries, suggesting clot instability. A thrombopathy was suggested by a closure time lengthening in the PFA-100 system. The study enrolled 15 patients and 15 controls. Besides a defect of megakaryocyte maturation, we described a defect of « outside-in » signaling responsible for spreading and clot retraction abnormality. This retraction defect, caused by a MLC activity defect, could be partly responsible for hemorrhagic events reported in these patients.