INTRODUCCIÓN: La endometriosis, definida como la presencia de tejido endometrial fuera del
útero, es una de las enfermedades ginecológicas benignas más frecuentes. La endometriosis es una entidad
multifactorial y poligénica en la que tanto factores endometriales como peritoneales, relacionados con los
sistemas de activación del plasminógeno (PA) y de las metaloproteasas (MMPs) y la angiogénesis, pueden
estar implicados en esta enfermedad.
OBJETIVO: Analizar los niveles de mRNA y proteína de factores angiogénicos (factor de
crecimiento del endotelio vascular, VEGF-A y trombospondina-1, TSP-1) y componentes de los sistemas
PA (uroquinasa, uPA; inhibidor del PA tipo 1, PAI-1) y de las MMPs (MMP-3; inhibidor de MMPs de tipo
1, TIMP-1) en tejido endometriósico y endometrio de mujeres con y sin endometriosis. También se
estudiaron los niveles proteicos de estos componentes en el líquido peritoneal (LP) de pacientes y
controles. Por otra parte, se estudiaron los polimorfismos 4G/5G del gen del PAI-1, 5A/6A del gen de la
MMP-3 y tres polimorfismos funcionales del gen del VEGF-A (-460C/T, +405G/C y 936C/T) en pacientes
y controles y se analizó la influencia de estos polimorfismos en la expresión de PAI-1, MMP-3 y VEGF-A
en tejido endometrial y LP. Por último, se evaluó la influencia del LP sobre la expresión de factores
proteolíticos y angiogénicos en cultivos de células endometriales procedentes de pacientes y controles.
MÉTODOS: Los niveles de mRNA se cuantificaron mediante qRT-PCR en tiempo real y los niveles
proteicos mediante ELISA. El polimorfismo 4G/5G del gen del PAI-1 se evaluó mediante PCR con
cebadores específicos de alelo. El polimorfismo 5A/6A de la MMP-3 y los polimorfismos del VEGF-A se
determinaron mediante PCR-RFLP. Por último, se aislaron y cultivaron células endometriales (de pacientes
y controles) y se trataron con LP de pacientes y controles. Posteriormente, se evaluaron los niveles de
mRNA y proteína de los factores estudiados.
RESULTADOS y CONCLUSIONES: El endometrio y el LP de las mujeres con endometriosis
mostró unos niveles de uPA, MMP-3 y VEGF-A superiores a los controles. Este incremento puede facilitar
la adhesión del tejido endometrial al peritoneo y ovario, la invasión de la matriz extracelular y la
angiogénesis, contribuyendo a la formación de las lesiones endometriósicas tempranas. El tejido
endometriósico ovárico mostró unos niveles superiores de PAI-1, TIMP-1 y TSP-1 que el endometrio, lo
que podría explicar la presencia del quiste endometriósico con ausencia de invasión al tejido ovárico
adyacente.
Las frecuencias genotípicas y alélicas del polimorfismo 4G/5G del gen del PAI-1 no difieren entre
pacientes y controles, aunque los niveles de PAI-1, en tejido endometrial y LP de controles, parecen estar
asociados con este polimorfismo.
Las pacientes mostraron una mayor frecuencia del alelo 936T, del gen del VEGF, que los controles.
Sin embargo no se encontraron diferencias en la distribución de frecuencias genotípicas y alélicas en los
otros dos polimorfismos del VEGF-A (-460C/T, +405G/C) entre pacientes y controles. Estos hallazgos
sugieren que el polimorfismo 936C/T puede estar asociado con el riesgo de padecer endometriosis, aunque
el incremento en los niveles de VEGF-A, observado en las mujeres con endometriosis, no parece estar
asociado con ninguno de los polimorfismos estudiados.
Por último, el LP de las mujeres con endometriosis indujo un incremento en los niveles de uPA y
VEGF-A en cultivos de células endometriales de pacientes y controles. Los mayores niveles de uPA y
VEGF-A se observaron en cultivos de células endometriales de pacientes tratados con LP de mujeres con
endometriosis. Por tanto, el LP induce, en las células endometriales, una mayor expresión de factores
proteolíticos y angiogénicos que pueden contribuir al desarrollo de las lesiones endometriósicas. / INTRODUCTION: Endometriosis, defined as the presence of endometrium outside the uterus, is one
of the most frequent benign gynaecological diseases. It is a multifactorial and polygenic entity in which
both endometrial and peritoneal factors, related to plasminogen activator and matrix metalloproteinase
systems and angiogenesis, can be implicated.
OBJETIVE: To analyze mRNA and protein levels of angiogenic and proteolytic factors in
endometriotic and endometrial tissues from patients and controls. The protein levels were also studied in
peritoneal fluid (PF). PAI-1 4G/5G, MMP-3 5A/6A and VEGF-A -460C/T, +405G/C and 936C/T
polymorphisms were evaluated. Finally, the influence of PF on proteolytic and angiogenic factor
expression in endometrial cell cultures (ECCs) was evaluated.
METHODS: mRNA and protein levels were quantified by real-time qRT-PCR assay and ELISA,
respectively. PAI-1 4G/5G polymorphism was determined by allele–specific PCR. MMP-3 5A/6A and
VEGF polymorphisms (-460C/T, +405G/C, and 936C/T) were determined using a PCR-RFLP assay.
Finally, ECCs were treated with PF from patients and controls.
RESULTS and CONCLUSIONS: Endometrium and PF from patients showed higher uPA, MMP-3
and VEGF-A levels than controls. This increase may facilitate the attachment of endometrial tissue to the
peritoneum and ovarian surface. This process would lead to the formation of early endometriotic lesions.
Ovarian endometrioma had higher PAI-1, TIMP-1 and TSP-1 levels than endometrium, which could
explain the finding of one endometrioma without adjacent tissue invasion.
The PAI-1 4G/5G genotypes and allele frequencies did not differ between patients and controls.
However, endometrial and peritoneal PAI-1 levels seem to be associated with PAI-1 4G/5G polymorphism
in controls.
Patients showed a higher VEGF 936T allele frequency than controls. These findings suggest that the
VEGF 936C/T polymorphism may be associated with the risk of endometriosis.
Finally, PF induced an increase in uPA and VEGF-A levels in ECCs. The highest levels were
observed in ECCs from patients with endometriosis treated with PF from women with endometriosis. So,
PF induces a higher expression of proteolytic and angiogenic factors in EECs, which could contribute to
the development of endometriotic lesions
| Identifer | oai:union.ndltd.org:TDX_UV/oai:www.tdx.cat:10803/80902 |
| Date | 15 April 2011 |
| Creators | Ramón Nuñez, Luís Andrés |
| Contributors | Estellés Cortés, Amparo, España Furió, Francisco, Gilabert Estellés, Juan, Universitat de València. Departament de Bioquímica i Biologia Molecular |
| Publisher | Universitat de València |
| Source Sets | Universitat de València |
| Language | Spanish |
| Detected Language | Spanish |
| Type | info:eu-repo/semantics/doctoralThesis, info:eu-repo/semantics/publishedVersion |
| Format | 298 p., application/pdf |
| Source | TDX (Tesis Doctorals en Xarxa) |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess, ADVERTIMENT. L'accés als continguts d'aquesta tesi doctoral i la seva utilització ha de respectar els drets de la persona autora. Pot ser utilitzada per a consulta o estudi personal, així com en activitats o materials d'investigació i docència en els termes establerts a l'art. 32 del Text Refós de la Llei de Propietat Intel·lectual (RDL 1/1996). Per altres utilitzacions es requereix l'autorització prèvia i expressa de la persona autora. En qualsevol cas, en la utilització dels seus continguts caldrà indicar de forma clara el nom i cognoms de la persona autora i el títol de la tesi doctoral. No s'autoritza la seva reproducció o altres formes d'explotació efectuades amb finalitats de lucre ni la seva comunicació pública des d'un lloc aliè al servei TDX. Tampoc s'autoritza la presentació del seu contingut en una finestra o marc aliè a TDX (framing). Aquesta reserva de drets afecta tant als continguts de la tesi com als seus resums i índexs. |
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