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Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / O presente estudo visa à adaptação de ensaios imunoenzimáticos comerciais de diagnóstico da
hepatite C para uso em amostras de sangue coletado em papel de filtro (SCPF). Foram coletadas
amostras pareadas de soro e SCPF de 411 indivíduos com média de idade de 40 anos,
provenientes de banco de sangue e três unidades de saúde. As amostras foram submetidas a dois
ensaios imunoenzimáticos (EIEs) para detecção de anticorpos anti-HCV: HCV Ab, Radim (Itália)
e ETI-AB-HCVK-4, DiaSorin (Itália); e a dois EIEs para detecção simultânea de antígeno core
do HCV e anticorpos anti-HCV, Monolisa
TM
HCV Ag-Ab ULTRA, Bio-Rad (França) e Murex
HCV Ag/Ab Combination, Abbott (África do Sul). A detecção de anti-HCV e simultânea de
antígeno e anticorpos anti-HCV em amostras de soro foi feita conforme recomendações dos
fabricantes, e em SCPF foram avaliados os parâmetros, tampão de eluição, volumes de amostra,
de diluente de amostra e de conjugado, tempo de incubação da amostra e valor do ponto de corte
(PC). Após otimização desses parâmetros foram determinados os valores de sensibilidade (S),
especificidade (E), concordância (valor de kappa), limite de detecção do teste, valores preditivos
positivo (VPP) e negativo (VPN), precisão intraensaio e interensaio. A estabilidade das amostras
de SCPF foi avaliada em diferentes condições ambientais (22-26ºC, 2-8°C e -20°C). Como
resultado, o tampão PBS/BSA 0,5% foi selecionado para eluição das amostras de SCPF e
estabelecido um aumento no volume de amostra para todos os fabricantes. Os tempos de
incubação e os volumes de conjugado seguiram a recomendação dos fabricantes. Para o EIE
HCV Ab os valores determinados foram S = 97,50%, E = 99,46%, kappa (k)= 0,959, VPP =
64,59% e VPN = 99,97%, para uma prevalência de doença de 1% na população. Para o EIE ETI-AB-HCVK-4, o PC foi estabelecido pela curva ROCe observou-se S = 88,89%, E = 98,89%, k=
0,875, VPP = 44,71% e VPN = 99,89%. O PC do EIE Monolisa
TM
HCV Ag-Ab ULTRA foi
obtido pela curva ROCe verificou-se S = 95,12%, E =100%, k= 0,959, VPP = 100% e VPN =
99,95%. O PC para o EIE Murex HCV Ag/Ab Combinationfoi determinado pela média dos
valores de densidade ótica (D.O.) das amostras de SCPF correspondentes àquelas de soro
negativas no teste, acrescido de três desvios padrão proporcionando S = 78,05%, E = 99,43%, k=
0,838, VPP = 58,04% e VPN = 99,78%. O limite de detecção mostrou reatividade até a diluição
de 1/10.000 para EIE HCV Ab e EIE ETI-AB-HCVK-4 e até 1/1.000 com EIE Monolisa
TM
HCV
Ag-Ab ULTRA e EIE Murex HCV Ag/Ab Combination. Os resultados das amostras de SCPF
obtiveram erro total inferior a 17% e as mesmas mantiveram-se estáveis nas diferentes condições de armazenamento por 60 dias. Os resultados obtidosnos EIE HCV ab e EIE Monolisa TM HCV Ag-Ab ULTRA mostraram-se mais concordantes com os observados com as amostras de soro, indicando melhor desempenho desses ensaios em amostras de SCPF. / The present study aims at adaptation of commercial enzyme immunoasssays for diagnosis of
hepatitis C to be used with dried blood spots (DBS). Paired serum and DBS samples from 411
individuals with mean age of 40 years, were collected at Blood Center and three out patient units.
Samples were tested for the detection of anti-HCV antibodies by using two enzyme
immunoassays (EIAs): HCV Ab, Radim (Italy) and ETI-AB-HCVK-4, DiaSorin (Italy); and two
EIAs for the simultaneous detection of hepatites C virus (HCV) core antigen and anti-HCV
antibodies: Monolisa
TM
HCV Ag-Ab ULTRA, Bio-Rad (France) and Murex HCV Ag/Ab
Combination, Abbott (South Africa). Anti-HCV detection and simultaneous detection of HCV
core antigen and anti-HCV antibodies in serum sample were perfomed according to the
manufacture’s recommendations. In DBS samples parameters such as elution buffer, sample,
diluent, and conjugate volumes, incubation period, and cut off (CO) values were evaluated. After
optimization of these parameters, values of sensitivity, specificity, inter-rater agreement (kappa
value), detection limit, intra- and inter-assay precision were determinated. Stability of DBS
samples was investigated in different conditions (22-26ºC, 2-8°C e -20°C). As results, PBS/BSA
0,5% buffer was chosen as elution buffer in DBS samples and an increased volume of the
samples in all EIAs was established. Incubation duration and volume of conjugate were in
accordance with manufacturer’s recommendations. With EIA HCV Ab values sensitivity of
97,50%, specificity 99,46%, inter-rate agreement 0,959, positive predictive value 64,59%, and
negative predictive value (1% of disease prevalence) 99,97% were observed. For the EIA ETI-AB-HCVK-4 best cut-off values were obtained from ROC curve and observed values were
sensitivity 88,89%, specificity 98,89%, inter-rate agreement 0,875, positive predictive value
44,71%, and negative predictive value 99,89%. For the EIA Monolisa
TM
HCV Ag-Ab ULTRA
best cut-off values were obtained from ROC curve with sensitivity of 95,12%, specificity 100%,
inter-rate agreement 0,959, positive predictive value 100%, and negative predictive value
99,95%. For the EIA Murex HCV Ag/Ab Combination best cut-off values were obtained by
calculating the average of optical density of DBS samples correspondent to those with negative
results in serum plus three standard deviations, resulting in a sensitivity of 78,05%, specificity of
99,43%, inter-rate agreement of 0,838, positive predictive value of 58,04%, and a negative
predictive value of 99,78%. The lower limit of HCV Ab and ETI-AB-HCVK-4 tests in DBS was
1/10.000, and for Monolisa
TM
HCV Ag-Ab ULTRA and Murex HCV Ag/Ab Combination was
1/1.000. Total error of DBS results was below 17% and all DBS samples maintained stable in all
storage conditions for 60 days. Results obtained with EIE HCV Ab and EIA Monolisa
TM
HCV
Ag-Ab ULTRA were found to be more concordant with those observed for serum samples,
indicating a better performance of theses assays inDBS samples.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.arca.fiocruz.br:icict/5916 |
| Date | January 2011 |
| Creators | Brandão, Camille Petruccio Urago |
| Contributors | Almeida, Adilson José de, Silva e Sá, Glória Regina da, Paula, Vanessa Salete de, Villar, Livia Melo, Ferreira, José Antônio Sá |
| Publisher | Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos. |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ, instname:Fundação Oswaldo Cruz, instacron:FIOCRUZ |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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