O Tabagismo é uma das principais causas de doenças crônicas não transmissíveis, afetando cerca de 1,6 bilhões de pessoas até 2030. Políticas de controle do tabagismo foram criadas para evitar a contaminação de indivíduos não fumantes pela poluição tabagística ambiental. Descritas principalmente no pulmão, pouco se sabe sobre a ação da fumaça do cigarro no sistema nervoso central (SNC). O presente estudo tem como objetivo avaliar os efeitos da exposição à fumaça do cigarro, por 15 dias consecutivos, em um processo de inflamação sistêmica induzida por LPS. Para tanto, camundongos C57BL/6 foram expostos a uma mistura de fumaça central e lateral do cigarro referência 3R4F (Universidade de Kentucky, EUA). No último dia, os animais foram desafiados com LPS iv. (0,1 µg/animal) ou salina, formando os grupos CO – controle, FU – fumaça do cigarro, LPS – desafio com LPS e FPS – fumaça do cigarro e desafio com LPS. As amostras foram processadas de maneira a realizar as análises de RT-PCR para os primers IL-6, IL-1β, TNF-α, TLR2, TLR4 e iNOS, além da dosagem por ELISA das citocinas IL-6, IL-10, IL-1β e TNF-α e western blot para a proteína P65. Nossos resultados demonstraram um aumento da transcrição dos genes TLR2, TLR4 e iNOS, em todas as estruturas analisadas no período de 2 horas de eutanásia após o desafio com LPS no grupo FPS em relação a todos os outros grupos estudados. Já no período de 4 horas após o desafio foi possível observar um aumento dos genes IL-1β e TNFα em ambos grupos que receberam o desafio com o LPS no hipocampo, estriado, córtex e cerebelo, sugerindo que a influência da fumaça do cigarro se de apenas 2 horas após o desafio, uma vez que no período de 4 horas observamos apenas o efeito do LPS. Os resultados da dosagem de citocinas sugerem que, no período de 4 e 6 horas após o desafio, a citocina anti-inflamatória IL-10 está diminuída no hipocampo e no córtex pré-frontal no grupo FPS em relação a todos os outros grupos estudados. Porém é possível observar um aumento estatisticamente significativo da mesma citocina no cerebelo para o grupo exposto apenas à fumaça do cigarro. Nossos dados sugerem que o processo inflamatório no SNC ocorra de maneira diferenciada dependendo da região estudada, e do período analisado. / Cigarette smoking is a major cause of chronic non-communicable diseases, affecting approximately 1.6 billion people up to 2030. Tobacco control policies were created in order to prevent contamination of non-smokers by environmental tobacco smoke. Described primarily in the lung, little is known about the action of cigarette smoke in the central nervous system (CNS). The present study aims to evaluate the effects of cigarette smoke exposure for 15 consecutive days in a process of systemic inflammation induced by LPS. To this so, C57BL/6 mice were exposed to a mixture of mainstream and sidestream cigarette smoke reference 3R4F (University of Kentucky, USA). In the last day, animals were challenged with LPS iv. (0.1 µg/animal) or saline and divided into the following groups: CO - control, FU - cigarette smoke, LPS - LPS challenge and FPS - cigarette smoke and LPS challenge. The samples were processed in order to perform the RT-PCR analysis for IL-6, IL-1β, TNF-α, TLR2, TLR4 and iNOS primers, ELISA assay of IL-6, IL-10, IL-1β and TNF-α and western blot for p65. Our results showed an increase in transcription of TLR2, TLR4 and iNOS genes in all structures analyzed within 2 hours of euthanasia after LPS challenge in the FPS group compared to all other groups. Beside this 4 hours after challenge was observed an increase of IL-1β and TNF genes in both groups that received the challenge with LPS in the hippocampus, striatum, cortex and cerebellum, suggesting that the influence of cigarette smoke can be observed only 2 hours after the challenge, justified since in a time period of 4 hours we can only observe the effect of LPS. The results suggest that cytokine assay, between 4 and 6 hours after challenge, the anti-inflammatory cytokine IL-10 is decreased in FPS group in the hippocampus and prefrontal cortex. But it is possible to observe a statistically significant increase in the same cytokine in the cerebellum exposed only to cigarette smoke group. Our data suggest that the inflammatory process in the CNS occurs differently depending on the region studied, and the period analyzed.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:usp.br/oai:teses.usp.br:tde-20102014-175459 |
| Date | 21 August 2014 |
| Creators | Durão, Ana Carolina Cardoso dos Santos |
| Contributors | Marcourakis, Tania |
| Publisher | Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP |
| Source Sets | Universidade de São Paulo |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | Dissertação de Mestrado |
| Format | application/pdf |
| Rights | Liberar o conteúdo para acesso público. |
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