CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / FAPEMIG - Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Na presente tese foram desenvolvidas três plataformas para a construção de
biossensores visando o diagnóstico molecular da hepatite C, hepatite B e artrite
reumatoide, por técnicas eletroquímicas, ópticas e microscópicas, usando
amostras reais. Os genossensores para hepatites C e B foram desenvolvidos sobre
a superfície de um eletrodo de ouro modificado com nanomateriais, sendo esses o
óxido de grafeno e o óxido de grafeno reduzido, respectivamente. Em todos os
biossensores propostos a interação da sonda com o alvo foi efetivamente
verificada pelas diferentes técnicas. No caso do genossensor para hepatite C, o
óxido de grafeno foi modificado quimicamente com etilenodiamina e apresentou
limites de detecção e quantificação de 1:483 (v/v) e 1:145 (v/v), respectivamente,
usando amostras de soro de pacientes positivos. A interação da sonda específica
do HCV: gRNA causou uma redução na amplitude de resposta de corrente de
cerca de 2,9 vezes quando comparada ao controle negativo, usando a VPD. O
genossensor para a hepatite B a sonda foi imobilizada sobre eletrodo de ouro
contendo óxido de grafeno reduzido, ouro descoberto e nanoparticulas de ouro. A
análise usando VPD indica que a adição de DNA genômico de HBV provocou um
aumento de cerca de 1,4 vezes na amplitude de corrente de pico quando
comparado ao controle negativo. Em adição, análises de SPR mostraram que as
amostras positivas de HBV resultaram em uma alteração de cerca de 15 vezes em
comparação com as amostras negativas. No biossensor desenvolvido para o
diagnóstico da artrite reumatoide foi utilizado um eletrodo de grafite modificado com
um filme poli(3-hidroxibenzóico), no qual foi imobilizado um peptídeo mimético que
reconhece o anticorpo anti-CAIII. O sensor mimético desenvolvido permitiu a
distinção entre amostras positivas e negativas para a artrite reumatóide, uma vez
que apresentou uma diminuição expressiva no sinal de corrente de cerca de 2,2
vezes, quando comparado ao soro negativo. Assim, foi possível desenvolver
plataformas analíticas, seletivas e específicas fornecendo novas abordagens para
o diagnóstico clínico e aplicações point-of-care para o monitoramento de doenças
inflamatórias e infecciosas. / In the present thesis, three biosensing platforms aiming the molecular diagnosis of
hepatitis C, hepatitis B and rheumatoid arthritis were developed by electrochemical,
optical and microscopic techniques using real samples. The genosensors for the
diagnosis of hepatitis C and B were developed on a gold electrode modified with
nanomaterials, being these graphene oxide and reduced graphene oxide,
respectively. In all proposed biosensors the interaction of the probe with the target
was effectively verified by the different techniques. In the case of the genossensor
for hepatitis C, graphene oxide was chemically modified with ethylenediamine and
showed limits of detection and quantification of 1:483 (v/v) and 1:145 (v/v),
respectively, using serum samples from positive patients. The interaction of the
HCV probe and the gRNA caused a reduction in current response amplitude of
about 2.9 fold as compared to the negative control, using the DPV. The
genossensor for hepatitis B probe was immobilized on a gold electrode containing
reduced graphene oxide, gold disks and gold nanoparticles. Analysis using DPV
indicates that the addition of HBV gDNA caused an increase of about 1.4 times in
peak current amplitude, when compared to the negative control. In addition, SPR
analyzes showed that positive samples of HBV resulted in a change of about 15-
fold compared to negative samples. In the biosensor developed for the diagnosis
of rheumatoid arthritis, a graphite electrode modified with a poly (3-hydroxybenzoic)
film was used, in which a mimetic peptide that recognizes the anti-CAIII antibody
was immobilized. The developed mimetic sensor allowed the distinction between
positive and negative samples for rheumatoid arthritis, since it presented an
decrease in the current signal of about 2.2 times, when compared to the negative
serum. Thus, it was possible to develop analytical, selective and specific platforms,
providing new approaches for clinical diagnosis and point-of-care applications, for
the monitoring of inflammatory and infectious diseases. / Tese (Doutorado)
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/urn:repox.ist.utl.pt:RI_UFU:oai:repositorio.ufu.br:123456789/20919 |
| Date | 28 July 2017 |
| Creators | Oliveira, Danielle Alves de |
| Contributors | Madurro, João Marcos, Madurro, Ana Graci Brito, Wohnrath, Karen, Pereira, Arnaldo Cesar, Dechichi, Paula, Silva, Nilson Penha |
| Publisher | Universidade Federal de Uberlândia, Programa de Pós-graduação em Genética e Bioquímica, Brasil |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFU, instname:Universidade Federal de Uberlândia, instacron:UFU |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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