L'environnement hémodynamique des cellules endothéliales est un stimulus capital pour l'activation et le maintien de leurs fonctions. Les vaisseaux sanguins sont constamment soumis aux forces hémodynamiques sous forme de tension et de forces de cisaillement et ces forces font partie intégrante de l'environnement physiologique des cellules endothéliales. La force de cisaillement présente à l'interface sang-paroi vasculaire agit au niveau de l'endothélium et influence la biologie des cellules endothéliales. La présence de ces forces est souvent négligée dans les modèles in vitro traditionnels d" étude de l'endothélium. Une simple couche de cellules, en deux dimensions, dans un environnement statique s'éloigne de l'environnement natif des cellules endothéliales. La méthode d'autoassemblage développée dans notre laboratoire a permis de mettre au point un modèle in vitro d'étude de l'endothélium humain dans des conditions plus physiologiques. Ce modèle appelé matrice fibroblastique tubulaire est formé de matrice extracellulaire endogène, tridimensionnelle et de forme tubulaire. Ces caractéristiques permettent la culture de cellules endothéliales humaines sur une matrice endogène en plus de les exposer à un flux hémodynamique physiologique. L'objectif de ces travaux était d'évaluer la réponse au flux hémodynamique des cellules endothéliales cultivées dans ce modèle. Après une période d'exposition de 4 heures au flux, les observations microscopiques de l'endothélium démontrent des changements de morphologie des cellules endothéliales qui se rapproche de la réalité in vivo. Nous avons observé un alignement et un étirement des cellules parallèles à la direction du flux et un réarrangement du cytosquelette par la formation de fibres de stress également parallèles à la direction du flux. De plus, nous n'avons pas observé de décollement des cellules par le flux, indiquant l'affinité du substrat de matrice extracellulaire. Nous avons analysé l'influence de l'exposition au flux sur l'expression de 7 gènes impliqués dans la biologie endothéliale : PECAM, eNOS, ETB l , PAI-1, tPA, VECAD et vWF. Nous n'avons pas observé de différences significatives des niveaux d'expression de ces gènes entre la condition statique et dynamique. Le modèle de la matrice fibroblastique tubulaire possède un potentiel certain pour l'étude des cellules endothéliales dans un environnement hémodynamique physiologique. Son utilisation pourrait profiter à plusieurs domaines d'étude impliquant les cellules endothéliales. / The hemodynamic environment of endothelial cells (EC) is a major stimulus for their functions and maintenance. Blood vessels are constantly exposed to hemodynamic forces in form of tension and shear stress. These forces are part of the natural environment of blood vessels and EC. The shear stress present at the blood-vessel wall interface acts directly on the endothelium and modulate its functions at several levels. The hemodynamic environment is often neglected with traditional in vitro models of the endothlium. A simple layer of EC. in two dimensions, in a static environment is far away from the native physiological conditions. The self-assembly method. developed in our laboratory. open the door for a new in vitro model of the human endothelium which can be study under more physiological conditions. This model is composed of fibroblastic three dimensional tubular extracellular matrix (FTM). Its features allow us to culture human EC on an endogenous matrix and to expose them to a physiological flow. In order to study the response of human EC under shear stress in our FTM, the endothelialized FTMs were submitted to static and flow conditions for 4 hours in an hemodynamic bench. Following flow experiments, microscopic observations of the endothelium show changes of cell morphology which approach in vivo reality. We observed an alignment and a stretching of the cells parallel to the flow direction. We also observed a rearrangement of the cytoskeleton by actin stress fibers formation parallel to flow direction. Moreover, we did not observe any cell removed by the flow indicating the affinity for the extracellular matrix. We analyzed the influence of hemodynamic flow on the expression of 7 genes involved in EC biology: PECAM, eNOS, ET-B1, PAI-1, tPA, VECAD and vWF. We did not observe any significant differences induced by the flow in the expression levels of these genes. The FTM model has an undeniable potential for EC studies under a physiological hemodynamic environment and several fields involving EC could benefit from it.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:LAVAL/oai:corpus.ulaval.ca:20.500.11794/20064 |
| Date | 13 April 2018 |
| Creators | Charron, Patrick |
| Contributors | Auger, François A. |
| Source Sets | Université Laval |
| Language | French |
| Detected Language | French |
| Type | mémoire de maîtrise, COAR1_1::Texte::Thèse::Mémoire de maîtrise |
| Format | 95 f., application/pdf |
| Rights | http://purl.org/coar/access_right/c_abf2 |
Page generated in 0.0025 seconds