Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2009. / Submitted by Elna Araújo (elna@bce.unb.br) on 2010-05-06T20:46:13Z
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Previous issue date: 2009-02-16 / O objetivo deste trabalho foi testar o efeito do resfriamento seguido da criopreservação do tecido ovariano na morfologia e ultraestrutura dos folículos préantrais suínos. Ovários de 7 porcas foram coletadas em abatedouro local. De cada ovário foram retiradas 4 finas fatias do córtex (~ 1cm2) e uma fatia foi imediatamente fixada em Carnoy (grupo controle-C.A.). As amostras foram colocadas em PBS e mantidas a 4oC por 18 horas. Após isto, uma amostra foi fixada (grupo resfriamento-RESFRI.). As outras duas amostras foram criopreservadas em 1.5 M de EG com 0.4% de sacarose em tampão PBS. Após 7 dias, as amostras foram descongeladas e o crioprotetor removido. Então, uma das amostras foi fixada (grupo criopreservação-CRIO) e as outras amostras foram colocadas em cultivo in vitro (grupo CRIOCIV) por 2h juntamente com amostras frescas de tecido ovariano (grupo controle cultivo-CCIV), e então fixadas. Para análise histológica as amostras foram desidratadas em álcool, clarificados com xileno e embebidos em parafina. Secções (5μm) foram coradas com hematoxilinaeosina (HE) e analisadas por microscopia de luz (ML). As amostras também foram processadas para microscopia eletrônica de transmissão (MET). A porcentagem de folículos morfologicamente normais (FMN) foi comparada entre os tratamentos por ANOVA e Teste de Tukey. Na análise histológica, os folículos pré-antrais do resfriamento, criopreservação e cultivo in vitro apresentaram morfologia similar ao do controle. A grande maioria dos folículos demonstrou aparência normal. A porcentagem de FMN nos grupos C.A., RESFRI, CRIO, CRIO- CIV e CCIV foram respectivamente: 839, 819, 839, 7310 e 874. Não foram encontradas diferenças significativas entre os tratamentos (P>0,05). A análise por MET, entretanto, mostrou danos irreversíveis às organelas dos folículos pré-antrais criopreservados após 18 horas de resfriamento. Os principais danos observados foram alteração na granulação do citoplasma do oócito, ruptura da membrana nuclear, inchaço das mitocôndrias com perda das cristas, desorganização das células da granulosa e descolamento destas do oócito. Em conclusão, a associação do resfriamento e criopreservação do tecido ovariano não preserva a ultraestrutura dos folículos pré-antrais suínos. __________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The aim of this work was to test the effect of cooling followed by freezing of ovarian tissue on the morphology and ultrastructure of pig preantral follicles. Ovaries from 7 gilts were collected at a local slaughterhouse. From each ovary 4 slim slices of cortex (~1cm2) were cut, and 1 slice was immediately fixed in Carnoy fixative (Control Group C.A). Samples were placed in PBS and kept at 4oC for 18 hours. After that, one sample was fixed (Chilling Group - RESFRI). The other two samples were cryopreserved in 1.5M of EG with 0.4% sucrose in PBS. After 7 days, samples were thawed and cryoprotectant was removed. Then, one of the samples was fixed (Cryopreservation Group - CRIO) and the other sample was placed in in vitro culture (Cryopreservation-CIV Group - CRIO-CIV) for 2h, together with fresh ovarian tissue samples (CIV Control Group - CCIV), and then fixed. For histological analysis samples were dehydrated in alcohol, clarified with xylene and imbedded in paraffin wax. Sections (5μm) were stained with hematoxilineosin (HE) and analyzed by light microscopy (ML). Samples were also processed for transmission electron microscopy (TEM). The percentage of morphologically normal follicles (MNF) was compared among treatments by ANOVA and Tukey test. The percentages of MNF observed under light microscopy in C.A., RESFRI, CRIO, CRIO-CIV and CCIV treatments were respectively: 839, 819, 839, 7310 e 874. No statistical difference was observed among treatments (P>0.05). The analysis by TEM, however, showed irreversible damage to the oocyte organelles of preantral follicles cryopreserved after 18 hours of cooling. Damages as alteration in granulation of ooplasm, nuclear membrane rupture, swollen mitochondria, disorganization of granulosa cells and detachment from oocyte. In conclusion, the association of colling and freezing of ovarian tissue did not preserve the ultrastructure of pig ovarian preantral follicles.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.unb.br:10482/4508 |
| Date | 16 February 2009 |
| Creators | Plácido, Juliana Caldas Pereira |
| Contributors | Lucci, Carolina Madeira |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UnB, instname:Universidade de Brasília, instacron:UNB |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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