Afin d’étudier la fonction de TFF1 (Trefoil Factor 1) dans les cancers du sein, de grandes quantités de TFF1 recombinant semblable au TFF1 humain physiologique sont indispensables.Parmi différents systèmes de production étudiés, seul TFF1 recombinant produit dans E.Coli s’est avéré avoir le bon poids moléculaire et être fonctionnel. En effet, la présence de TFF1 produit dans E.Coli a permis d’augmenter la capacité migratoire des cellules épithéliales mammaires MCF10A de 70 % au cours d’un test de reconstitution in vitro.L’étude de l’hétérodimère TFF1-GKN2 (GKN: Gastrokine2) , précédemment mis en évidence dans l’estomac humain sain, suggère que sa formation est peu spécifique. De plus, la co-exprimant TFF1 et GKN2 dans les cellules gastriques n’a pas d’impact, ni sur la prolifération, ni sur la migration cellulaire.En conclusion, seul le système d’expression bactérien permet l’obtention de TFF1 recombinant fonctionnel. Une formation et une éventuelle fonction de l’hétérodimère TFF1-GKN2 semblent peu probables. / In order to study the function of TFF1 (Trefoil Factor 1) in breast cancer, important quantities of recombinant physiologic-like TFF1 peptide is required.Among several production system studied, only E. coli produced TFF1 has a molecular weight identical to the physiological one and is active. Indeed, when compared to the negative control, recombinant TFF1 peptide produced in E. coli can increase the migratory capabilities of MCF10A (mammary epithelial cells) cells by 70% in a wound healing assay.The study of the heterodimer TFF1-GKN2 (GKN: Gastrokine2) , previously shown to form in healthy human stomach, suggest that its formation is not specific. Furthermore the co-expression of TFF1 and GKN2 in gastric cell lines did not impact migration nor proliferation of these cells.In conclusion, only the bacterial expression system (E. coli) has allowed us to obtain functional recombinant TFF1. The specific formation of TFF1-GKN2 heterodimer in vitro seems to be very weak.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:theses.fr/2013STRAJ124 |
| Date | 17 July 2013 |
| Creators | Simoes, David |
| Contributors | Strasbourg, Rio, Marie-Christine |
| Source Sets | Dépôt national des thèses électroniques françaises |
| Language | French |
| Detected Language | French |
| Type | Electronic Thesis or Dissertation, Text |
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