Um polímero de impressão molecular restrito à ligação de macromoléculas por
meio de revestimento com albumina (do inglês “restrict access moleculary imprinted
polymer coated with albumine” – RAM-MIP-BSA) foi sintetizado para a análise de
clorpromazina em plasma humano por injeção direta em cromatografia líquida
bidimensional. Primeiramente foram colocados no meio reacional o ácido metacrílico
como monômero funcional, o etileno glicol dimetacrilato como agente de ligação
cruzada, a 2,2 – azo isobutironitrila como iniciador radicalar, a clorpromazina como
molécula modelo e o clorofórmio como solvente. O sistema foi mantido sob agitação
por 60 minutos a 60°C. Depois, adicionou-se ao meio reacional hidróxi etil metacrilato
e glicidil metacrilato como monômeros hidrofílicos. Após 24 h o polímero foi recolhido,
lavado, tamisado e recoberto com albumina utilizando-se glutaraldeído como agente
reticulante bifuncional. O RAM-MIP-BSA foi empacotado em uma pré-coluna de HPLC
(high performance liquid chromatography) de 1 cm e sua capacidade de eliminação
de macromolécula foi testada obtendo-se eliminação superior a 99%. Para os demais
testes a pré-coluna foi utilizada em sistema de cromatografia líquida bidimensional. A
amostra é injetada e as macromoléculas são eliminadas enquanto o analito é retido.
Num segundo estágio o analito é eluído e conduzido para coluna analítica. Água ultrapura
e uma solução de acetonitrila:tampão acetato de sódio 0,2 mol L-1 pH 4,1 45:55
(v/v) foram empregadas como fase de extração e fase móvel respectivamente. As
análises foram executadas utilizando-se um detector UV/Vis a 313 nm. Para validação
analítica da clorpromazina foi utilizando um pool de amostra de plasma humano de
diferentes indivíduos voluntários, fortificadas em oito níveis de concentração,
contemplando assim o intervalo terapêutico de 50-300 μg L-1 segundo a FDA. O
método foi linear na faixa de 30-350 μg L-1, com r > 0,99 e limite de quantificação de
30,0 μg L-1. A precisão e exatidão intra-dias e inter-dias foram avaliadas com base no
desvio padrão relativo (DPR) e no erro relativo (E) respectivamente e todos os
resultados foram inferiores a 15% de acordo com a FDA. A recuperação foi de 80%. / A restrict access moleculary imprinted polymer coated with albumin (RAM-MIPBSA)
has been synthesized and used for direct analysis of chlorpromazine from human
plasma by using bidimensional liquid chromatography. The synthesis was carried out
in three steps. First, methacrylic acid (functional monomer), ethylene glycol
dimethacrylate (cross-linker), 2,2 azoisobutironitrile (initiator) and chlorpromazine were
dissolved in chloroform and the mixture was maintained at 60°C during 60 min. In the
second step, 2-hydroxy ethyl acrylate and glycidil (both hydrophilic co-monomers)
were added into the flask and the synthesis was processed during 24h at 60°C. The
obtained polymer was washed several times and coated with bovine serum albumin
by using glutaraldehide as cross-linker. The material presented a macromolecules
elimination ability larger than 99%. It was packed in a column (4.4 x 10 mm) and used
in a column switching system. Deionized water and 45:55 (v/v) acetonitrile:sodium
acetate buffer (pH=4.1) were employed as extraction solvent and mobile phase,
respectively. The analytical curve was built using a human plasma pool of different
volunteers, added with the drug in 8 different concentrations. The method has shown
to be linear in the range from 30 to 350 mg L-1, with r >0.99 and quantification limit of
30 mg L-1. Precision and accuracy were evaluated by using relative standard deviation
and relative error, respectively, and all the results are in accordance with FDA
recommendations. Additionally, good recoveries and selectivity were also obtained.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:10.254.254.39:tede/400 |
| Date | 23 July 2012 |
| Creators | MORAES, Gabriel de Oliveira Isac |
| Contributors | FIGUEIREDO, Eduardo Costa de, http://lattes.cnpq.br/9819015829001124, PISSETTI, Fábio Luiz, NASSUR, Maria Eugênia Queiroz |
| Publisher | Universidade Federal de Alfenas, Instituto de Química, Brasil, UNIFAL-MG, Programa de Pós-Graduação em Química |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UNIFAL, instname:Universidade Federal de Alfenas, instacron:UNIFAL |
| Rights | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
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