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Cristiane Garboggini Pinheiro Avaliação da resposta imune em camnundongos....pdf: 3469982 bytes, checksum: 4041d40a1d0e55867e25c7be92f3dd02 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-06-25T20:55:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1
Cristiane Garboggini Pinheiro Avaliação da resposta imune em camnundongos....pdf: 3469982 bytes, checksum: 4041d40a1d0e55867e25c7be92f3dd02 (MD5)
Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil / A leishmaniose visceral é uma doença parasitária causada por Leishmania chagasi. Os cães
são considerados como principais reservatórios do parasito. Uma vacina efetiva para o cão
pode contribuir para o controle da LV tanto no homem como no cão. Em um estudo prévio,
antígenos recombinantes, obtidos a partir de uma biblioteca de cDNA da forma amastigota de
Leishmania chagasi, foram selecionados a fim de serem avaliados como candidatos a
componente de uma vacina contra leishmaniose visceral canina. No presente trabalho, a
resposta imune humoral e celular de camundongos foi avaliada após injeção de alguns desses
antígenos recombinantes, em cinco diferentes protocolos de imunização. Grupos de
camundongos BALB/c foram injetados com as proteínas rLci4A-NH6 ou rLci2B-NH6,
isoladamente ou associadas aos adjuvantes saponina, ODN 1826 ou diferentes doses de um
plasmídeo codificando IL-12 murina. Além disso, animais foram sensibilizados com
plasmídeo codificando Lci2B e receberam reforço com a proteína rLci2B-NH6 associada à
saponina. Por último, os animais foram injetados com plasmídeos codificando novos
antígenos, Lci2-NT-5R-CT ou Lci2-NT-CT, e recebram reforço com as respectivas proteínas
recombinantes rLci2-NT-5R-CT-NH6 ou rLci2-NT-CT-NH6 associadas à saponina. Nesse
último protocolo, os plasmídeos utilizados continham o gene para uma proteína
transmembrana associada a lisossomos, LAMP, visando à produção in vivo de quimeras de
dos antígenos de Leishmania com LAMP, a fim de direcionar a apresentação dos peptídeos
para linfócitos T CD4+ via moléculas de MHC-II. Em um dos protocolos, os animais foram
desafiados com 1 x 107 Leishmanias para avaliação da carga parasitária no baço após
imunização. Os resultados encontrados mostraram que animais que receberam rLci4A-NH6,
isoladamente ou com diferentes doses de plasmídeo codificando IL-12, apresentaram níveis
signficantes de IgG e IgG1, ao passo que o uso do antígeno com os adjuvantes saponina ou
ODN 1826 induziu a produção de IgG, IgG2a e IgG1, além de produção de IL-5 pelo grupo
que recebeu saponina. Animais que receberam rLci2B-NH6, isoladamente ou associado aos
plasmídeos contendo inserto de IL-12, produziram IgG e IgG1 antígeno específicos e
falharam também na produção de citocinas e proliferação celular. A utilização de saponina
com esse antígeno induziu produção de IgG, IgG2a e IgG1, assim como de IFN-γ. Já o uso de
ODN 1826, induziu a produção de IgG e IgG1, favoreceu a produção de IgG2a, mas falhou na
indução de resposta imune celular significante. Por outro lado, animais que receberam
plasmídeo codificando Lci2B e reforço com a proteína associada à saponina apresentaram
uma resposta imune com predominância de anticorpos IgG2a e produção de IFN-γ por
alguns animais, a qual não conferiu proteção contra infecção pelo parasito. Por fim, a
utilização de quimeras de LAMP/Lci2-NT-5R-CT ou LAMP/Lci2-5R-CT induziu uma fraca
resposta imune humoral, com produção de IgG, IgG1 e IgG2a por alguns animais. No entanto,
a utilização da quimera LAMP/Lci2-NT-CT induziu proliferação celular e tendência a
produção de IFN-γ. Em conclusão, nenhum dos cinco protocolos utilizados foi capaz de
induzir uma resposta imune específica predominantemente celular do tipo Th1 ou capaz de
conferir proteção contra infecção dos animais. / Visceral leishmaniasis is a disease caused by Leishmania chagasi. Dogs are the main
reservoir of the parasite. A canine vaccine may contribute to the desease control in humans
and dogs. In a previous study, recombinant antigens were selected from a cDNA library of
Leishmania chagasi amastigotes in order to be evaluated as components of a vaccine against
canine visceral leishmaniasis. In this study, five immunization protocols were assessed in
mice with some of these antigens. BALB/c mice were injected with either rLci4A-NH6 or
rLci2B-NH6 proteins, associated or not with the adjuvants saponin, ODN 1826 and different
doses of a plasmid encoding murine IL-12 (pIL-12). Moreover, animals were primed with a
plasmid encoding Lci2B (pLci2B) and boosted with rLci2B combined with saponin. Finally,
all mice were primed with new antigens, Lci2-NT-5R-CT or Lci2-NT-CT, and they were
boosted with the following recombinant proteins rLci2-NT-5R-CT-NH6 or rLci2-NT-CTNH6
associated with saponin. In this late experiment, the used plasmids had an insert of a
lisossome associated membrane protein, LAMP, to produce in vivo chimeras composed of
LAMP with the antigens and to direct the presentation of the peptides to CD4+ T cell through
MHC-II molecules. The humoral immune response was assessed by antibodies production
(IgG, IgG1 and IgG2a) in animal serum samples and the cellular immune response by cellular
proliferation and cytokine production (IFN-γ and IL-5). The results showed that animals that
were injected with rLci4A-NH6 alone or combined with pIL-12 generated IgG and IgG1
specific antibodies, while others that received saponin and ODN 1826 as adjuvants produced
IgG, IgG2a and IgG1. Furthermore, IL-5 was detected in rLci4A-NH6/saponin group, but
only in one of two experiments. Animals that were injected with rLci2B-NH6, alone or
associated with pIL-12, presented IgG and IgG1 antibodies but no cellular immune response.
The saponin used as adjuvant induced IgG, IgG2a and IgG1 antibodies, as well as IFN-γ. The
use of ODN 1826 induced IgG and IgG1, and favored IgG2a production, but failed in
inducing IFN-γ. On the other hand, animals that were primed with pLci2B and boosted with
the protein associated with saponin produced IgG IgG1 and more intensively IgG2a, and only
some animals produced IFN-γ. Nevertheless, such immune response did not protect the
animals against the parasite infection. At last, LAMP/Lci2-NT-5R-CT or LAMP/Lci2-5R-CT
chimeras induced a weak humoral immune response, in which IgG, IgG1 and IgG2a
antibodies were detected in only a few animals. However, mice that were injected with
LAMP/Lci2-NT-CT presented cellular proliferation and some animals produced IFN-γ. In
conclusion, in spite of the fact that the antigens are immunogenic in a murine model, none of
the used protocols elicited an intense Th1 cellular immune response or a protective one.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.arca.fiocruz.br:icict/4151 |
| Date | January 2011 |
| Creators | Pinheiro, Cristiane Garboggini Melo de |
| Contributors | Oliveira, Geraldo Gileno de Sá |
| Publisher | s. n |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ, instname:Fundação Oswaldo Cruz, instacron:FIOCRUZ |
| Rights | Cristiane Garboggini Melo de Pinheiro, info:eu-repo/semantics/openAccess |
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