Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Lectins are proteins that bind specifically to carbohydrates and have important role in
modulation of the immune response. KM+ and Jacalin (JAC) are lectins from the seeds from
jackfruit (Artocarpus integrifolia) and ScLL is a lectin from the Synadenium carinatum latex.
Neospora caninum is an apicomplexan parasite that causes neuromuscular disease in dogs and
reproductive disorders in cattle, with serious economic impact on the livestock industry. The
immunestimulatory role of plant lectins has been investigated in several parasitic infections, but
not in neosporosis. This study aimed to evaluate the adjuvant effect and the immunestimulatory
potential of KM+, JAC and ScLL in immunization of mice against neosporosis. C57BL 6 mouse
groups were subcutaneously immunized three times at 15-day intervals with Neospora lysate
antigen (NLA) associated with lectins (NLA+KM, NLA+JAC and NLA+ScLL groups), NLA
alone, lectins alone (KM, JAC and ScLL groups), and PBS group (infection control). Animals
were challenged with Nc-1 isolate (2x107 tachyzoites) and evaluated for morbidity, mortality,
specific antibody response, cytokine production by spleen cells, cerebral parasite burden and
histopathological lesions. Serological assays demonstrated higher levels of IgG to N. caninum
for NLA+KM and NLA+ScLL than NLA+JAC and NLA groups. NLA+KM group induced
higher levels of IgG2a isotype whereas NLA+ScLL induced higher levels of IgG1 isotype. In all
groups, IgG1 response was higher than IgG2a response before and after challenge, but the
IgG2a/IgG1 ratio increased after challenge in NLA+KM, NLA+ScLL and KM groups. Cytokine
production after in vitro antigenic stimulation showed that NLA+KM induced high levels of
IFN-g and IL-10, presenting the highest IFN-g/IL-10 ratio, followed by NLA+ScLL group,
indicating a pattern of immune response toward Th1 type. NLA+JAC induced low levels of
these cytokines and the lowest IFN-g/IL-10 ratio in relation to other groups, indicating a profile
of Th2 type immune response. After parasite challenge, NLA+KM mice showed the highest
survival with low brain parasite burden and moderate tissue inflammation, whereas NLA+ScLL
mice presented intermediate survival with low brain parasite burden and low scores of
morbidity and inflammation. NLA+JAC group exhibited intermediate survival, but with the
highest brain parasite burden and mild inflammation. In conclusion, KM+ and ScLL lectins
showed suitable adjuvant effect by increasing NLA immunogenicity and immunostimulatory
role by conferring partial protection of mice immunized and challenged with lethal dose of N.
caninum, while the JAC lectin showed no adequate adjuvant effect in the immunization against
neosporosis. / Lectinas são proteínas que se ligam especificamente a carboidratos e possuem
importantes papéis na modulação da resposta imune. KM+ e Jacalina (JAC) são lectinas da
semente da jaca (Artocarpus integrifolia) e ScLL é uma lectina do látex da planta Synadenium
carinatum. Neospora caninum é um parasito do filo Apicomplexa que causa doença
neuromuscular em cães e desordens reprodutivas em bovinos, causando sério impacto
econômico na indústria agropecuária. O papel imunoestimulador de lectinas de plantas tem sido
investigado em diversas infecções parasitárias, mas não na neosporose. Esse estudo teve como
objetivo avaliar o efeito adjuvante e o potencial imunoestimulador de KM+, JAC e ScLL na
imunização de camundongos contra a neosporose. Grupos de camundongos C57BL/6 foram
imunizados subcutaneamente por três vezes, em intervalos de quinze dias, com o antígeno de
lisado total de Neospora (NLA) associado com as lectinas (grupos NLA+KM, NLA+JAC,
NLA+ScLL), NLA somente, lectinas somente (KM, JAC e ScLL), além do grupo PBS (controle
da infecção). Os animais foram desafiados com isolado Nc-1 (2x107 taquizoítas) e avaliados
quanto aos escores de morbidade, mortalidade, resposta imune humoral específica, produção de
citocinas por células do baço, carga parasitária cerebral e lesões histopatológicas. Resultados
sorológicos demonstraram maiores níveis de IgG anti N. caninum produzidos pelos animais dos
grupos NLA+KM e NLA+ScLL que NLA+JAC e NLA somente. O grupo NLA+KM induziu
maiores níveis do isotipo IgG2a, enquanto NLA+ScLL induziu maiores níveis do isotipo IgG1.
Em todos os grupos, a resposta de IgG1 foi maior do que de IgG2a antes e após o desafio,
porém a razão IgG2a/IgG1 aumentou após o desafio nos grupos NLA+KM, NLA+ScLL e KM.
A produção de citocinas após o estímulo antigênico in vitro demonstrou que NLA+KM induziu
altos níveis de IFN-g e IL-10, apresentando a maior razão IFN-g/IL-10, seguido pelo grupo
NLA+ScLL, indicando um padrão de resposta imune direcionado ao perfil Th1. NLA+JAC
induziu baixos níveis destas citocinas e menor razão IFN-g/IL-10 em relação aos demais grupos,
indicando um padrão de resposta imune do tipo Th2. Após o desafio com o parasito,
camundongos do grupo NLA+KM apresentaram a maior sobrevida com baixa carga parasitária
cerebral e moderada inflamação tecidual, enquanto animais imunizados com NLA+ScLL
apresentaram sobrevida intermediária com baixa carga parasitária cerebral e baixos escores de
morbidade e inflamação. O grupo NLA+JAC exibiu sobrevida intermediária, mas com alta
carga parasitária cerebral e suave inflamação. Em conclusão, as lectinas KM+ e ScLL mostraram
ser adjuvantes satisfatórios por aumentar a imunogenicidade do NLA e apresentaram efeito
imunoestimulador por conferir proteção parcial dos camundongos imunizados e desafiados com
dose letal de N. caninum, enquanto a lectina Jacalina não produziu efeito adjuvante suficiente
na imunização contra a neosporose. / Mestre em Imunologia e Parasitologia Aplicadas
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/urn:repox.ist.utl.pt:RI_UFU:oai:repositorio.ufu.br:123456789/16674 |
| Date | 25 February 2011 |
| Creators | Cardoso, Mariana de Resende Damas |
| Contributors | Mineo, Tiago Wilson Patriarca, Silva, Deise Aparecida de Oliveira, Cardoso, Cristina Ribeiro de Barros, Mineo, Jose Roberto |
| Publisher | Universidade Federal de Uberlândia, Programa de Pós-graduação em Imunologia e Parasitologia Aplicadas, UFU, BR, Ciências Biológicas |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFU, instname:Universidade Federal de Uberlândia, instacron:UFU |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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