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Previous issue date: 2017 / A Dengue ? uma doen?a infecciosa viral de transmiss?o vetorial pelo mosquito Aedes aegypti, cujo controle tem se mostrado de solu??o complexa. Al?m disso, o diagn?stico cl?nico ? dif?cil de ser realizado, principalmente na fase aguda da doen?a, em que os sintomas s?o muito similares aos de outras infec??es febris agudas, e por essa raz?o o desenvolvimento de m?todos de detec??o mais efetivos para o seu controle, ganha relev?ncia. M?todos moleculares est?o sendo cada vez mais utilizados para o diagn?stico precoce por serem mais r?pidos e sens?veis. Nesse sentido, o uso de biossensores ganha relev?ncia por serem dispositivos vers?teis, de f?cil constru??o e utiliza??o, sens?veis e seletivos. Combinado com o uso de pol?meros modificadores da superf?cie transdutora, o que favorece a etapa de imobiliza??o das biomol?culas, os biodispositivos assim constru?dos se mostram mais sens?veis devido ? compatibilidade das caracter?sticas do elemento biol?gico e do filme polim?rico. Desta forma, este trabalho visou desenvolver um imunossensor impedim?trico para diagn?stico de Dengue utilizando eletrodos impressos de grafite (EI) funcionalizados com filmes polim?ricos derivados do ?cido 4-aminofenilac?tico (4-AFA). O imunossensor baseou-se na intera??o espec?fica entre o ant?geno da Dengue, a prote?na NS1, e os anticorpos anti-NS1. No estudo de caracteriza??o por voltametria c?clica (VC) da plataforma funcionalizada, observou-se que o filme polim?rico formado apresentou dois picos de oxida??o em +0,17 e +0,35 V em meio de solu??o de ?cido sulf?rico 0,50 M, o que mostra sua adsor??o e eletroatividade na superf?cie do eletrodo. Medidas de espectroscopia de imped?ncia eletroqu?mica (EIE) mostraram maior resist?ncia ? transfer?ncia eletr?nica do EI modificado com o filme polim?rico quando comparado ao EI sem modifica??o, corroborando o estudo anterior. Para o estudo de melhor concentra??o de NS1 para imobiliza??o, verificou-se que 1,00 ng/mL apresentou melhor sinal anal?tico, devido ? diminui??o nas intera??es que ocorre entre os ant?genos. O tempo de imunorrea??o entre ant?geno (Ag) e anticorpo (Ac) tamb?m foi estudado, no qual observou-se que o tempo ideal para que ocorra a imunocomplexa??o foi de 20 minutos. Em seguida, foi realizado estudo de dilui??o dos soros positivos e negativos por EIE, no qual foi poss?vel observar, para o soro positivo, que quanto mais dilu?do o soro maior foi o valor de Rct encontrado. O soro negativo tamb?m apresentou sinal anal?tico, provavelmente devido ? presen?a de anticorpos n?o espec?ficos, por?m, o sinal gerado apresentou valores mais pr?ximos do sinal da NS1, mostrando a seletividade da plataforma proposta. O estudo foi repetido em eletrodo sem modifica??o a fim de verifica a import?ncia do filme polim?rico na constru??o do biossensor. Observou-se que quando a NS1 ? imobilizada ao eletrodo n?o modificado, o Rct aumento muito pouco quando comparado ao eletrodo modificado com o filme derivado do 4-AFA, o que mostra a efici?ncia e sensibilidade da plataforma proposta. / Disserta??o (Mestrado) ? Programa de P?s-Gradua??o em Qu?mica, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, 2017. / Dengue is a viral infectious disease transmitted by the Aedes aegypti mosquito, whose control has shown a complex solution. In addition, the clinical diagnosis is difficult to perform, especially in the acute phase of the disease, in which the symptoms are very similar to other acute febrile infections, and for this reason the development of more effective detection methods for its control gains relevance. Molecular methods are being increasingly used for early diagnosis because they are faster and more sensitive. In this sense, the use of biosensors gains relevance because they are versatile devices, of easy construction and use, sensitive and selective. Combined with the use of transducing surface modifying polymers, which favors a stage of immobilization of the biomolecules, the biodevices constructed in this way are more sensitive due to the compatibility of the biological element characteristics and the polymer film. Thus, this work aimed to develop an impedimetric immunosensor to Dengue diagnose using screen-printed electrode (SPE) functionalized with polymer films derived from 4-aminophenylacetic acid (4-APA). The immunosensor was based on the specific interaction between Dengue antigen, NS1 protein, and anti-NS1 antibodies, IgG e IgM. In characterization study by cyclic voltammetry (CV) of the functionalized platform, it has been observed that the polymer film shown two oxidation peaks in +0.17 and +0.35 V in 0,5 M sulfuric acid solution medium, which shows its adsorption and electroactivity at the SPE surface. Electrochemical impedance spectroscopy (EIS) measurements has shown a higher charge transfer resistance to the polymer film modified SPE when compared to the non-modified SPE, corroborating the previous study. For the study of NS1 best concentration to immobilization, it has been verified that 1,00 ng/mL presented better analytical signal, due to the decrease of the interactions that occur between the antigens. Immunoreaction time between antigens (Ag) and antibody (Ab) has also been studied, in which it has been observed that the ideal time for immunocomplexation was 20 minutes. Afterwards, a positive and negative sera dilution study was carried out by EIE, in which it has been possible to observe, for the positive serum, that the more diluted the serum the greater the Rct found. The negative serum also presented analytical signal, probably due to the presence of non-specific antibodies, however, the generated signal presented values closer to the NS1 signal, showing the selectivity of the proposed platform. The study was repeated in electrode without modification in order to verify the importance of the polymeric film in the biosensor construction. It was observed that when NS1 is immobilized to the non-modified electrode, Rct increases very little when compared to the 4-AFA derived film modified electrode, which shows the efficiency and sensitivity of the proposed platform.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:acervo.ufvjm.edu.br/jspui:1/1431 |
| Date | 28 April 2017 |
| Creators | Pimenta, Thiago Coimbra |
| Contributors | Ferreira, Lucas Franco, Santos, Wallans Torres Pio dos, Franco, Diego Leoni, Thomasini, Ronaldo Lu?s, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri (UFVJM), Ferreira, Lucas Franco |
| Publisher | UFVJM |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFVJM, instname:Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, instacron:UFVJM |
| Rights | A concess?o da licen?a deste item refere-se ao ? termo de autoriza??o impresso assinado pelo autor, assim como na licen?a Creative Commons, com as seguintes condi??es: Na qualidade de titular dos direitos de autor da publica??o, autorizo a Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri e o IBICT a disponibilizar por meio de seus reposit?rios, sem ressarcimento dos direitos autorais, de acordo com a Lei n? 9610/98, o texto integral da obra disponibilizada, conforme permiss?es assinaladas, para fins de leitura, impress?o e/ou download, a t?tulo de divulga??o da produ??o cient?fica brasileira, e preserva??o, a partir desta data., info:eu-repo/semantics/openAccess |
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