Thèse numérisée par la Direction des bibliothèques de l'Université de Montréal. / Angiotensinogen (ANG) is a single peptide glycoprotein that contains 452 amino
acids in human (453 amino acids in rodents). ANG releases a 10-amino acids peptide known
as angiotensin l (Ang I) from it's N-terminal when acted by renin, a acidic protease. Ang I
can be fiirther converted into angiotensin II (Ang II) by angiotensin converting enzyme
(ACE). Ang II is one of the most potent vasoconstrictors known. Ang II also acts on the
brain to mcrease blood pressure. Ang II acts on the adrenal cortex to increase the secretion
of aldosterone. The levels of ANG in plasma or local tissues diïectly contribute to the
levels ofAng II. Therefore the studies of regulation ofANG gene expression is important to
understand the molecular mechanisms of some related diseases, such as hypertension.
Previous studies m which the transfection of the fusion genes that were generated
with various lengths of 5'-flanking region of the rat ANG gene linked to a bacterial
chloramphenicol acetyl transferase (CAT) gene as a reporter into mouse hepatoma (Hepa 1-
6) ceUs and opossum kidney (OK) cells, identified a putative cyclic AMP responsive
element (CRE) in the rat ANG gene 5'-regulatory region (N-806/-779). Compared with
palindromic CRE octamer (TGACGTCA), the putative CRE of the ANG gene (ANG-CRE)
is almost identical except the last two bases were in reversed order (TGACGTAC).
In the present study, we isolated a fuU-length cDNA of 1345 base pairs from mouse
liver cDNA library, which encodes a nuclear DNA-binding protein consisting of 436 amino
acids with an apparent molecular weight of 52 kilodalton (kDa). This protein binds to the
ANG-CRE, and was designated as 52-kDa protein. Southwestern blot revealed that this 52
kDa protein was present in the following tissues, such as liver, kidney, testis, brain, but not
in spleen.
Analysis of the deduced amino acid sequence shows no apparent basic regionleucine
zipper (bZIP) stmcture, indicatmg ANG-CREB is structurally distinct fi-om bZIP
family members. The antiserum against 43-kDa-CREB or ATF-2 can not interact with this
52-kDa protein, further supporting that the 52-kDa protem is immunologically different fi-om the bZIP family. The 52-kDa protein may represent a new group of CRE-binding
proteins.
Competitive gel mobility shift assays and Southwestern blot analysis revealed that
the ANG-CREB binds to ANG-CRE, and this bindmg is not displaceable by excess amounts
of CREs fi-om somatostatin (SOM), phosphoenopymvate carboxyl kmase PEPCK), and
tyrosine ammo transferase (TAT) genes in vitro. These data suggest that the 52-kDa
protein binds specifically to ANG-CRE and may regulate the ANG gene expression.
The biological function of the 52-kDa protein is not known at present. The primary
data from transient gene transfection assays showed that this protein has represser activity
on the ANG gene promoter when ANG gene was stimulated by isoproterenol, but showed
no effect on the ANG basal level (without any stimulation). Further experiments will be
needed to study the biological function of the 52-kDa protein. / L'angiotensinogène (ANG) est une glycoprotéine fonnée de 452 acide aminés chez
l'humain (453 acide aminés chez les rongeurs). Une protéase acide, la rénine, clive l'ANG de
son côté N-tenninal en libérant un peptide de 10 acide aminés connu sous le nom de
l'angiotensine I (Angl). Ce dernier, peut être converti en angiotensine II (AngII) sous
Faction d'une enzyme de conversion dite ACE. L'Ang II est un puissant vasocoiisticteur. Il
agit au niveau du cerveau en augmentant la pression sanguine et au niveau du cortex rénal
en augmentant la sécrétion de l'aldostérone. Les niveaux de l'ANG daiis le plasma ou dans
les tissus locaux sont directement proportionnels aux niveaux de Ang II. Ainsi les études de
regulation de l'expression du gène d'Ang II sont importantes pour comprendre les
mécanismes moléculaires de certames maladies, comme l'hypertension. Des études
antérieiu-es par transfection en utilisant des gènes de fusion générés avec différentes
longueurs de région flanquées en 5' du gène ANG de rat lié au gène rapporteur de bactérie,
le chloramphénicol acetyl transférase (CAT), dans les ceUules hépatome (Hepa 1-6) de
souris et dans les ceUules rénales de sarigue, ont permis d'identifier un présumé élément
réponse (CRE) d'AMP cyclique dans la région régulatrice en 5' du gène ANG de rat (N-
806/-779). En comparant l'octamère palindromique de CRE (TGACGTCA) avec le
présumé CRE du gène ANG (ANG-CRE), il semble qu'ils sont identiques à l'exception des
deux dernières bases qui sont dans un ordre inversé (TGACGTAC). Dans cette étude, nous
avons isolé à partir d'une banque de cDNA du foie de souris, une cDNA de 1345 paire de
bases qui code pour une protéine de liaison à l'ADN nucléaire. Cette protéine est fonnée de
436 acide aminés avec un poids moléculaire apparent de 52 kilodalton (kDa). En se liant à
ANG-CER, cette protéme est désignée comme la 52-kDa protéine. Le "Southwestern blot"
a révélé que la 52-kDa protéine de 52 kDa est présente dans les tissus suivants: foie, rein,
testicule et cerveau; mais absente dans la rate. L'analyse de cette séquence déduite d'acide
aminés ne montre pas du stmcture apparent à la région basique de la fermeture éclaire à
leucine, bzip (basic region-leucme zipper), indiquant que la 52-kDa protéine est structurellement distincte des membres de la famille bzip. L'antisérum dérigé contre le 43-
kDa-CREB ou contre ATF-2 n'intéragit pas avec la 52-kDa protéme confermant amsi que la
52-kDa protéine est immunologiquenient dififérente des membres de famille bzip. La 52-kDa
protéine représente donc, un nouveau groupe des protéines de liaison à CRE. Les essais sur
gel à mobilité compétitive et les analyses de "southwestern blot" ont révélé que la 52-kDa
protéine lié ANG-CRE et que cette liaison n'était pas déplaçable par un excès du gène CRE
de somatostatin (SOM), phosphoenopymvate carboxy kmase (PEPCK) et tyrosme ammo
transférase (TAT) m vitro, suggérant que la 52-kDa protéine se lié spésifiquement à ANGCRE
et qu'il peut réguler l'expression du gène ANG. Les fonctioiis biologiques de la 52-
kDa protéine ne sont pas encore connus. Les premiers résultats obtenus à partir des essais
de transfections des gènes transitoirs montrent que cette protéine a une activité represseur
sur le promoteur du gène d'ANG quand ce dernier est stimulé par l'isoprotérénol, et que,
sans stimulation, elle a aucun effet sur le niveau basai d'ANG. Les expériences futures
seront nécessaires poiir étudier les
fonctions biologiques d'AND.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:umontreal.ca/oai:papyrus.bib.umontreal.ca:1866/33679 |
| Date | 08 1900 |
| Creators | Wu, Jie |
| Contributors | Chan, John S.D., Carrière, Serge |
| Source Sets | Université de Montréal |
| Language | English |
| Detected Language | French |
| Type | thesis, thèse |
| Format | application/pdf |
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