CoordenaÃÃo de AperfeÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / A maioria dos micro-organismos encontra-se integrados em comunidades denominadas âbiofilmeâ. Dentre estes se destaca a Pseudomonas aeruginosa, um patÃgeno oportunista de vegetais, animais e humanos, frequentemente associado à infecÃÃes nosocomiais difÃceis de serem erradicadas devido à presenÃa de biofilme. Os antibiÃticos fluoroquinolonas, tais como a ciprofloxacina (CIP), sÃo utilizados contra esta bactÃria, entretanto, mecanismos de resistÃncia vem sendo desenvolvidos por este micro-organismo. Assim, novas formas de controle microbiano tÃm sido alvo de inÃmeras pesquisas a fim de substituir ou potencializar os mÃtodos convencionais. Para esse fim, peptÃdeos antimicrobianos (AMPs) obtidos de diversos seres vivos representam uma alternativa para o desenvolvimento de novas drogas. Formas sintÃticas anÃlogas ao AMP Hilina a1 (Hy-a1), isolado da espÃcie Hypsiboas albopunctatus, tem demonstrado excelente eficÃcia antimicrobiana, dentre os quais se destacam o peptÃdeo Lys-[Trp6]hy-a1 (Lys-a1). Dessa forma, o objetivo deste trabalho foi verificar a influÃncia do peptÃdeo Lys-a1 na atividade antimicrobiana de CIP contra o micro-organismo patogÃnico Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027. A concentraÃÃo inibitÃria mÃnima (CIM), a concentraÃÃo bactericida mÃnima (CBM) e a curva de morte foram determinadas para a CIP e a Lys-a1, separadamente. A influÃncia da Lys-a1 na atividade antimicrobiana da CIP foi verificada pela metodologia checkerboard com quantificaÃÃo da biomassa e do nÃmero de cÃlulas viÃveis do biofilme atravÃs da coloraÃÃo pelo cristal violeta e contagem de unidades formadoras de colÃnia (UFC), respectivamente. Os valores de CIM e CBM da Lys-a1 foi de 125 μg.mL-1, e para a CIP foi de 0,24 e 0,48 μg.mL-1, respectivamente. Os dados mostraram que tanto a CIP quanto a Lys-a1 sÃo potentes antimicrobianos contra P. aeruginosa, sendo capazes de inibir tanto o crescimento planctÃnico como o desenvolvimento do biofilme. A interaÃÃo das substÃncias foi interpretada pelo Ãndice de concentraÃÃo inibitÃria fracional (ICIF) e mostrou um efeito aditivo, estabelecendo uma diminuiÃÃo de 16 vezes da CIM e da CBM da CIP, quando combinada com a Lys-a1. Esta influÃncia foi observada tambÃm na cinÃtica de morte e na atividade antibiofilme. Em conclusÃo, o efeito aditivo entre a Lys-a1 e a CIP na atividade antimicrobiana sugere que o peptÃdeo tem potencial como um agente terapÃutico e adjuvante para o tratamento de doenÃas infecciosas causadas por P. aeruginosa, podendo habilitar o uso de concentraÃÃes menores do antibiÃtico. / Most microorganism lies embedded in communities called "biofilms". Among these stand out Pseudomonas aeruginosa, an opportunistic pathogen of plants, animals and humans, frequently associated with nosocomial infections difficult to be eradicated due to the presence of biofilm. The fluoroquinolone antibiotics such as ciprofloxacin (CIP) against this bacterium are used, however, the mechanism of resistance has been developed for this microorganism. Thus, new forms of microbial control have been the subject of numerous studies in order to replace or enhance conventional methods. For this purpose, antimicrobial peptides (AMPs) obtained from various living beings represent an alternative to the development of new drugs. Synthetic forms analogous to Hylin a1 AMP (Hy-a1), isolated from species Hypsiboas albopunctatus, has shown excellent antimicrobial efficacy, among which stand out the peptide Lys-[Trp6]hy-a1 (Lys-a1). Thus, the aim of this work was to verify the influence of the peptide Lys-a1 in antimicrobial activity of CIP against pathogenic microorganism Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027. Minimum inhibitory concentration (MIC), minimum bactericidal concentration (MBC) and the curve death were determined to CIP and Lys-a1 separately. The influence of Lys-a1 in the antimicrobial activity of the CIP has been verified by the checkerboard method to quantify the biomass and the number of viable cells in biofilms by crystal violet staining and counting of colony forming units (CFU), respectively. The MIC and MBC values of Lys-a1 was 125 μg.mL-1 and the CIP was 0.24 and 0.48 μg.mL-1, respectively. The data showed that both the CIP as Lys-a1 are potent antibiotics against P. aeruginosa is able to inhibit both the planktonic growth and biofilm development. The interaction of substances interpreted by the fractional inhibitory concentration index (FICI) and showed an additive effect, establishing a decrease of 16 times the MIC and MBC of the CIP, when combined with the Lys-a1. This effect was also observed in the kinetics of death and antibiofilm activity. In conclusion, the additive effect of the Lys-a1 and CIP in antimicrobial activity suggests that the peptide has potential as a therapeutic agent and an adjuvant for the treatment of infectious diseases caused by P. aeruginosa can enable the use of lower concentrations of the antibiotic.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.teses.ufc.br:8399 |
| Date | 11 June 2014 |
| Creators | Simone Torres de Oliveira |
| Contributors | Victor Alves Carneiro, Rodrigo Maranguape Silva da Cunha, Eduardo Maffud Cilli, LÃcia BetÃnia da Silva Andrade |
| Publisher | Universidade Federal do CearÃ, Programa de PÃs-GraduaÃÃo em Biotecnologia (Campus da UFC em Sobral-CE), UFC, BR |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFC, instname:Universidade Federal do Ceará, instacron:UFC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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