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Previous issue date: 2016-02-23 / As proteases são enzimas com a capacidade de hidrolisar proteínas em peptídeos menores ou
aminoácidos livres, sendo essenciais para animais, plantas e micro-organismos devido à sua
atuação na regulação metabólica. As proteases são utilizadas com diversas finalidades, no
processo industrial da fabricação de detergentes, na indústria farmacêutica e de alimentos,
além de ser utilizada na recuperação e aproveitamento de resíduos e subprodutos. Em virtude
da grande importância das proteases este trabalho teve como objetivo comparar a produção de
proteases produzidas por Mucor subtilissimus UCP 1262 em fermentação em estado sólido
(FES) e submersa (FS), bem como extrair em Sistema de duas fases aquosas (SDFA)
PEG/Fosfato, as colagenases oriundas de ambas as fermentações. O meio de produção da FES
e FS no qual o micro-organismo foi cultivado era constituído principalmente de farelo de soja
e farinha de soja. As determinações enzimáticas e dosagem proteica foram realizadas após
72h de fermentação. Para montagem do SDFA foram realizados dois planejamentos fatoriais
23, o primeiro planejamento foi realizado com amostras da FES e o segundo com amostras da
FS. Neste sistema foi analisada a influência de três variáveis no processo de extração: massa
molar do PEG (200, 550 e 1000 g/mol), concentração do PEG (17,5; 20 e 22,5%) e
concentração do sal fosfato de sódio (15; 17,5 e 20%). A maior produção de proteases (362,66
U/ml) ocorreu na FES, enquanto que na FS obteve-se apenas 26,33 U/ml. Dentre as atividades
proteásicas específicas: colagenolítica, fibrinolítica e queratinolítica, os melhores resultados
foram obtidos para a atividade colagenolítica, sendo esta de: 179,81 U/ml, em FES. A
colagenase presente no extrato bruto obtida nos processos fermentativos foram particionadas
para fase rica em PEG do SDFA. O maior valor para a variável resposta Fator de purificação
(FP=3,49) foi obtido no sistema que utilizou o extrato obtido por FES. Com base nas
condições estudadas, os dois sistemas mostraram-se viáveis para a extração de colagenase,
pois além de ser um processo que pode ser utilizado em larga escala é constituído por
componentes de baixo custo e as condições utilizadas no SDFA favoreceram a extração desta
enzima. Todavia, a extração da colagenase oriunda da FES foi mais promissora em virtude da
maior concentração da enzima de interesse encontrada nesse tipo de fermentação. / Proteases are enzymes with the ability to hydrolyze proteins into smaller peptides and free
amino acids. They are vital for animals, plants and micro-organisms due to their role in
metabolic regulation. Proteases have been used in various purposes, in the industrial process
of detergents, pharmaceutical and food industry, as well as being used in the recovery and
utilization of waste and by-products. Due to their economic feasibility and great medical and
farmaceutical importance this study aimed to compare the production of proteases produced
by Mucor subtilissimus UCP 1262 in solid state fermentation (SSF) and submerged
fermentation (SF) as well as extract collagenolytic proteases using Aqueous two-phase system
(ATPS) -PEG/Phosphate from both fermentations. The medium composition for the fungal
fermentation in SSF and SF was based in soybean flour. Enzymatic determinations and
protein levels were performed after 72 hours of fermentation. To mount the ATPS were two
23 factorial design, the first planning was carried out with samples of SSF and the second with
samples of SF. In this system was analyzed the influence of three variables in the extraction
process: PEG molar mass (200, 550 and 1000), the PEG concentration (17,5; 22,5 and 20%)
and sodium phosphate salt concentration (15; 17,5 and 20%). The higher proteolytic activity
(362,66 U/ml) was produced using SSF, while in the FS was obtained 26,33 U/ml. Among the
specific proteolytic activities: collagenolytic, fibrinolytic and keratinolytic, the best results
were obtained for the collagenolytic activity, this being: 179,81 U / ml in the SSF. The
Collagenase present in the crude extract obtained in the fermentative processes partitioned
preferencially to the PEG-rich phase. The highest value for the variable response Purification
Factor (PF = 3,49) was obtained in the system that used SSF crude extract. According with
the showed results, both extraction systems seemed to be feasible for collagenase extraction,
as well as being a process that can be used in large scale, constituted by low cost components
and conditions used in this ATPS favored the enzyme extraction. Furthermore, the
collagenase extraction from the SSF was more promising because of the higher interest
enzyme concentration found in this type of fermentation.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpe.br:123456789/20118 |
| Date | 23 February 2016 |
| Creators | SOUZA, Kessia Porfírio da Silva |
| Contributors | http://lattes.cnpq.br/4989617783837981, PORTO, Ana Lúcia Figueiredo, PORTO, Camila Souza |
| Publisher | Universidade Federal de Pernambuco, Programa de Pos Graduacao em Ciencias Biologicas, UFPE, Brasil |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Breton |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPE, instname:Universidade Federal de Pernambuco, instacron:UFPE |
| Rights | Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil, http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
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