Die erfolgreiche Übertragung der vielversprechenden Ergebnisse aus zahlreichen Kleintierstudien zu den neuroprotektiven und -regenerativen Eigenschaften des Wachstumsfaktors G-CSF auf eine multizentrische randomisierte Phase-IIa-Studie misslang. Bei näherer Betrachtung fiel eine deutlich höhere Dosierung des Wachstumsfaktors in der humanen Studie im Vergleich zu den erfolgreichen präklinischen Studien auf, sodass Fragen nach einem schädigenden Einfluss möglicher immunologischer Veränderungen aufkamen.Um dies zu überprüfen, wurde in einem murinen Schlaganfallmodell eine quantitative FACS-Analyse des frühen entzündlichen Hirninfiltrats und der Immunzellpopulationen im peripheren Blut mit besonderem Augenmerk auf neutrophile Granulozyten 24 Stunden nach (Schein-)Schlaganfall durchgeführt. Ergänzend erfolgte eine immun-histochemische Beurteilung des Infiltrationsverhaltens neutrophiler Granulozyten, wobei neben der räumlichen Verteilung die Zellmorphologie untersucht wurde.:Abbildungsverzeichnis IV
Tabellenverzeichnis VI
Abkürzungsverzeichnis VII
1 Einleitung 1
1.1 Der Schlaganfall 1
1.1.1 Epidemiologie und sozioökonomische Relevanz 1
1.1.2 Ätiologie und Pathogenese 1
1.1.3 Klinische Symptomatik 2
1.1.4 Rekanalisierende Therapie 2
1.2 Immunologie des Schlaganfalls 3
1.2.1 Das Gehirn als immunprivilegiertes Organ 3
1.2.2 Immunantwort nach Schlaganfall 3
1.2.3 Bedeutung neutrophiler Granulozyten für die
Immunantwort 6
1.2.4 Rolle des neutrophilen Granulozyten im Schlaganfall 7
1.3 Der Granulozyten Kolonie-stimulierende Faktor 10
1.3.1 G-CSF im Schlaganfall 10
1.3.2 Einführung 12
1.3.3 Präklinische Schlaganfallstudien mit G-CSF 14
1.3.4 klinische Schlaganfallstudien mit G-CSF 14
1.4 Dosistranslation von experimentellen zu klinischen Studien 16
2 Zielstellung der Arbeit 17
3 Material und Methoden 18
3.1 Versuchstiere 18
3.2 Schlaganfallmodell 18
3.3 Ein- und Ausschlusskriterien 19
3.4 Versuchsplan 20
3.5 Behandlung mit G-CSF 21
3.6 Euthanasie und transkardiale Perfusion 22
3.7 Quantifizierung der Leukozytenzahl im Vollblut 23
3.8 Durchflusszytometrische Aufarbeitung 23
3.8.1 Lyse- und Färbeprotokoll Blut 23
3.8.2 Isolation von Immunzellen aus dem Maushirn und Färbeprotokoll 24
3.9 Durchflusszytometrische Analyse 25
3.10 Histopathologische Aufarbeitung 26
3.10.1 Anfertigung histologischer Schnitte im Kryostat 26
3.10.2 Hämatoxylin-Eosin-Färbung 27
3.10.3 Immunfluoreszenz 27
3.10.4 Differenzierung von Granulozyten und Monozyten 29
3.10.5 Immunhistochemische Auszählung 29
3.10.6 Darstellung der räumlichen Verteilung 31
3.11 Statistische Auswertung 33
4 Ergebnisse 34
4.1 Durchflusszytometrie 34
4.1.1 Veränderungen des Körper- und Milzgewichts 34
4.1.2 Immunzellpopulationen im peripheren Blut 35
4.1.3 Immunzellpopulationen im Hirnisolat 38
4.2 Immunhistochemie 42
4.2.1 Differenzierung von Monozyten und Granulozyten 42
4.2.2 Quantitative Analyse 43
4.2.2.1 Ipsilateral / kontralateral 44
4.2.2.2 Meningeal / intrazerebral 45
4.2.2.3 Rund / stäbchenförmig 46
4.2.3 Räumliche Verteilung der neutrophilen Granulozyten 47
5 Diskussion 51
5.1 Zusammenfassung der Ergebnisse 51
5.2 G-CSF und die Einwanderung neutrophiler Granulozyten 53
5.3 G-CSF und die Zusammensetzung des frühen entzündlichen Infiltrats im Gehirn 54
5.4 G-CSF und die räumliche Verteilung einwandernder neutrophiler Granulozyten 56
5.5 G-CSF und die Zellmorphologie einwandernder neutrophiler Granulozyten 58
5.6 G-CSF und die periphere bzw. systemische Immunantwort 60
5.7 Methodische Einflussfaktoren und Limitationen der Arbeit 63
5.7.1 Berechnung der murinen Äquivalenzdosis 63
5.7.2 Wahl des Schlaganfallmodells 64
5.7.3 Immunologische Unterschiede zwischen Maus und
Mensch 65
5.7.4 Methoden und Versuchstieranzahl 66
5.7.4.1 Durchflusszytometrie 66
5.7.4.2 Immunhistochemie 67
5.8 Ausblick 68
6 Zusammenfassung 70
Literaturverzeichnis XI
Erklärung über die eigenständige Abfassung der Arbeit XXVII
Tabellarischer Lebenslauf XXVIII
Publikationen XXIX
Danksagung XXX
| Identifer | oai:union.ndltd.org:DRESDEN/oai:qucosa:de:qucosa:31874 |
| Date | 09 October 2018 |
| Creators | Cerwenka, Sophie |
| Contributors | Universität Leipzig |
| Source Sets | Hochschulschriftenserver (HSSS) der SLUB Dresden |
| Language | German |
| Detected Language | German |
| Type | info:eu-repo/semantics/acceptedVersion, doc-type:doctoralThesis, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis, doc-type:Text |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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