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Caracterização funcional das proteínas Nop17p e Rsa1p de Saccharomyces cerevisiae / Functional characterization of the Saccharomyces cerevisiae proteins Nop17p and Rsa1p

Nop17p e Rsa1p são proteínas nucleolares em Saccharomyces cerevisiae, as quais foram identificadas pela sua associação a dois complexos celulares: os snoRNPs de box C/D, através de interação com as subunidades Nop58p e Snu13p, respectivamente, e o R2TP/Hsp90p. Nop17p parece ser responsável por direcionar a chaperona Hsp90p durante a montagem dos snoRNPs, e a associação de Rsa1p a estes complexos ainda não tem uma função estabelecida. Neste trabalho, nós mostramos que a ausência de ambas as proteínas afetam a estabilidade da proteína Nop58p dos snoRNPs e afetam a localização do snoRNA U3. Em relação à ordem de interação das proteínas do core de snoRNps de box C/D, Nop17p associa-se de maneira transiente a Nop1p/Snu13p, seguida da ligação de Nop58p ao complexo. Quanto à rede de interação do R2TP, obtivemos o mutante Nop17(N307S), que não mais interage com Tah1p. Este mutante interage com a subunidade Rvb1p do R2TP, mas não se associa com outras proteínas parceiras de Nop17p(WT). Apesar da importância da interação Nop17p-Tah1p, sua interrupção não afeta o crescimento celular, o que sugere a possibilidade de outro fator estar envolvido na associação entre Nop17p e Hsp90p. / Nop17p and Rsa1p are Saccharomyces cerevisiae nucleolar proteins, which were identified for its association with two cellular complexes: box C/D snoRNPs, through interaction with the core subunits Nop58p and Snu13p respectively, and the R2TP/Hsp90p. Nop17p seems to be responsible for directing Hsp90p to the assembly of snoRNPs. The Rsa1p association to these complexes still have no defined function. In this work, we showed that both proteins absence affect Nop58p stability and causes a mislocalization of the U3 snoRNA. Relativel to the order of assembly of the box C/D snoRNPs core proteins, Nop17p associates transiently with Nop1p/Snu13p, followed by the Nop58p joining to the complex. To study in more detail the protein interactions within the R2TP complex, we obtained the Nop17(N307S) mutant, which no longer interacts withTah1p, but still interacts withRvb1p, another R2TP subunit. Nop17(N307S) does not interact with other Nop17p(WT) partners. Despite the importance of the Nop17p-Tah1p association, the disruption of this interaction does not affect cell growth, suggesting the involvement of a second factor on the Nop17p and Hsp90p association.

Identiferoai:union.ndltd.org:usp.br/oai:teses.usp.br:tde-22012015-145300
Date19 September 2014
CreatorsPrieto, Marcela Bach
ContributorsOliveira, Carla Columbano de
PublisherBiblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Source SetsUniversidade de São Paulo
LanguagePortuguese
Detected LanguageEnglish
TypeTese de Doutorado
Formatapplication/pdf
RightsLiberar o conteúdo para acesso público.

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