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Previous issue date: 2012 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde / As hortaliças como a alface (Lactuca sativa) têm sido associadas a diversos surtos de doenças de origem alimentar. Dentre os patógenos envolvidos, os norovírus (NoV) são reconhecidos como os principais agentes etiológicos de gastrenterite, sendo as estirpes do genogrupo II (GII) mais prevalentes. Dessa forma, muito esforço tem sido realizado no desenvolvimento de métodos para detecção desses vírus em hortaliças. Os estudos têm focado na padronização dos métodos e otimização das etapas de extração, concentração e detecção do ácido nucléico viral. O uso de outros vírus como controle interno também tem sido estudado, para identificação de falhas durante a análise e evitar resultados falso-negativos. O presente estudo teve como objetivo investigar a contaminação de NoV GII pelo método de concentração por filtração em membrana negativa seguida de semi-nested PCR e PCR em tempo real e avaliar a qualidade microbiológica (pesquisa de Salmonella e enumeração de coliformes) de 90 amostras de alface (30 in natura, 30 minimamente processadas e 30 de serviços de alimentação) no Estado do Rio de Janeiro.O bacteriófago PP7 foi utilizado como controle interno e uma otimização do método comparando a solução salina fosfatada tamponada (PBS) e o tampão glicina (TG) foi realizada. Nenhuma amostra apresentou contaminação por NoV GII e Salmonella. As amostras in natura apresentaram qualidade microbiológica satisfatória de acordo com a legislação. Uma amostra minimamente processada (3,3%) e seis de serviços de alimentação (20%) apresentaram condições higiênico-sanitárias insatisfatórias devido ao número de coliformes termotolerantes acima do permitido, indicando que os procedimentos de higienização realizados nos serviços de alimentação não foram eficazes para eliminação dos micro-organismos ou que a contaminação pode ocorrer, por parte dos manipuladores. / Green leafy vegetables, as lettuce (Lactuca sativa) have been linked to diverse foodborne outbreaks worldwide. Among several pathogens involved, norovirus (NoV) are recognized as one of the most important etiological agent associated with gastroenteritis, being genotype II (GII) the most prevalent. In this manner, efforts have been made to develop methods to detect these viruses in green leafy vegetables. Researches have focused on standardizing methods and optimize stages of extraction, concentration and detection of viral nucleic acid. The use of others viruses as internal control has also been studied, to identifying possible errors during analysis and avoid false-negatives results. This study aimed to verify the contamination by NoV GII through concentration methodology by negative-membrane filtration followed by detection by semi-nested PCR and quantification by Real Time PCR and microbiological quality evaluation (Salmonella research and enumeration of total and thermo tolerant coliform) of 90 samples of lettuce (30 in natura, 30 minimally processed and 30 from food services) in the state of Rio de Janeiro. Bacteriophage PP7 was utilized as internal control and a method optimization comparing phosphate buffered saline (PBS) and Glycine buffer (GB) was carried out. No sample showed contamination by NoV GII and Salmonella. Samples of in natura lettuce exhibited satisfactory microbiology quality according Brazilian resolution. One minimally processed sample (3.3%) and six (20%) from food service showed unsatisfactory hygienic-sanitary conditions because of the number of thermotolerant coliforms above of allowed, indicating that hygienic proceedings in restaurants were not effective for eliminating those microorganisms or that the contamination may occur by employers. PP7 bacteriophage was detected in 40, 86.7 and 76.7% of in natura, minimally processed and food service, respectively. Using GB increased PP7 bacteriophage recovery (p = 0.029), but did not demonstrate significant difference in NoV GII recovery (p = 0.57), and increased sensitivity of semi nested PCR technique for detecting NoV GII in samples artificially contaminated. This last one exhibited lower sensitivity than Real Time PCR for NoV GII detection. Results point out that GB is an elution buffer more efficient and that PP7 bacteriophage is applicable as an internal control of this method.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.arca.fiocruz.br:icict/11144 |
| Date | January 2012 |
| Creators | Brandão, Marcelo Luiz Lima |
| Contributors | Viana, Celio Mauro, Leite, José Paulo Gargliardi, De Filippis, Ivano Raffaele Victorio, Marin, Victor Augustus, Miagostovich, Marize Pereira, Miagostovich, Marize Pereira, Marin, Victor Augustus |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ, instname:Fundação Oswaldo Cruz, instacron:FIOCRUZ |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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