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Previous issue date: 2015-02-24 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / An obligatory intracellular parasite of warm-blooded animals, Toxoplasma gondii is widely distributed around the world, and only in the feline species it performs sexual reproduction. In sheep it brings economic losses, mainly due to abortion. Contamination ways are from oocysts in water or food, tissue and visceral cysts, by tachyzoites in fluids and congenitally. The most important parasite transmission occurs through raw meat consumption, so we used a lamb, naturally infected with antibody titer of 1: 256 as measured by IFA test. This animal was slaughtered according to the law and after slaughter brain, diaphragm, liver and heart samples were collected for histopathology and PCR, and it was collected approximately 50g of shoulder, rib and leg cuts and 16g of heart was an "in natura " collection (T0), for bioassay in mice and PCR. After the first collection, the carcass was kept cooling down, remaining whole in the cooling chamber at 7°C for 24 hours, along with the heart. After this period, a second test was performed (T1), as previously described and the cuts were divided and they went to freezing at -10°C, samples were taken with 12 hours (T2), 60h (T3) and 120h (T4) at this temperature. In each treatment period, the collected samples went through peptic digestion and were inoculated in two mice per sample, the rest of the digestion was used for PCR. The mice were sacrificed at eight weeks and their organs like lungs, heart, liver, spleen, kidney and skeletal muscle tissue sample from the thigh were collected for histopathology, since the brain was collected for PCR and "squash" technique. Blood of mice was collected to perform the IFA test. PCR of samples derived from the sheep, the brain and rib cut sample "in natura" (T0) were positive, as in the PCR of the mice brain, only the inoculated animal with shoulder cutting sample "in natura" (T0) was positive. After completion of the PCR, positive samples were sequenced, which showed over 97% identity with T. gondii. In "squash" technique the mice inoculated with the ribs cutting after cooling at 7°C for 24 hours (T1) presented brain cyst. IFA in mice serum, an animal inoculated with the rib cut "in natura" (T0) and one with rib after cooling at 7°C for 24 hours (T1) presented titration 1:64, the others were negative. In histopathological examination of sheep and mice organs, only the inoculated mice with the rib cut after cooling at 7°C for 24 hours (T1) presented cysts, which were present in the heart, lung and muscle tissue of the thigh. The lamb consumption "in natura" and after cooling is capable of transmission to those who consume. Therefore, only the cooling down of commercial cuts of this kind does not undermine the parasite / Parasito intracelular obrigatório de animais homeotérmicos, o Toxoplasma gondii esta distribuído amplamente pelo mundo, e somente nos Felídeos realiza a reprodução sexuada. Nos ovinos causa prejuízos econômicos, principalmente devido ao aborto. As formas de contaminação são por oocistos em água ou alimentos, cistos teciduais em vísceras e tecidos, por taquizoítos em fluidos e congenitamente. A transmissão do parasito pelo consumo de carne crua é umas das mais importantes, sendo assim, utilizou-se um cordeiro, infectado naturalmente, com titulação de anticorpos de 1:256, avaliada pelo teste de RIFI. Este animal foi abatido conforme a legislação e após abate foram coletadas amostras de cérebro, diafragma, fígado e coração para exame histopatológico e para PCR, e coletado aproximadamente 50g dos cortes da paleta, costela e pernil e 16g do coração sendo esta a coleta in natura (T0), para realização do bioensaio em camundongos e PCR. Após a primeira coleta, a carcaça foi encaminhada a refrigeração, permanecendo inteira na câmara de resfriamento a 7°C por 24h, juntamente com o coração. Após este período, nova coleta foi realizada (T1), assim como descrito e foram divididos os cortes e estes passaram para o congelamento a -10°C, e as coletas foram realizadas com 12h (T2), 60h (T3) e 120h (T4) nesta temperatura. Em cada tempo de tratamento, as amostras coletadas passaram pela digestão péptica e inoculadas em dois camundongos por amostra, o restante da digestão, era
utilizada para PCR. Os camundongos foram eutanasiados com oito semanas e seus órgãos como pulmão, coração, fígado, baço, rins e amostra de tecido muscular esquelético da coxa foram coletados para histopatológico, já o cérebro era coletado para PCR e para técnica de squash . Sangue dos camundongos foram coletados para realização do teste de RIFI. Na PCR das amostras oriundas do ovino, o cérebro e amostra do corte da costela in natura (T0) foram positivas, já na PCR do cérebro dos camundongos, somente o animal inoculado com amostra do corte da paleta in natura (T0) foi positivo. Após a realização da PCR, as amostras positivas foram sequenciadas, que demonstrou mais de 97% de identidade com o T. gondii. Na técnica do squash , o camundongo inoculado com o corte da costela após o resfriamento a 7°C por 24h (T1) apresentou cisto cerebral. Na RIFI do soro dos camundongos, um animal inoculado com o corte da costela in natura (T0) e um com a costela após o resfriamento a 7°C por 24h (T1) apresentaram titulação 1:64, os demais negativos. No exame histopatológico dos órgãos do ovino e dos camundongos, somente o camundongo inoculado com o corte da costela após o resfriamento a 7°C por 24h (T1) apresentou cisto, sendo estes presentes no coração, pulmão e tecido muscular da coxa. O consumo de carne ovina, in natura e após o resfriamento é passível de transmissão para quem a consumir. Portanto, somente o resfriamento de cortes comerciais desta espécie não inviabiliza o parasito
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:tede.udesc.br #179.97.105.11:handle/935 |
| Date | 24 February 2015 |
| Creators | Federle, Michelle |
| Contributors | Souza, Antonio Pereira de |
| Publisher | Universidade do Estado de Santa Catarina, Mestrado em Ciência Animal, UDESC, BR, Ciências Veterinárias |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UDESC, instname:Universidade do Estado de Santa Catarina, instacron:UDESC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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