In cattles, most of pregnancy losses occurs at the beginning of gestation, notably from
the 7th to the 16th day of the cycle, a period in which, the embryo depends entirely on the
uterine environment to survive and to start their preimplantation growth. During this period,
the embryonic death after embryo transfers performed in vitro (TE-IVP) or in vivo (TE-OM)
is on average nearly twice as high as that produced by natural mating or artificial insemination
(AI). The recipient sensitization against the paternal and maternal MHC molecules of
allogeneic embryo might be one of the causes of high rates of pregnancy loss observed after
TE. Studies in humans and in various species have pointed that the sensitization with
conceptus antigens may affect the reproductive performance facilitating the recognition and
the maternal acceptance of allogeneic embryo through induction of cytokyne and
immunoregulatory cells in the the uterine microenvironment. The purpose of this study is to
determine whether simultaneous or separate administration of paternal and maternal antigens
in the uterus of the cows embryo recipientes, during the estrus, increases the expression of
genes which can facilitate recognition and development of allogeneic embryos during early
pregnancy. Forty-five crossbed cows were evaluated. The animals were divided in four
treatments: T0: control; T1: Semen; T2: PBMCs and T3: PBMCs+Semen. The cows were
estrus synchronized and received antigens in the uterine body on the estrus day. Uterine
biopsies were collected in vivo on D0 for control, and after seven (D7) and fourteen (D14)
days after the estrus and administration of antigens in order to evaluate the treatment effect on
the uterine environment of the receiving at the moment of the anovoluation procedure would
occur in TE-IVP, and during the period in which the bovine embryo would have their
preimplantation growth, respectively. The gene expression was evaluated in real time PCR,
and then transcribed from FOXP3, IDO, IL-10 and CSF-1 were detected in all RNA samples
extracted from uterine biopsies. Semiquantitative analyses of relative gene expression among
the control and the treat groups demonstrated that none of the treatments significantly
incresed those gene expressions. Furthermore, at D14 all the treatments leaded to a decline in
amount CSF-1 transcripts and, further, treatment with both antigens also to a drop in the
abundance of IL-10 transcripts. In conclusion, the isolated or simultaneous antigens
admnistration in the in the uterus of IVP embryo recipient cows seems not to increase the
maternal tolerance to alloantigens embryo nor benefit conditions for their growth and
preimplantation development, at least with regard to the effect mediated by FOXP3, IDO, IL-
10 and CSF-1 on D7 and D14 in the estrous cycle. / A maioria das perdas gestacionais em bovinos acontece no início da gestação,
particularmente entre os dias 7 e 16, período no qual o embrião é totalmente dependente do
ambiente uterino para sobreviver e iniciar seu crescimento pré-implantação. Durante esse
período, a mortalidade embrionária após transferência de embriões produzidos in vitro (TEPIV)
ou in vivo (TE-OM) é em média quase duas vezes mais elevada do que aquela derivada
de embriões originados de monta natural ou inseminação artificial (IA). A sensibilização da
receptora contra as moléculas MHC paternas e maternas do embrião alogênico pode ser uma
das causas das altas taxas de perdas gestacionais observadas após TE. Estudos realizados em
humanos e em várias espécies têm demonstrado que a sensibilização com antígenos do
concepto pode ser uma maneira útil de afetar o desempenho reprodutivo facilitando o
reconhecimento e a aceitação materna do embrião alogênico através da indução de citocinas e
células imunorregulatórias no microambiente uterino. Nesse sentido, o presente estudo teve
como foco principal determinar se a administração simultânea ou isolada de antígenos paterno
e materno no útero de fêmeas bovinas receptoras de embrião PIV, no dia do estro, aumenta a
expressão de genes que podem facilitar o reconhecimento e desenvolvimento do embrião
alogênico durante o início da gestação. Para isto, foram utilizadas 45 vacas cruzadas divididas
em 4 tratamentos: T0: controle; T1: Sêmen; T2: PBMCs e T3: PBMCs+Sêmen. As fêmeas
bovinas foram sincronizadas ao estro e receberam os antígenos no corpo uterino no dia do cio
(D0). Biópsias uterinas foram coletadas in vivo no D0, para controle, e 7 (D7) e 14 (D14) dias
após o cio e a administração dos antígenos, para avaliar o efeito do tratamento no ambiente
uterino da receptora no momento em que ocorreria o procedimento de anovulação em TE-PIV
e durante o período no qual o embrião bovino já teria iniciado seu crescimento préimplantação,
respectivamente. A expressão gênica foi avaliada por PCR em tempo real e
transcritos de FOXP3, IDO, IL-10 e CSF-1 foram detectados em todas as amostras de RNA
extraídas das biópsias uterinas. A análise semiquantitativa da expressão gênica relativa entre
os grupos controle e tratado mostrou que nenhum dos tratamentos promoveu aumento
significativo na expressão desses genes. Além disso, no D14 todos os tratamentos
promoveram uma queda na quantidade de transcritos de CSF-1 e, ainda, o tratamento com
ambos os antígenos também promoveu uma queda na abundância de transcritos de IL-10. Em
conclusão, a administração isolada ou simultânea de ambos os antígenos no útero de vacas
receptoras de embrião PIV parece não propiciar aumento da tolerância materna aos
aloantígenos do embrião nem condições favoráveis a seu crescimento e desenvolvimento préimplantação,
pelo menos no que se refere ao efeito mediado por FOXP3, IDO, IL-10 e CSF-1
no D7 e D14 do ciclo estral. / Mestre em Biologia Celular e Estrutural Aplicadas
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/urn:repox.ist.utl.pt:RI_UFU:oai:repositorio.ufu.br:123456789/12416 |
| Date | 05 October 2015 |
| Creators | Junqueira, Talita Vieta |
| Contributors | Beletti, Marcelo Emílio, Silva, Marcelo José Barbosa, Gomes, Angelica de Oliveira |
| Publisher | Universidade Federal de Uberlândia, Programa de Pós-graduação em Biologia Celular e Estrutural Aplicadas, UFU, BR, Ciências Biomédicas |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFU, instname:Universidade Federal de Uberlândia, instacron:UFU |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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