Protozoários do gênero Acanthamoeba estão entre os organismos de vida-livre mais abundantes sendo
encontrados em uma ampla gama de ambientes naturais como água, solo, poeira, vegetais, hospitais,
sistemas de ventilação e esgotos. Algumas espécies de Acanthamoeba são consideradas patógenos
oportunistas e têm sido associadas a infecções cutâneas, queratite, encefalite granulomatosa amebiana
(EGA) e a outras afecções em menor frequência. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a presença
de Acanthamoeba em áreas comunitárias de unidades acadêmicas e hospitalares, assim como
determinar o risco potencial dos isolados. Amostras foram coletadas em dois hospitais e duas
universidades do Rio Grande do Sul, Brasil. As amebas foram isoladas e caracterizadas utilizando
métodos morfológicos, fisiológicos e genéticos. Além disso, a variação e a especificidade de proteases
extracelulares foram determinadas por análise de zimogramas. A detecção e isolamento de amebas em
amostras clínicas e ambientais envolve a amostragem e cultura em meio ágar não nutriente. Apesar de
eficiente, este sistema requer diversas passagens visando eliminar contaminantes e não é apropriado
para o isolamento de amebas individuais de amostras biodiversas. Para solucionar este problema foi
desenvolvido um método alternativo que envolve amostragem, enriquecimento, indução de
encistamento e micromanipulação de cistos e cultura direta em placas de ágar não nutriente.
Utilizando os métodos convencional e alternativo, 429 amostras de áreas comunitárias de hospitais e
universidades foram avaliadas mostrando alta prevalência de Acanthamoeba tanto em ambientes secos
(13,77%) como úmidos (19,29%). A maior parte dos isolados (77,4%) foram classificados dentro do
grupo II, o qual inclui a maioria das espécies patogênicas. Os isolados apresentaram tolerância à
temperatura e pH, assim como resistência a desinfetantes, características que devem contribuir para a
sobrevivência e proliferação de Acanthamoeba em ambientes fechados, aumentado o risco de
contaminação das pessoas. Como as proteases extracelulares são consideradas um dos mais
importantes fatores de patogenicidade das amebas de vida-livre, dez isolados foram avaliados quanto à
atividade, padrão e especificidade de proteases. Análise com azocaseina mostrou variação significativa
na atividade proteolítica volumétrica e específica dos distintos isolados, independente do “status”
patogênico e não patogênico das espécies. Zimogramas em géis copolimerizados com gelatina
mostraram três padrões de bandas em isolados de
A. castellanii, e perfis particulares para as outras espécies. Todas as proteases secretadas por A.
castellanii, A. pearcei e A. healyi foram caracterizadas como serino proteases, enquanto apenas
cisteino e metaloproteases foram identificadas em A. astronyxis. Algumas proteases extracelulares
apresentaram importante atividade sobre gelatina, fibrinogênio e γ-globulina, e podem estar
implicadas na patogenicidade de Acanthamoeba e na resposta do hospedeiro. / Protozoa of the genera Acanthamoeba are one of the most abundant free-living organisms. This
microrganisms are found in a wide variety of natural habitats including water, soil, dust, vegetables,
hospital units, ventilation areas and sewage. Some species of Acanthamoeba are considered
opportunistic pathogens, and have been associated with cutaneous infections, keratitis, granulomatous
amoebic encephalitis (GAE), among other less frequent diseases. The aim of this study was to evaluate
the presence of Acanthamoeba in community areas of academic and hospital units, and to determine
their potential risk. Samples were collected from two hospitals and two universities of Rio Grande do
Sul, Brazil. Amoebas were isolated and characterized using morphological, physiological and genetic
methods. Additionally, extracellular proteases variation and specificity was determined by zymogram
analysis. The conventional detection and isolation of amoeba from clinical and environmental samples
involves sampling and culture on non-nutrient Agar medium. Although efficient, this system requires
several transfers in order to eliminate contaminants, and is not appropriate for the isolation of
individual amoeba from samples with a biodiverse community. To solve this problem we developed
an alternative method that involves sampling, enrichment, encystment induction, and direct cysts
micromanipulation and culture on Agar plates. Using the conventional and alternative method, 429
samples from community areas of hospitals and universities were evaluated showing high prevalence
of Acanthamoeba in both dry (13.77%) and humid (19.29%) environments. Most of this isolates
(77.4%) were classified within group II, which includes the great majority of pathogenic species.
Isolates exhibited temperature and pH tolerance, as well as resistance to disinfectants. These
characteristics may contribute for the maintenance and proliferation of Acanthamoeba in the indoor
environments, increasing the risk of people contamination. As extracellular proteases are considered
one of the most important pathogenic factors of free-living amoeba, ten isolates were evaluated to
determined proteases activity, patterns and specificity. Azocasein assays showed significant variation
on the overall and specific protease activity in Acanthamoeba-conditioned media, independently of the
pathogenic or nonpathogenic status of the species. The zymographic assays on gelatin co-polymerized
gels showed three banding patterns for A. castellanii isolates, and specific profiles for other species.
All the proteases secreted by A. castellanii, A. pearcei, and A. healyi were characterized as serine
proteases, but only cisteine and metalloproteases were identified in A. astronyxis. Some extracellular
proteases exhibited important activity on gelatin, fibrinogen and γ-globulin, and may be implicated in
Acanthamoeba pathogenicity and host response.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ucs.br:11338/693 |
| Date | 20 December 2011 |
| Creators | Zanella, Janice de Fátima Pavan |
| Contributors | Laurino, Jomar Pereira, Godoy, Dagoberto Vanoni de, Graeff-Teixeira, Carlos, Echeverrigaray, Sérgio, Delamare, Ana Paula Longaray |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UCS, instname:Universidade de Caxias do Sul, instacron:UCS |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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