Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Chapter II: In the present study, a metalloproteinase named BpMPI was isolated from
Bothropoides pauloensis snake venom and its biochemical, enzymatic and
immunochemical characteristics were determined. BpMPI was purified in two
chromatography steps on ion exchange resins CM-Sepharose Fast flow and
Sephacryl S-300. This protease was homogeneous on SDS-PAGE and showed a
single chain polypeptide of 23 kDa under reducing conditions. The primary
structure of the enzyme showed high similarity with other SVMPs enzymes from
snake venoms. BpMPI showed proteolytic activity upon azocasein and bovine
fibrinogen and was inhibited by EDTA, 1,10 phenantroline and β-mercaptoethanol.
Moreover, this enzyme showed stability at neutral and alkaline pH and it was
inactivated at high temperatures. BpMPI was able to hidrolyse glandular and
tecidual kallikrein substrates, but was unable to act upon factor Xa and plasmin
substrates. The enzyme did not able to induce local hemorrhage in the dorsal
region of mice even at high doses. Immunochemistry studies showed that BpMPI
was high immunogenic and the antibodies anti-BpMP-I were very efficient to
neutralize the hemorrhagic activity and systemic alterations induced by
Bothropoides pauloensis snake venom. / Capítulo II: No presente estudo, uma metaloproteinase denominada BpMPI foi isolada da
peçonha da serpente Bothropoides pauloensis e suas características bioquímicas,
enzimáticas e imunoquímicas foram determinadas. BpMPI foi purificada utilizando
dois passos cromatográficos em resinas de troca iônica CM-Sepharose Fast Flow
e Sephacryl S-300. Esta protease mostrou-se homogênea em SDS-PAGE
apresentando uma única cadeia polipeptídica de 23 kDa sob condições redutoras.
A estrutura primária da enzima mostrou alta similaridade com outras enzimas
SVMPs de venenos de serpentes. BpMPI mostrou atividade proteolítica sobre
azocaseina e fibrinogênio bovino e foi inibida por EDTA, 1,10 fenantrolina e β-
mercaptoetanol. Além disso, esta enzima apresentou estabilidade em pH neutro
ou alcalino e foi inativada em temperaturas elevadas. BpMPI também foi capaz de
hidrolisar os substratos da calicreína glandular e tecidual, mas foi incapaz de
hidrolisar os substratos do fator Xa e plasmina. A enzima não foi capaz de induzir
hemorragia local na região dorsal de camundongos mesmo em altas doses.
Estudos imunoquímicos demostraram que os anticorpos anti-BpMP-I foram
eficientes em neutralizar a atividade hemorrágica e as alterações sistêmicas
induzidas pela peçonha de Bothropoides pauloensis. / Mestre em Genética e Bioquímica
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/urn:repox.ist.utl.pt:RI_UFU:oai:repositorio.ufu.br:123456789/15871 |
| Date | 26 July 2011 |
| Creators | Souza, Dayane Lorena Naves de |
| Contributors | Ávila, Veridiana de Melo Rodrigues, Cardoso, Rone, Sánchez, Eládio Oswaldo Flores |
| Publisher | Universidade Federal de Uberlândia, Programa de Pós-graduação em Genética e Bioquímica, UFU, BR, Ciências Biológicas |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFU, instname:Universidade Federal de Uberlândia, instacron:UFU |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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