Purificação e caracterização de uma tripsina sensível a metal pesado do peixe Caranx hippos

Description

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Previous issue date: 2007 / A tripsina-símile extraída do ceco pilórico de xaréu (Caranx hippos) foi purificada por um
procedimento de três etapas: tratamento térmico, precipitação com sulfato de amônio e
cromatografia de gel-filtração em Sephadex G-75. Os efeitos de vários íons metálicos e
inibidores de proteases na atividade digestiva da enzima in vitro foram determinados. As
propriedades físico-químicas e cinéticas da tripsina foram estabelecidas. O pH e
temperatura ótima de reação encontrada foram 8,0 e 50°C, respectivamente. Após 30
minutos de incubação a 50ºC, foi detectada uma perda de 20% da atividade tríptica. A
constante de Michaelis Menten foi 1,21  0,38 mM usando benzoil-DL-arginina-pnitroanilida
(BApNA) como substrato. Uma única banda (35,2 kDa) foi observada quando a
amostra da enzima purificada foi aplicada em gel de eletroforese utilizando sulfato sódico
de dodecila (SDS-PAGE, 12,5%). Atividade com substrato específico e inativação por
inibidores de protease forneceram evidências adicionais que uma tripsina é responsável por
esta atividade proteolítica. A tripsina de C. hippos apresentou sensibilidade a metais
pesados. Utilizando soluções de íons na concentração de 1 mM, a tripsina foi inibida na
ordem decrescente: Cd2+=Al3+>Zn2+>Cu2+>Pb2+>Hg2+. Menor efeito foi detectado com
Co2+, K+, Li+, Ba2+, Mn2+, Mg2+e Ca2+. Contudo, a concentração tão baixa quanto 0,01 ppm
(10 μg/mL) dos íons Zn2+, Cu2+, Hg2+, Pb2+, Cd2+ e Al3+ foram suficientes para inibir 34%,
33%, 33%, 32%, 29% e 28%, da atividade proteolítica, respectivamente

Links & Downloads

1. Maria Silva da Costa, Helane; de Souza Bezerra, Ranilson. Purificação e caracterização de uma tripsina sensível a metal pesado do peixe Caranx hippos. 2007. Dissertação (Mestrado). Programa de Pós-Graduação em Bioquímica e Fisiologia, Universidade Federal de Pernambuco, Recife, 2007.
2. https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/1762

Tags

Espécies biomonitores

Metal pesado

Peixe marinho

Tripsina

Xaréu(Caranx hippos)

Additional Fields

Identifer	oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpe.br:123456789/1762
Date	January 2007
Creators	Maria Silva da Costa, Helane
Contributors	de Souza Bezerra, Ranilson
Publisher	Universidade Federal de Pernambuco
Source Sets	IBICT Brazilian ETDs
Language	Portuguese
Detected Language	Portuguese
Type	info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis
Source	reponame:Repositório Institucional da UFPE, instname:Universidade Federal de Pernambuco, instacron:UFPE
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