Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / O Clostridium difficile tem como principal fator de virulÃncia a toxina A (TxA), a qual provoca inflamaÃÃo e destruiÃÃo tecidual aguda em intestinos de animais experimentais e de pacientes com a doenÃa induzida por esta bactÃria. Em locais de injÃria tecidual, adenosina à produzida em altas concentraÃÃes, onde exerce uma sÃrie de efeitos antiinflamatÃrios, limitados por sua rÃpida degradaÃÃo pela enzima adenosina desaminase. O objetivo deste trabalho foi investigar o efeito da inibiÃÃo da enzima adenosina desaminase pelo EHNA (eritro-9-(2-hidrÃxi-3-nonil)-adenina) sobre a enterite induzida pela TxA do C. difficile em alÃa ileal de camundongos. Para isto, injetamos EHNA (90 μmol/kg) ou PBS i.p. 30 minutos antes da administraÃÃo de TxA (10 a 100 μg) ou PBS na alÃa ileal isolada. Os animais foram sacrificados 3 horas depois da induÃÃo da enterite e as alÃas foram retiradas para estudo. As razÃes peso/comprimento da alÃa e volume de secreÃÃo/comprimento da alÃa foram calculadas e amostras de tecido foram coletadas para histopatologia, dosagem de atividade de mieloperoxidase (MPO), dosagem de TNF-α, IL-1β e IL-10 por ELISA, imunohistoquÃmica para TNF-α, IL-1β, NOS induzÃvel e PTX3, e PCR para TNF-α, IL-1β e PTX3. A injeÃÃo de TxA (10 a 100 μg) nas alÃas ileais aumentou significativamente (p<0,05) as razÃes peso/comprimento da alÃa e volume de secreÃÃo/comprimento da alÃa com resultados consistentes a partir de 50 μg. A TxA promoveu significativa (p<0,05) destruiÃÃo tecidual, edema, infiltraÃÃo de cÃlulas inflamatÃrias, aumento das citocinas TNF-α e IL-1β, e elevaÃÃo de iNOS e PTX3. Todos esses parÃmetros foram significativamente revertidos com o uso do EHNA (p<0,05). Em adiÃÃo, a TxA nÃo alterou os nÃveis de IL-10 em relaÃÃo ao controle, mas o prÃ-tratamento com EHNA promoveu uma elevaÃÃo nos nÃveis desta citocina. Assim, concluÃmos que na enterite induzida pela TxA em camundongos o EHNA demonstrou um potente efeito antiinflamatÃrio, reduzindo consideravelmente a lesÃo tecidual, a migraÃÃo neutrofÃlica, a expressÃo e os nÃveis de citocinas prÃinflamatÃrias (TNF-α, IL-1β) e produzindo um aumento nos nÃveis de IL-10. AlÃm disso, a administraÃÃo de TxA induziu um aumento na expressÃo da proteÃna PTX3 e no nÃmero de cÃlulas imunomarcadas para iNOS no tecido ileal, ambos revertidos pelo EHNA / The main factor of virulence in Clostridium difficile is toxin A (TxA), which can induce inflammation and acute tissue injury in the bowels of animals and humans affected by this organism. The high concentration of adenosine generated upon injury produces a number of antiinflammatory effects limited by rapid degradation by adenosine deaminase. The objective of this study was to determine the effect of EHNA (erythro-9-(2-hydroxy-3-nonyl)-adenine) inhibition of adenosine deaminase upon TxA-induced ileal loop enteritis in mice. EHNA (90 μmol/kg) or PBS was injected i.p. 30 minutes prior to TxA (10-100 μg) or PBS instillation into the ligated ileal loop. The animals were euthanized 3 hours after enteritis induction and the ileal loops were retrieved for analysis. The weight/length ratio and the secretion volume/length ratio were calculated and tissue samples were submitted to histopathological study, myeloperoxidase assay (MPO), measurement of TNF-α, IL-1β and IL-10 levels with ELISA, immunohistochemical tests for TNF-α, IL-1β, inducible NOS and PTX3, and PCR assay for TNF-α, IL-1β and PTX3. The instillation of TxA (10-100 μg) into the ileal loop significantly increased (p<0.05) the weight/length ratio and the secretion volume/length ratio with consistent results above 50 μg. TxA induced a significant amount (p<0.05) of histological damage, edema and inflammatory cell infiltration and increased the production of TNF-α, IL-1β, iNOS and PTX3. All changes were significantly reverted by treatment with EHNA (p<0.05). Moreover, IL-10 levels remained unchanged in animals treated with TxA, but increased in animals receiving EHNA. In conclusion, in mice with TxA-induced enteritis EHNA produced considerable antiinflammatory effects, reducing tissue injury, neutrophil migration, the expression and levels of proinflammatory cytokines (TNF-α and IL-1β) and producing an increase in IL-10 levels. In addition, TxA instillation increased PTX3 expression and the number of cells immunolabeled for iNOS in the ileal tissue, both of which were reverted by EHNA
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.teses.ufc.br:1128 |
| Date | 06 June 2008 |
| Creators | Ana FlÃvia Torquato de AraÃjo Junqueira |
| Contributors | Gerly Anne de Castro Brito, Marcus Raimundo Vale, Reinaldo Barreto Orià |
| Publisher | Universidade Federal do CearÃ, Programa de PÃs-GraduaÃÃo em Farmacologia, UFC, BR |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFC, instname:Universidade Federal do Ceará, instacron:UFC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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