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Previous issue date: 2015-04-28 / CAPES / A aranha brasileira Lasiodora (Mygalomorphae, Theraphosidae), conhecida popularmente como, é amplamente distribuída na região Nordeste do Brasil, na Zona da Mata. Os venenos de Theraphosídeos podem ser uma rica fonte de importantes ferramentas farmacológicas. O presente estudo realizou a venômica parcial, extração e atividade antimicrobiana do veneno da tarântula brasileira Lasiodora sp contra bactérias e fungos patogênicos importantes. Após o processo de extração, um veneno incolor foi obtido sem contaminação de fluidos gástricos. Este mostrou conter um concentração ~ 4,53 ± 0,38 ug / μL de proteína e um pH de 5,5. O Perfil eletroforético mostrou uma baixa massa molecular variando de 2 kDa a 10 kDa e uma variedade de faixas com massas moleculares de 30 kDa a 250 kDa. O perfil do veneno por RP-HPLC junto com SDS-PAGE não revelou uma diferença significativa entre venenos de macho e fêmea. Após separação cromatográfica, as frações do veneno, foram digeridas em gel e analisada por espectrometria de massa. Quatro peptídeos, U1-theraphotoxin-Lp1a (Lasiotoxin-1), U1-theraphotoxin-Lp1b (Lasiotoxin-2) e U3-theraphotoxin-Lsp1a (LTx5) e ω-theraphotoxin-Asp3a, foram identificados. Estes peptídeos mostraram uma elevada homologia com outros peptídeos encontrados em Lasiodora sp. e em outros Theraphosideos. Foram identificadas duas proteínas: PLA2 e hialuronidase. ω-theraphotoxin-Asp3a, PLA2 e hialuronidase estão sendo descritas pela primeira vez compondo o veneno de Lasiodora sp. O veneno inibiu o crescimento e matou todos os microrganismos testados, com inibição mínima (MIC), mínima bactericida (CBM) e mínima fungicida (MFC) em concentrações que variam de 3,9 a 500 ug / ml. O veneno de Lasiodora sp. pode ser classificado como um agente bactericida (MBC / MIC = 1) contra as bactérias Gram-positivos Bacillus subtilis e Micrococcus luteus e a bactéria Gram-negativas Aeromonas sp. Além disso, ele pode ser classificado como um agente fungicida contra Candida parapsilosis (MFC / MIC = 1) e Candida albicans (MFC / MIC = 2). O veneno agiu como um fármaco bacteriostático contra a espécie gram-positiva Staphylococcus aureus (MBC / MIC = 64), e bactérias Gram-negativas Pseudomonas aeruginosa (MBC / MIC = 8) e Klebsiella pneumoniae (MBC / MIC = 16), bem como agente fungistático sobre as leveduras Candida tropicalis (MFC / MIC = 16,02) e Candida krusei (MFC / MIC = 8). Em conclusão, o veneno de Lasiodora sp. foi parcialmente caracterizado e é fonte de agentes antimicrobianos com relevância clínica e o estudo contribui para a caracterização do gênero. / The Brazilian spider Lasiodora (Mygalomorphae, Theraphosidae), whose trivial names are “caranguejeira” or tarantula, is widely distributed in Northeastern Brazil, in the rainforest. The theraphosid venoms may be a rich source of important pharmacological tools. In the present study we conducted the partial venomic, extraction and antimicrobial activity against medically important bacteria and fungi from the venom of the Brazilian tarantula Lasiodora sp. After extraction process, a colorless venom was obtained without contamination with gastric fluids. This venom showed a contained 4.53±0.38 μg/μL of protein and a pH of 5.5. Electrophoretic profile showed a low molecular mass ranging from 2 kDa to 10 kDa and a variety of bands with molecular masses from 30 kDa to 250 kDa. RP-HPLC venom profile together SDS-PAGE did not reveal a difference among male and female venom’s. After chromatographic separation fractions of venoms were in gel digestion and analyzed by mass spectrometry. Four peptides, U₁-theraphotoxin-Lp1a (Lasiotoxin-1), U₁-theraphotoxin-Lp1b (Lasiotoxin-2) and U₃-theraphotoxin-Lsp1a (LTx5), ω-theraphotoxin-Asp3a. were identified. These peptides showed a high identity with other peptides found in Lasiodora and other Theraphosides. Two proteins were identified: PLA₂ and hyaluronidase. ω-theraphotoxin-Asp3a, PLA₂ and hyaluronidase are describe for first time composing the venom of Lasiodora sp. The venom inhibited the growth and killed all tested microorganisms, with minimal inhibitory (MIC), minimal bactericide (MBC) and minimal fungicide (MFC) concentrations ranging from 3.9 to 500 μg/mL. The Lasiodora sp. venom can be classified as a bactericide agent (MBC/MIC = 1) against the Gram-positive bacteria Bacillus subtillis and Micrococcus luteus and the Gram-negative bacterium Aeromonas sp. Also, it can be classified as a fungicide agent on Candida parapsilosis (MFC/MIC = 1) and Candida albicans (MFC/MIC = 2). The venom acted as a bacteriostatic drug against the Gram-positive species Staphylococcus aureus (MBC/MIC = 64), the Gram-negative bacteria Pseudomonas aeruginosa (MBC/MIC = 8) and Klebsiella pneumoniae (MBC/MIC = 16) as well as fungistatic agent on the yeasts Candida tropicalis (MFC/MIC = 16.02) and Candida krusei (MFC/MIC = 8). In conclusion, Lasiodora sp. venom was partial characterized and is source of antimicrobial agents with clinical relevance and the study contributes for the characterization of the genus.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpe.br:123456789/25575 |
| Date | 28 April 2015 |
| Creators | FERREIRA, Felipe Roberto Borba |
| Contributors | http://lattes.cnpq.br/2050094723109880, ZINGALI, Russolina Benedeta, PAIVA, Patrícia Maria Guedes |
| Publisher | Universidade Federal de Pernambuco, Programa de Pos Graduacao em Bioquimica e Fisiologia, UFPE, Brasil |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPE, instname:Universidade Federal de Pernambuco, instacron:UFPE |
| Rights | Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil, http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
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