Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas, 2018. / Submitted by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-09-03T21:30:37Z
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Previous issue date: 2018-08-03 / A hemopressina é um nonapeptídeo derivado da cadeia α-1 de hemoglobina de
mamíferos que é conhecido pelos seus efeitos hipotensivo, analgésico e supressor do
apetite. Este peptídeo age como um agonista inverso ou antagonista do receptor
canabinoide CB1. Disfunções no sistema endocanabinoide, estão associadas com
algumas patologias e morbidade, tais como obesidade, dor neuropática, depressão,
inflamação, mal de Alzheimer e doença de Parkinson. O presente estudo teve por
objetivo produzir a hemopressina nas formas sintética e recombinante, e purificar as
moléculas produzidas, visando futura avaliação das suas propriedades biológicas. Para a
obtenção do peptídeo recombinante, a sequência nucleotídica que codifica a
hemopressina foi inserida no vetor de expressão pGEX-4T-1® (GE Healthcare)
fusionada ao tag-GST e expressa em Escherichia coli BL21-CodonPlus. Várias
condições de expressão foram testadas para determinar os melhores parâmetros de
expressão. A síntese em fase sólida da hemopressina de formas humana e murina foi
realizada utilizando a estratégia Fmoc/tButil. As sequências de resíduos de aminoácidos
de ambas as formas da hemopressina foram confirmadas por espectrometria de massa
MALDI no modo LIFTTM em um equipamento de Autoflex Speed (BrukerDaltonics,
Bilerica, EUA). A purificação do peptídeo sintético foi realizada por cromatografia de
fase reversa (Shimadzu LC-20AT) numa coluna C18 semi-preparativa (Jupiter 5 μm
300 Å). Análises por espectrometria de massa das hemopressinas humana e murina
mostraram peptídeos sintéticos com massa molecular de 1.053,6 Da e 1.087,6 Da,
respectivamente. A massa molecular da hemopressina recombinante de murino
fusionada à GST foi de aproximadamente 31 kDa, obtida por meio de análise de SDSPAGE
e confirmada por Western Blotting. O rendimento da expressão foi avaliado por
densitometria, que constatou a produção de 147,8 mg/L da proteína recombinante. / Hemopressin is a nonapeptide derived from the α-1 chain of mammalian hemoglobin
known for its hypotensive, analgesic and appetite suppressive effects. This peptide acts
as a CB1 cannabinoid receptor inverse agonist or antagonist. Dysfunctions in the
endocannabinoid system are associated with some pathologies and morbidity, such as
obesity, neuropathic pain, depression, inflammation, Alzheimer and Parkinson diseases.
This study was focused on the production and purification of synthetic and recombinant
hemopressin, aiming future evaluation of their biological properties. To obtain the
recombinant peptide, the nucleotide sequence encoding hemopressin was inserted into
the expression vector pGEX-4T-1 (GE Healthcare) fused to the tag-GST and expressed
in Escherichia coli BL21-CodonPlus. Several expression conditions were tested to
determine the best expression parameters. Solid-phase synthesis of human and murine
hemopressin was performed using the Fmoc/t-butyl strategy. The amino acid sequences
of both forms of hemopressin was confirmed by MALDI mass spectrometry in the
LIFTTM mode at an Autoflex speed equipment (BrukerDaltonics, Bilerica, USA).
Purification of the synthetic peptide was performed by reversed-phase chromatography
(Shimadzu LC-20AT) on a C18 semi-preparative column (Jupiter 5 μm 300 Å). Mass
spectrometric analysis of human and murine hemopressins showed synthetic peptides
with a molecular mass of 1,053.6 Da and 1,087.6 Da, respectively. The molecular mass
of murine recombinant hemopressin fused to GST was approximately 31 kDa, a value
that was obtained by SDS-PAGE analysis and confirmed by Western Blotting. The
expression yield was evaluated by densitometry, which showed an equivalent
expression yield of 147,8 mg/L of the recombinant protein.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.unb.br:10482/32579 |
| Date | 30 January 2018 |
| Creators | Oliveira, Daiane Medeiros de |
| Contributors | Sá, Maria Fátima Grossi de |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UnB, instname:Universidade de Brasília, instacron:UNB |
| Rights | A concessão da licença deste item refere-se ao termo de autorização impresso assinado pelo autor com as seguintes condições: Na qualidade de titular dos direitos de autor da publicação, autorizo a Universidade de Brasília e o IBICT a disponibilizar por meio dos sites www.bce.unb.br, www.ibict.br, http://hercules.vtls.com/cgi-bin/ndltd/chameleon?lng=pt&skin=ndltd sem ressarcimento dos direitos autorais, de acordo com a Lei nº 9610/98, o texto integral da obra disponibilizada, conforme permissões assinaladas, para fins de leitura, impressão e/ou download, a título de divulgação da produção científica brasileira, a partir desta data., info:eu-repo/semantics/openAccess |
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