Le VIH-1 fait partie d’une famille de virus, les Lentivirus, capables d’infecter des cellules quiescentes ou en fin de différenciation, telles les macrophages, les cellules dendritiques ou les lymphocytes T CD4+. Les Lentivirus ont développé des mécanismes de transport actif de leur génome à travers le pore nucléaire afin d’accéder au noyau indépendamment du cycle cellulaire. La translocation nucléocytoplasmique des macromolécules se fait physiologiquement par l’intermédiaire de karyophérines, notamment les importines-ß, qui reconnaissent un signal de localisation nucléaire et permettent ainsi le passage vers le noyau des macromolécules. De nombreux déterminants viraux ont été proposés comme la capside, l’intégrase ou encore la nucléocapside sans toutefois être démontrés catégoriquement. De l’autre côté, quelques importines ß ont été étudiées comme KPNB1, IPO7 et TNPO3 mais bien que celles-ci semblent avoir un rôle important ou favorisant le cycle viral, leur participation à l’import nucléaire stricto sensu n’a pas été prouvée. Nous avons donc décidé d’étudier l’implication des cinq importines ß cellulaires principales dans l’import nucléaire et l’infection du VIH-1, afin d’identifier si une de ces importines ß est responsable de l’entrée de l’ADN du VIH-1 dans le noyau de la cellule en cours d’infection. Notre étude a permis d’identifier pour la première fois le rôle de TNPO1 dans l’infection par le VIH-1 et plus précisément dans l’import nucléaire du VIH-1, en cellule HeLa. Nos expériences montrent un rôle de KPNB1 dans les étapes nucléaires de l’infection par le VIH-1 après le transfert de brin qui a lieu lors de l’intégration. Nos résultats suggèrent d’autre part qu’IPO5 interagit avec le VIH-1 et aurait un rôle restrictif sur son cycle réplicatif, possiblement en défavorisant son intégration au niveau de sites activement transcrits de la chromatine. Lors de nos expériences, nous n’avons jamais observé de modification des étapes précoces de l’infection virale lorsque l’expression d’IPO7 est réduite, suggérant que cette importine n’est pas utilisée par le VIH-1 afin d’infecter la cellule cible. Enfin, nos résultats ont confirmé la réduction des cercles à 2-LTR lorsque l’expression de TNPO3 est réduite, suggérant son implication dans l’import nucléaire du VIH-1 / As all lentiviruses, HIV-1 has the capacity to infect quiescent or non-dividing cells such as macrophages, dendritic cells and CD4+ T cells. Lentiviruses evolved cell cycle independent mechanisms to import actively their genomes into the nuclear compartment to reach the cellular chromatin. Physiologically, translocation of macromolecules from the cytoplasm to the nucleus is mediated by specialized karyopherins called ß-importins which recognize nuclear localization signals born by the macromolecule to import. Many viral determinants have been involved like capsid, integrase or nucleocapsid but their role in HIV-1 nuclear import is still under investigation. Besides, few ß-importins have been studied in HIV-1 infection such as KPNB1, IPO7 and TNPO3. Although the literature suggest they have a role in HIV-1 infection, their involvement in HIV-1 translocation through the nuclear pore remains unclear. We decided to investigate the role of the main five ß-importins in HIV-1 infection, nuclear import and integration in order to identify whether or not one of them if responsible for HIV-1 PIC nuclear import. Our experiments show for the first time the involvement of TNPO1 in HIV-1 infection and more precisely during the nuclear import process in HeLa cells. We also demonstrate the role of KPNB1 in post-strand transfer steps of infection. Interestingly, our data suggest that IPO5 interacts with HIV-1 and would restrict HIV-1 infection possibly by unfavoring integration into actively transcribed sites of cellular chromatin. Our experiment were unable to show IPO7 involvement in HIV-1 infection using shRNA targeting this importin, suggesting that this protein has no role in early steps of HIV-1 infection. Finally, we confirm 2-LTR circles reduction, already observed in the literature, when TNPO3 expression is reduced and suggesting its role in HIV-1 nuclear import
| Identifer | oai:union.ndltd.org:theses.fr/2016USPCC182 |
| Date | 18 November 2016 |
| Creators | Machado, Anthony Kévin |
| Contributors | Sorbonne Paris Cité, Arhel, Nathalie |
| Source Sets | Dépôt national des thèses électroniques françaises |
| Language | French |
| Detected Language | French |
| Type | Electronic Thesis or Dissertation, Text, Image |
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