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Previous issue date: 2012-02-14 / Neosporosis is considered a disease of worldwide distribution. It is caused by the
apicomplexa protozoan Neospora caninum, responsible for neuromuscular disorders
in dogs and abortions in bovines, which makes it an important pathogen in cattle
breeding. The diagnosis of this disease can be accomplished by identifying the
parasites by histological sections or by detection of specific antibodies. However,
serological methods can be hampered by cross-reactivity with other apicomplexa
parasites, such as Toxoplasma gondii. Parasite-specific antigens used for detection
of antibodies or in the production of antiserum for the detection of tachyzoites can
improve the specificity and sensitivity of diagnostic tests and studies of the biology of
the parasite. Among specific antigens of Neospora genus, NcSRS2 (Nc-p43) which is
an immunodominant surface protein stands out. It is present in tachyzoites as well as
bradyzoites. In this study, Nc-p43 protein was produced in its recombinant form (rNcp43),
by inserting the gene NcSRS2 in the cloning vector pET100/DTOPO, which
was used to transform Escherichia coli BL21 Star. rNc-p43 protein was evaluated for
reactivity with immune sera from naturally infected bovine, ovine and canine species,
and used to immunize BALB/c mice for the production of a polyclonal antibody (pAb).
rNc-p43 (pAb/rNc-p43) antibody was conjugated to fluorescein isothiocyanate (FITC)
and the reactivity with the native protein on the surface of the parasite was evaluated
by immunofluorescence. rNc-p43 protein was recognized by anti N. caninum
present in immune sera by ELISA and dot blot and it was able to generate antibodies
against the p43 antigen. The pAb/rNc-p43 reacted with the rNc-p43 protein in indirect
ELISA and Western blotting, detecting N. caninum tachyzoites in direct and indirect
immunofluorescence, with a fluorescence pattern only in the apical complex of the
parasite, maintaining affinity even after conjugation with FITC. pAb/rNc-p43 showed
no cross-reactivity with T. gondii. The results of this study suggest that the rNc-p43
obtained and the pAb produced can be useful in developing diagnostic tests based
on the detection of specific antibodies and the antigen present on the surface of the
parasite. / A neosporose é considerada uma doença de distribuição mundial, causada pelo protozoário apicomplexa Neospora caninum, causador de desordens neuromusculares em cães e abortos em bovinos, o que o torna um patógeno de
relevância na bovinocultura. O diagnóstico desta enfermidade pode ser realizado através da identificação do parasito em cortes histológicos ou pela detecção de anticorpos específicos. No entanto, os métodos sorológicos aplicados podem ser dificultados por reações cruzadas com outros parasitos apicomplexas, como Toxoplasma gondii. Antígenos específicos do parasito utilizados para detecção de
anticorpos ou na produção de insumos biológicos para a detecção de taquizoítos podem melhorar a especificidade e a sensibilidade dos testes de diagnóstico e de estudos da biologia do parasito. Entre os antígenos específicos de Neospora, destaca-se a proteína de superfície imunodominante NcSRS2 (Nc-p43), presente tanto em taquizoítos quanto em bradizoítos. Neste estudo, a proteína Nc-p43 foi
produzida em sua forma recombinante (rNc-p43), através da inserção do gene NcSRS2 no vetor de clonagem pET100/DTOPO, o qual foi utilizado para transformar
a bactéria Escherichia coli BL21 Star. A proteína rNc-p43 foi avaliada quanto a reatividade com soros imunes de animais naturalmente infectados das espécies bovina, ovina e canina; e utilizada para imunizar camundongos da linhagem BALB/c
para a produção de um anticorpo policlonal (pAb). O anticorpo anti rNc-p43 (pAb/rNc-p43) foi conjugado com isotiocianato de fluoresceína (FITC) e avaliado quanto a reação com a proteína nativa na superfície do parasito por imunofluorescência. A proteína rNc-p43 foi reconhecida por anticorpos anti N.
caninum presente nos soros imunes, através de ELISA e Dot blot e foi capaz de gerar anticorpos contra o antígeno rNc-p43. O pAb/rNc-p43 reagiu com a proteína rNc-p43 em ELISA indireto e Western blotting, detectou taquizoítos de N. caninum em imunofluorescência indireta e direta, apresentando um padrão de fluorescência somente no complexo apical do parasito, mantendo sua afinidade mesmo após sua
conjugação com FITC. O pAb/rNc-p43 não apresentou reação cruzada com T. gondii. Os resultados deste estudo sugerem que a rNc-p43 obtida e o pAb gerado podem ser úteis no desenvolvimento de testes de diagnóstico baseados na detecção de anticorpos específicos e do antígeno presente na superfície do parasito.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpel.edu.br:123456789/2317 |
| Date | 14 February 2012 |
| Creators | Sá, Gizele Lima de |
| Contributors | CPF:38423022072, lattes.cnpq.br/8784620034013411, Fernandes, Cláudia Pinho Hartieben |
| Publisher | Universidade Federal de Pelotas, Programa de Pós-Graduação em Parasitologia, UFPel, BR, Biologia |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPEL, instname:Universidade Federal de Pelotas, instacron:UFPEL |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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