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Previous issue date: 2009-02-12 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Sperm processing methods are routinely applied on the in vitro fertilization (IVF) systems for various species with the objective to remove seminal plasma/crioprotectant and to increase sperm quality. Aiming at study the sperm viability after use of the Swim-up or density gradient methods (Percoll® and CapriPure®) in frozen-thawed goat semen samples for use in assisted reproduction, six Boer goat semen samples were collected. Following, the samples were evaluated for concentration, progressive motility and morphology, diluted, packaged in straws (0.25 mL), frozen using machine and stored in liquid nitrogen. After thawing (37 oC for 30 s), sperm of all six goat were mixed-up making a pool and then were evaluated for progressive motility, membrane integrity (PI/DCF), acrossomal integrity (FITC/PNA) and mitochondrial membrane potential (JC-1). After that, the pool was split into two aliquots for the accomplishment of the sperm selection using the methods Swim-up and Percoll® (Experiment 1) and centrifugation in Percoll® and CapriPure® density gradient (Experiment 2). After use of each method of selection, the analyses was proceeded it from progressive motility, membrane integrity, acrossomal integrity and of mitochondrial integrity. Exp. 1 evidenced lower percentage of progressive motility spermatozoa (P<0.05) with intact plasma membrane (P<0.01) after use of Swim-up method, when compared with samples submitted to sperm preparation with Percoll®. In the Exp. 2, Percoll® gradient determined reduction (P<0.05) in percentage of acrosome intact spermatozoa when compared with percentage of the sample immediately after thawing, not having significant difference (P>0.05) if comparing submitted samples with the CapriPure® gradient. There were significant differences in the percentage of spermatozoa with high mitochondrial membrane potential inthe samples of semen submitted the selection using Percoll® (P<0.05) and CapriPure® (P<0.01), density gradients, when compared with the values of samples evaluated immediately after thawing. However, there were no significant difference (P<0.05) in the high mitochondrial membrane potential values between Percoll® and CapriPure® density gradients. On the basis the results of mobile spermatozoa and with the intact plasma membrane, are possible to conclude that to select viable sperm of frozen goat semen samples should use density gradient methods and CapriPure® is a good alternative to Percoll®. / Métodos de processamento espermático são rotineiramente utilizados nos sistemas de fertilização in vitro (FIV) de várias espécies, com o objetivo de remover o plasma seminal/crioprotetores e aumentar a qualidade espermática. Visando estudar a viabilidade espermática após utilização dos métodos Swim-up ou gradiente de densidade (Percoll® e CapriPure®) em amostras criopreservadas de sêmen caprino para uso em reprodução assistida, foram colhidas amostras de sêmen de seis reprodutores Boer. A seguir, as amostras foram avaliadas (motilidade progressiva, concentração, e morfologia), submetidas a duas lavagens em solução Tris, diluídas, envasadas em palhetas (0,25 mL), criopreservadas em máquina e armazenadas em botijão criobiológico (-196 oC). Após descongelação (37 oC; 30 segundos),procedeu-se à formação do pool das amostras dos reprodutores de cada dia de congelação e, a seguir, a avaliação de integridade de membrana (IP/DCF), integridade acrossomal (FITC/PNA) e potencial de membrana mitocondrial (JC-1). Em seguida, o pool foi dividido em duas alíquotas para a realização da seleção espermática utilizando os métodos Swim-up e Percoll® (Experimento 1) e centrifugação em gradiente de densidade Percoll® e CapriPure® (Experimento 2). Após utilização de cada método de seleção, procederam-se às análises de motilidade progressiva, concentração, integridade de membrana, integridade acrossomal e potencial de membrana mitocondrial. No Exp. 1 foram constatados menores porcentuais de espermatozóides portadores de motilidade progressiva (P<0,05) e de espermatozóides com membranas intactas (P<0,01) após utilização do método Swim-up, quando comparado as amostras submetidas à preparação espermática com Percoll®. No Exp. 2, o gradiente de Percoll® determinou redução (P<0,05) no porcentual de espermatozóides portadores de acrossoma intacto quando comparado ao porcentual da amostra imediatamente após a descongelação, não havendo diferença significativa (P>0,05) ao se comparar às amostras submetidas ao gradiente CapriPure®. Houve diferença significativa nos porcentuais de espermatozóides com alto potencial de membrana mitocondrial nas amostras de sêmen submetidas à seleção utilizando os gradientes de densidade Percoll® (P<0,05) e CapriPure® (P<0,01), quando comparado aos valores das amostras avaliadas imediatamente após a descongelação. No entanto, nenhuma diferença (P>0,05) foi observada entre os porcentuais de espermatozóides com alto potencial de membrana mitocondrial das amostras submetidas à seleção utilizando os gradientes de densidade Percoll® e CapriPure®. Com base nos resultados de espermatozóides móveis e com membranas intactas, é possível concluir que, para selecionar espermatozóides viáveis de amostras congeladas de sêmen caprino, deve-se usar a centrifugação em gradiente de densidade, e que o CapriPure® é uma boa alternativa ao uso doPercoll®.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:tede2:tede2/5135 |
| Date | 12 February 2009 |
| Creators | BATISTA, André Mariano |
| Contributors | GUERRA, Maria Madalena Pessoa, WISCHRAL, Áurea, CARNEIRO, Gustavo Ferrer |
| Publisher | Universidade Federal Rural de Pernambuco, Programa de Pós-Graduação em Ciência Veterinária, UFRPE, Brasil, Departamento de Medicina Veterinária |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFRPE, instname:Universidade Federal Rural de Pernambuco, instacron:UFRPE |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | -3061482854177903105, 600, 600, 600, 600, -3020210563763616780, 453670264235017319, -2555911436985713659 |
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