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Previous issue date: 2017-02-14 / Resveratrol is a natural compound, more specifically a phytoalexin, which was originally identified in the vitis vinifera grapes, with potential antioxidant activity among others already studied. Resveratrol has low solubility in water, besides chemical instability against external factors such as light, humidity and high temperature, which limits its use in some formulations by oral administration. Nanotechnology emerges with the strategy of preserving the physico-chemical properties of these compounds by nanoencapsulating them as well as increasing their bioavailability in body fluids. In this way, 0,5 mg / mL Resveratrol nanocapsules were prepared by the precipitation technique of the preformed polymer, using Eudragit S100® as a biopolymer and the essential oil of the plant Piper dilatatum Rich, as a lipid core. Nanocapsule suspensions were characterized by determination of mean particle diameter, polydispersity index, zeta potential, pH, encapsulation efficiency, drug dosage and morphology. To evaluate the biological activities, tests of antimicrobial activity by disc-diffusion and antioxidant activity were performed by the radical DPPH (1,1-diphenyl-2-picryl hydrazyl) radical method. To evaluate the cytotoxic profile, the cell viability test was performed through MTT (3-4,5-dimethylthiazolyl-2-2,5-diphenyltetrazolium bromide). Resveratrol nanocapsules had a particle diameter of 159.8 nm, polydispersity index less than 0,2, zeta potential - 12.6 mV, relatively acidic pH, encapsulation efficiency of 90% and assay of close to 100%. High performance liquid chromatography (HPLC) was used as analytical method, where it was validated through the following parameters: specificity, linearity, robustness, accuracy and precision, using as mobile phase methanol and water (47:53, v / v) , With wavelength determination of 312 nm. The method presented linearity (r2 = 0.999) and precision (DPR = 2,36% internal reproducibility and DPR = 1,03% repeatability). The accuracy was 101%, the method was robust against the analyzed parameters. The transmission electron microscopy assay showed that Resveratrol nanocapsules presented morphological characteristics in size and homogeneity for a nanoparticle. The antimicrobial assay did not present an effective result for this formulation, since there was no rupture of the nanocapsules. In the antioxidant activity assay, the two nanoencapsulated compounds presented a potential for inhibition of the DPPH radical, using as a parameter the EC50. The cytotoxic profile was delineated with low cell viability against MRC-5 cells because of the cytotoxic character formed by polysorbate 80, excipient of the formulation. The oil of the plant Piper dilatatum Rich was characterized by the CG-EM technique, where it was
identified its major compounds, which were present in the resveratrol nanocapsules. Based on these results, we can conclude that the nanocapsules of Resveratrol with lipid core the oil of Piper dilatatum Rich, besides being an innovative alternative, because it deals with polymeric nanocarreadores, it becomes a promising system for the therapy in the route of administration Oral, preserving the physical integrity of the compounds under study. As future prospects, further preformulation research, as well as in vivo and in vitro studies, where evaluation of pharmacokinetics and cytotoxicity may be required. / O Resveratrol é um composto natural, mais especificamente uma fitoalexina, que foi originalmente identificado nas uvas da espécie Vitis vinífera, com potencial atividade antioxidante entre outras já estudadas. O Resveratrol apresenta baixa solubilidade em água, além de instabilidade química frente a fatores externos como luz, umidade e temperatura elevada, o que limita o seu uso em algumas formulações por via de administração oral. A nanotecnologia surge com a estratégia de preservar as propriedades físico-químicas destes compostos, nanoencapsulando-os, bem como pode aumentar a sua biodisponibilidade nos fluidos corporais. Desta forma, foram preparadas nanocápsulas de Resveratrol na concentração de 0,5 mg/mL pela técnica da precipitação do polímero pré-formado, utilizando o Eudragit S100® como biopolímero e o óleo essencial da planta Piper dilatatum Rich, como núcleo lipídico. As suspensões de nanocápsulas foram caracterizadas através da determinação do diâmetro médio de partícula, índice de polidispersão, potencial zeta, pH, eficiência de encapsulação, doseamento do fármaco e morfologia. Para avaliar as atividades biológicas, foram realizados os testes de atividade antimicrobiana por disco-difusão e atividade antioxidante pelo método do radical DPPH (1,1-difenil-2-picril hidrazil). Para avaliar o perfil citotóxico, foi realizado o teste de viabilidade celular através do MTT {brometo de [3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazólio]. As nanocápsulas de Resveratrol apresentaram diâmetro de partícula de 159,8 nm, índice de polidispersão menor que 0,2, potencial zeta -12,6 mV, pH relativamente ácido, eficiência de encapsulação de 90% e doseamento próximo de 100%. A cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) foi utilizada como método analítico, onde este foi validado através dos seguintes parâmetros: especificidade, linearidade, robustez, exatidão e precisão, empregando como fase móvel metanol e água (47:53, v/v), com determinação em comprimento de onda de 312 nm. O método apresentou linearidade (r2= 0,999) e precisão (DPR= 2,36% de reprodutibilidade interna e DPR= 1,03 % de repetibilidade). A exatidão foi de 101%, o método foi robusto frente aos parâmetros analisados. O ensaio de microscopia eletrônica de transmissão demonstrou que as nanocápsulas de Resveratrol apresentaram características morfológicas em tamanho e homogeneidade para uma nanopartícula. O ensaio antimicrobiano não apresentou resultado efetivo para esta formulação, pois não houve o rompimento das nanocápsulas. Já o ensaio de atividade antioxidante, os dois compostos nanoencapsulados apresentaram potencial de inibição do radical DPPH, usando como parâmetro o EC50.O perfil citotóxico foi delineado
com baixa viabilidade celular frente às células de MRC-5 em virtude do caráter citotóxico formado pelo polisorbato 80, excipiente da formulação. O óleo da planta Piper dilatatum Rich foi caracterizado pela técnica de CG-EM, onde houve a identificação de seus compostos majoritários, os quais estiveram presentes nas nanocápsulas de Resveratrol. Com base nestes resultados, podemos concluir que as nanocápsulas de Resveratrol com núcleo lipídico o óleo de Piper dilatatum Rich, além de ser uma alternativa inovadora, por se tratar de nanocarreadores poliméricos, torna-se um sistema promissor para a terapêutica na via de administração oral, preservando a integridade física dos compostos em estudo. Como perspectivas futuras, são necessárias mais pesquisas de pré-formulação, bem como estudos in vivo e in vitro, onde possa haver a avaliação da farmacocinética e da citotoxicidade.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:tede.universidadefranciscana.edu.br:UFN-BDTD/554 |
| Date | 14 February 2017 |
| Creators | Martellet, MÔNICA CERUTTI |
| Contributors | Raffin, Renata Platcheck, Giacomelli, Sandro Rogério, Ourique, Aline Ferreira, Silva, Ana Luiza Maurer da |
| Publisher | Centro Universitário Franciscano, Programa de Pós-Graduação em Nanociências, UNIFRA, Brasil, Biociências e Nanomateriais |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional Universidade Franciscana, instname:Universidade Franciscana, instacron:UFN |
| Rights | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
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