A síntese de ribossomos é um dos principais processos celulares e na levedura Saccharomyces cerevisiae são necessários 75 snoRNAs e mais de 200 proteínas não-ribossomais para que o ribossomo seja corretamente formado. Para o processamento do precursor dos RNAs ribossomais, chamado pré-rRNA 35S, ocorre o pareamento deste com o U3 snoRNA e outros snoRNAs e diversas proteínas se associam de maneira orquestrada e transitória, formando o complexo SSU processomo. Tal complexo é necessário para o processamento da região 5\' do pré-rRNA 35S e para a correta montagem e maturação da subunidade menor ribossomal. Estudos anteriores do nosso laboratório identificaram a proteína nucleolar Utp25, essencial em S. cerevisiae, como integrante do complexo SSU processomo. Foi demonstrado que a depleção de Utp25 afeta a formação da subunidade menor ribossomal e que Utp25 interage com as proteínas Sas10 e Mpp10, componentes do SSU processomo, além de Utp25 co-imunoprecipitar o snoRNA U3. A partir desses dados, este trabalho teve como objetivo identificar interações da proteína Utp25 com outros componentes do complexo SSU processomo e investigar o papel de tais interações na formação e funcionamento do mesmo. Para purificação do complexo SSU processomo nós utilizamos o método Tandem Affinity Purification-tag (TAP-tag) utilizando TAP-Utp25 como isca. Após análise do purificado resultante por espectrometria de massas, obtivemos como resultado as proteínas Rrp5, Snu13 e Nop56, sendo as duas últimas pertencentes ao subcomplexo U3 snoRNP. / The ribosome synthesis is one of the main cellular processes and in the yeast Saccharomyces cerevisiae 75 snoRNAs and more than 200 non-ribosomal proteins are involved in ribosome maturation. During processing, the pre-rRNA 35S base pairs with the U3 snoRNA and other snoRNAs and several proteins associate, forming the SSU processome complex. This complex is required for the processing of the pre-rRNA 35S 5\' region and for the correct assembly and maturation of the ribosome small subunit. Previous studies from our laboratory identified the nucleolar protein Utp25, essential in S. cerevisiae, as a member of the SSU processome complex. Utp25 depletion affects small ribosomal subunit formation. Utp25 interacts with proteins Sas10 and Mpp10, components of the SSU processome, and Utp25 co-immunoprecipitates U3 snoRNA. From these data, this study aimed to identify Utp25 interactions with other components of the SSU processome complex and to investigate the role of these interactions in this complex formation and function. For the SSU processome complex purification we used the Tandem Affinity Purification-tag method (TAP-tag) and TAP-Utp25 as the bait. After the resulting purified analysis by mass spectrometry, we obtained as results the Rrp5, Snu13 and Nop56 proteins, the last two being U3 snoRNP subcomplex components.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:usp.br/oai:teses.usp.br:tde-14092016-093631 |
| Date | 15 July 2016 |
| Creators | Marques da Cruz, Ana Maria Martins |
| Contributors | Oliveira, Carla Columbano de |
| Publisher | Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP |
| Source Sets | Universidade de São Paulo |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | Dissertação de Mestrado |
| Format | application/pdf |
| Rights | Liberar o conteúdo para acesso público. |
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