Résumé
La ribonucléase P (RNase P) est une ribonucléoprotéine omniprésente dans tous les règnes
du vivant, elle est responsable de la maturation en 5’ des précurseurs des ARNs de transfert
(ARNts) et quelques autres petits ARNs. L’enzyme est composée d'une sous unité catalytique
d'ARN (ARN-P) et d'une ou de plusieurs protéines selon les espèces. Chez les eucaryotes,
l’activité de la RNase P cytoplasmique est distincte de celles des organelles (mitochondrie et
chloroplaste).
Chez la plupart des espèces, les ARN-P sont constituées de plusieurs éléments
structuraux secondaires critiques conservés au cours de l’évolution. En revanche, au niveau
de la structure, une réduction forte été observé dans la plupart des mtARN-Ps. Le nombre de
protéines composant la RNase P est extrêmement variable : une chez les bactéries, environ
quatre chez les archéobactéries, et dix chez la forme cytoplasmique des eucaryotes. Cet
aspect est peu connu pour les formes mitochondriales.
Dans la plupart des cas, l’identification de la mtRNase P est le résultat de longues
procédures de purification comprenant plusieurs étapes dans le but de réduire au minimum le
nombre de protéines requises pour l’activité (exemple de la levure et A. nidulans). Cela mène
régulièrement à la perte de l’activité et de l’intégrité des complexes ribonucléo-protéiques
natifs.
Dans ce travail, par l’utilisation de la technique de BN-PAGE, nous avons développé
une procédure d’enrichissement de l’activité RNase P mitochondriale native, donnant un
rendement raisonnable. Les fractions enrichies capables de cette activité enzymatique ont été
analysées par LC/MS/MS et les résultats montrent que l’holoenzyme de la RNase P de
chacune des fractions contient un nombre de protéines beaucoup plus grand que ce qui était
connue. Nous suggérons une liste de protéines (principalement hypothétiques) qui
accompagnent l’activité de la RNase P.
IV
De plus, la question de la localisation de la mtRNase P de A. nidulans a été étudiée,
selon nos résultats, la majorité de la mtRNase P est attachée á la membrane interne de la
mitochondrie. Sa solubilisation se fait par l’utilisation de différents types de détergent. Ces
derniers permettent l’obtention d’un spectre de complexes de la RNase P de différentes
tailles. / Abstract
RNase P is a ribonucleo-protein complex (an RNA enzyme or ribozyme) that cleaves 5’
leader sequences of precursor tRNAs and a few other small RNAs. It occurs in all three
domains of life, Bacteria, Archaea and Eukarya, with the latter containing distinct nuclear
and organellar (mitochondrial or plastid) activities. In most instances, the complex contains a
single, well-conserved RNA subunit that carries the active center of the enzyme. Yet,
compare to bacterial and nuclear P RNA, most mtP RNAs are structurally highly reduced.
The number of P proteins is highly variable: one in Bacteria, about four in Archaea, and ten
in the cytoplasmic form of Eukarya. Much less is known in the case of mitochondria.
MtRNase P is usually purified by using numerous separation steps that include
unphysiological conditions, leading to complexes having a minimum number of subunits
(e.g., in yeast and Aspergillus nidulans), that often loose their activity. Here, using BN
PAGE, we have developed an enrichment procedure for A. nidulans mtRNase P that avoids
some of the most disruptive conditions. The protein composition of active fractions was
identified with LC/MS/MS, indicating that the RNase P holoenzyme is much larger than
previously thought.
Finally, the question of mtRNase P localization within mitochondria was investigated,
by tracing its RNA subunit by RT PCR. We found that mtRNase P of A. nidulans is a
predominantly membrane-attached enzyme; it is in part solubilized by detergents such as
digitonin and Triton.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:umontreal.ca/oai:papyrus.bib.umontreal.ca:1866/3792 |
| Date | 01 1900 |
| Creators | Javadi Khomami, Pasha |
| Contributors | Lang, Franz Bernd |
| Source Sets | Université de Montréal |
| Language | English |
| Detected Language | French |
| Type | Thèse ou Mémoire numérique / Electronic Thesis or Dissertation |
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