Memoria para optar al título de Bioquímico / El desarrollo de la salmonicultura chilena ha sido acompañado por la
aparición de una serie de patologías. Actualmente, la enfermedad infecciosa
responsable de las mayores mortalidades y el consiguiente impacto económico en
la industria, es la Septicemia Rickettsial de los Salmónidos (SRS) o
piscirickettsiosis.
Debido a que los tratamientos con antibióticos no han proporcionado un
control eficaz de los brotes infecciosos, se han desarrollado vacunas como método
de prevención contra la enfermedad. Sin embargo, la eficacia de vacunas
comerciales basadas en bacterinas de Piscirickettsia salmonis, ha mostrado
resultados variables, y la información sobre la efectividad de formulaciones
experimentales basadas en proteínas recombinantes y en ácidos nucleicos en
pruebas experimentales y de campo es escasa, lo cual pone de manifiesto la
necesidad de investigar nuevas alternativas en el desarrollo de vacunas.
El objetivo central de este estudio fue comparar el efecto de una formulación
basada en complejos inmunes con P. salmonis inactivada con el de una formulación
preparada con la bacterina libre, sobre el sistema inmune de salmón del Atlántico
(Salmo salar). De esta forma, se evaluaron algunos parámetros de la respuesta
inmune innata como el estallido respiratorio de los leucocitos y la actividad de la
lisozima, los cuales no se habían estudiado previamente con este patógeno y en el
modelo animal empleado. Además, se evaluó la respuesta inmune humoral
adquirida, comparando el nivel de anticuerpos en peces inmunizados.
La inmunización con complejos inmunes tuvo un efecto positivo sobre los
mecanismos innatos, ya que indujo una mayor actividad de los leucocitos
comparado con la bacterina libre, lo cual fue demostrado por el aumento de la
actividad de la lisozima en suero, y la producción de ión superóxido. Por otro lado, no se detectaron diferencias significativas en la producción de anticuerpos entre los
grupos inmunizados y el grupo control, y la respuesta observada en este grupo
pudo deberse a la exposición previa de salmón del Atlántico a microorganismos que
comparten estructuras antigénicas con P. salmonis, lo cual fue demostrado en el
ensayo de aglutinación por la reactividad cruzada de los sueros con Arthrobacter
sp. y Flavobacterium psychrophilum. En general, bajo las condiciones del estudio, la
formulación con la bacterina libre mostró una tendencia a disminuir las respuestas
innatas y adquiridas, sugiriendo un efecto inmunosupresor de P. salmonis en
salmón del Atlántico.
La estimulación de leucocitos de salmón in vitro, no mostró diferencias
significativas entre los tratamientos con complejos inmunes y la bacterina libre. Sin
embargo sugirió una respuesta dependiente de la dosis agregada.
Para cumplir con los objetivos planteados fue necesario implementar una
serie de técnicas inmunológicas que permitirán, en próximos estudios, correlacionar
los resultados obtenidos en los distintos ensayos con el nivel de protección inducido
y su duración, de manera que aumentará nuestro conocimiento de la inmunología
de Salmo salar, y hará posible predecir la efectividad de vacunas experimentales en
etapas tempranas posteriores a la inmunización / Development of Chilean salmon industry has been accompanied by the
appearance of a series of diseases. Today, the infectious disease responsible of the
highest mortalities and the resulting economic losses of the industry is salmonid
rickettsial septicemia (SRS) or piscirickettsiosis.
Because the antibiotic therapies have failed to provide an effective control
system of outbreaks, vaccines have been developed as a prevention method.
However, effectiveness of commercial vaccines based on P. salmonis bacterins, has
shown variable results, and there is a lack of information about the effectiveness of
experimental vaccines based on recombinant proteins or nucleic acids in laboratory
and field trials, which reveals the need of research on new approaches in the field of
vaccine development.
The central aim of this study was to compare the effect of a formulation
based in immune complexes of inactivated P. salmonis with the effect of another
one prepared with the free bacterin, on the immune system of Atlantic salmon
(Salmo salar) Therefore, some innate parameters as leucocyte respiratory burst and
lysozyme activity, where evaluated. This parameters had not been previously
studied with this pathogen and in the fish model employed. In addition, the adaptive
humoral immune response was evaluated by comparing the antibody levels in
immunized fish.
Immunization with immune complexes had a positive effect on innate
mechanisms, and led to a greater activity of leucocytes, which was shown by the
increased lysozyme activity in serum, and superoxide anion production. On the
other hand, statistically significant differences in antibody production were not
detected between immunized and control groups, and the observed response inside this group may be due to previous exposure of Atlantic salmon to microorganisms
that share antigenic structures with P. salmonis, which was shown by the crossreactivity
of the assessed sera with Arthrobacter sp. and Flavobacterium
psychrophilum in the agglutination assay. Under the conditions of this study, the free
bacterin based formulation showed a tendency to diminish the innate and acquired
immune responses, suggesting an immunosuppressive effect of P. salmonis on
Atlantic salmon.
In vitro stimulation of salmon leucocytes didn’t show significant differences
between treatments with immune complexes or bacterin alone. However, it
suggested a dose-dependent response.
To achieve the aims of this study, it was necessary to develop several
immunological techniques which will allow, in future researches, make a correlation
between the obtained results of all this different assays with the induced protective
level and its duration, in such a way that will increase our knowledge of Salmo salar
immunology, and will allow the prediction of experimental vaccines effectiveness at
early stages after immunization
| Identifer | oai:union.ndltd.org:UCHILE/oai:repositorio.uchile.cl:2250/105617 |
| Date | January 2007 |
| Creators | Soto Lampe, Edith Verónica |
| Contributors | Miranda Wilson, Dante, Jaureguiberry Labbe, Beltrán, Facultad de Ciencias Químicas y Farmacéuticas, Departamento de Bioquímica y Biología Molecular |
| Publisher | Universidad de Chile, Programa Cybertesis |
| Source Sets | Universidad de Chile |
| Language | Spanish |
| Detected Language | Spanish |
| Type | Tesis |
| Rights | Soto Lampe, Edith Verónica |
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