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Previous issue date: 2011-05-06 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / subtropical regions of the planet. In North America, Plasmodium vivax is responsible
for the most part of the infections. In 2011, 250,498 cases of malaria fever were
studied; 80% of these cases were caused by Plasmodium vivax.
The purpose of this study was to investigate the diversity generation of the
gene MSP1 from Plasmodium vivax through the analisys of a specific mutation in the
region from the block 2 genetic precombination events.
In order to identify the existing mutations in multiclonal infections and
generation of diversity in PvMSP1 a series of experiments were done, respectively,
the extraction of genomic DNA of the parasite, PCR (polymerase chain reaction)
using specific primers for the block 2, ligation of the fragment to cloning vector (top),
processing using Escherichia coli competent cells, selection of colonies belonging to
the same sample, DNA sequencing and analysis of synonymous and nonsynonymous
mutations as their location in the prediction of B and T cell epitopes (not
synonymous).
The calculation of genetic distance between recombinant clones of the same
sample by the MEGA 4.0 program confirmed the multiclonality of samples. The
alignment of amino acid sequences showed the presence of genetic recombination
events using DNASP program. DNA sequences obtained showed another interesting
result: several synonymous and non-synonymous mutations in a relatively small
stretch of DNA. Genetic diversity showed most mutations are not synonymous, and
that most of them were located in regions referred to as B and T cell epitopes by
BcPred and ProPred.
So, as expected, the genetic diversity based on synonymous mutations and
not synonymous possible sustains the phenomenon of escape on the immunity of the
host. The characterization of these polymorphisms may contribute to immunological
studies aiming at the development of a vaccine against malaria on stages caused by
p. vivax. / A malária é um problema da saúde pública amplamente distribuída nas
regiões tropicais e subtropicais do globo. No continente americano, o Plasmodium
vivax é responsável por maior parte das infecções. No ano de 2011, 250.498 casos
de malária foram observados no estado do Amazonas; 80% destes casos foram
causados por Plasmodium vivax.
O objetivo desse trabalho foi Investigar a geração de diversidade do gene
MSP1 de Plasmodium vivax através da análise de mutações pontuais na região do
bloco 2, eventos de precombinação genética.
Para identificar as mutações existentes nas infecções multiclonais e geração
de diversidade em PvMSP1 realizou-se uma série de experimentos,
respectivamente, a extração de DNA genômico do parasita, PCR (Reação da
Polimerase em Cadeia) utilizando primers específicos para o bloco 2, ligação do
fragmento ao vetor de clonagem ( TOPO), transformação utilizando células de E.coli
competentes , seleção de colônias pertencentes a uma mesma amostra,
seqüenciamento de DNA e análise das mutações não sinônimas e sinônimas
quanto sua localização em regiões de predição de epítopos de células B e T (não
sinônimas).
O cálculo da distância genética entre clones recombinantes de uma mesma
amostra pelo programa MEGA 4.0 confirmou a multiclonalidade das amostras. O
alinhamento das sequências de aminoácidos mostrou a presenção de eventos de
recombinação genética utilizando o programa DNASP. As sequências de DNA
obtidas demonstrou outro resultado interessante: várias mutações sinônimas e não
sinônimas num trecho relativamente pequeno de DNA. A diversidade genética
mostrou mais mutações não sinônimas, sendo que maior parte delas estavam
localizadas em regiões previstas como epítopos das células B e T pelo programa
BcPred e ProPred.
Assim, como esperado, a diversidade genética baseado nas mutações
sinônimas e não sinônimas sustenta o fenômeno de escape sobre a imunidade do
hospedeiro. A caracterização desses polimorfismos poderá contribuir para estudos
imunológicos visando o desenvolvimento de uma vacina contra os estágios
eritrocitários da malária causada por P.vivax.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:http://localhost:tede/2249 |
| Date | 06 May 2011 |
| Creators | Evangelista, Janaína de Araújo |
| Contributors | Nogueira, Paulo Afonso |
| Publisher | Universidade Federal do Amazonas, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, UFAM, BR, Instituto de Ciências Biológicas |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFAM, instname:Universidade Federal do Amazonas, instacron:UFAM |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | 32215883775770440, 600 |
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