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Previous issue date: 2009 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Os tripanosomatídeos, agentes causadores de enfermidades de impacto mundial, se destacam
dos demais eucariotos por apresentarem um conjunto de processos moleculares únicos,
inclusive a ausência de controle da sua transcrição. Dessa forma, o controle de sua expressão
gênica deve ocorrer após a transcrição. Assim, um ponto importante de controle é a iniciação
da tradução, um processo ainda pouco conhecido nos tripanosomatídeos. Em eucariotos, de
forma geral, esta começa com a ligação ao mRNA do complexo eIF4F, formado pelos
polipeptídeos: eIF4E, eIF4A e eIF4G. A subunidade eIF4G atua como proteína estruturadora
do complexo se ligando às demais subunidades e a outros fatores de tradução. Em
Trypanosoma brucei foram identificados cinco homólogos do eIF4G, conservados em
Leishmania major, denominados de TbEIF4G1-5. Este trabalho buscou contribuir com a
caracterização dos homólogos TbEIF4G1 e TbEIF4G2 a partir da amplficação e clonagem dos
seus genes, completos e/ou fragmentos contendo seu domínio HEAT central, em vetor de
expressão bacteriano. A análise das sequências clonadas apresentou divergências genéticas
em relação às descritas na literatura, mas, a princípio, de baixo significado biológico. Em
seguida, realizou-se a expressão das respectivas proteínas recombinantes e obtenção de soro
policlonal em coelhos. Estes soros foram utilizados em ensaios de western-blot e
imunocitoquímica para analisar a expressão das proteínas nativas e sua localização subcelular.
Os mesmos genes foram também clonados em vetor plasmidial para superexpressão da
proteína recombinante fusionada à EYFP em T. brucei. Observou-se que o TbEIF4G1 é
expresso na fase procíclica, mas é raro ou ausente na sanguínea. Já o TbEIF4G2 é expresso
raramente ou ausente em ambas as fases. Ambas as proteínas se mostraram exclusivamente
citoplasmáticas, o que reforça um papel na tradução que merece ser melhor estudado com as
ferramentas, proteínas e anticorpos, produzidos neste estudo
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpe.br:123456789/6119 |
| Date | 31 January 2009 |
| Creators | Pontes de Lima, Rodrigo |
| Contributors | Pompílio de Melo Neto, Osvaldo |
| Publisher | Universidade Federal de Pernambuco |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPE, instname:Universidade Federal de Pernambuco, instacron:UFPE |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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