Enligt "Leaky gut”-hypotesen är ökad translokation av gramnegativa bakterier genom tarmslemhinnan förknippad med neuroimmuna störningar. Denna ökning av permeabiliteten i tarmslemhinnan kan orsakas av störning i tarmfloran efter antibiotikabruk eller sjukdom, vilket kan leda till inflammatoriska processer. Inflammation har sedan tidigare blivit förknippad med allvarlig depressiv störning och självmordsbeteende. Studiens syfte var att utveckla och validera en qPCR-baserad metod för att kunna detektera DNA från tarmbakterier i blod/plasma, som ett tecken på translokering av bakterier. Två primerpar för amplifiering av 16S rDNA utreddes genom observation av PCR-reaktioner med humant och bakteriellt DNA. Det mest optimala primerparets PCR effektiviteten och linjäriteten testades. Metodens funktion kontrollerades sedan med helblod och plasma med tillsats av exogent DNA från E.coli. Den utvecklade qPCR metoden detekterar bakterie DNA i prov med 10 kopior/µl, vilket gör den tillräckligt känslig för detektion av tarmbakterier i blod. / According to the "Leaky gut" hypothesis, increased translocation of gram-negative bacteria through the intestinal mucosa is associated with neuroimmune disorders. The increase of permeability of the intestinal mucosa may be caused by disturbance of the intestinal flora after antibiotic use or disease, which can lead to inflammatory processes. Inflammation has previously been associated with major depressive disorder and suicidal behavior. The purpose of the study was to develop and validate a qPCR-based method for detecting DNA from intestinal bacteria in blod/plasma, as a sign of decreased mucosal integrity. Two different primer pairs, targeting 16S rDNA, were investigated by observing their PCR reactivity with human and bacterial DNA. PCR efficiency and linearity were tested on the most optimal primer pair. The function of the method was then verified with whole blood and plasma with the addition of exogenous DNA from E.coli. The developed qPCR method detects bacterial DNA in samples at 10 copies/µl, making it sufficiently sensitive for detection of intestinal bacterial DNA in blood.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:UPSALLA1/oai:DiVA.org:mau-25485 |
| Date | January 2020 |
| Creators | Johansson, Kajsa |
| Publisher | Malmö universitet, Fakulteten för hälsa och samhälle (HS), Malmö universitet/Hälsa och samhälle |
| Source Sets | DiVA Archive at Upsalla University |
| Language | Swedish |
| Detected Language | Swedish |
| Type | Student thesis, info:eu-repo/semantics/bachelorThesis, text |
| Format | application/pdf |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
Page generated in 0.0019 seconds