Šiame darbe tirta TetA ir AcrAB siurblių veikla Escherichia coli ląstelėse, panaudojant lipofilinius tetrafenilfosfonio (TPP+) jonus bei mikrobiologiniais ląstelių gyvybingumo tyrimo metodais įvertintas pasirinktų E. coli padermių jautrumas tetraciklinui. Buvo nustatyta, kad atspariausios tetraciklinui yra IQ86 ląstelės, transpozone Tn10 turinčios TetA siurblį koduojančius genus. Registruodami TPP+ pasiskirstymą tarp ląstelių ir jų inkubacinės terpės, nustatėme, kad tetraciklinas didina E. coli ląstelių išorinės membranos (IM) laidumą lipofiliniams junginiams. EDTA pagalba pralaidinus E. coli ląstelių IM, tetraciklinas lengviau patenka į ląstelę. Tai rodo, kad šis antibiotikas į ląstelę patenka ne tik per porinus, bet ir prasiskverbdamas per IM lipidinį dvisluoksnį. TPP+ jonus iš E.coli ląstelių išmetinėjantys DVA siurbliai taip pat sąveikauja ir su tetraciklinu bei chloramfenikoliu. Inkubuojant ląsteles su tetraciklinu, indukuojama šį antibiotiką išstuminėjančio TetA siurblio genų raiška. Vienok, inkubacija su tetraciklinu gali sutrikdyti kitų E. coli ląstelėse esančių DVA siurblių veiklą. Rezerpinas ir chlorpromazinas efektyviai slopina tetracikliną iš ląstelių išstuminėjančių siurblių veiklą, o fenilalanin-arginin- naftilamidas E. coli ląstelių atveju nepasižymi DVA siurblius slopinančiu poveikiu. Nustatyta, kad DVA siurblių slopiklių poveikis stipresnis, kai jie sąveikauja su ląstelėmis terpėje be antibiotikų. / We used lipophilic tetraphenilphosphonium (TPP+) ions for functional analysis of multidrug resistance (MDR) pumps TetA and AcrAB in Escherichia coli cells. We have found that tetracycline increases the cell outer membrane permeability to lipophilic compounds. Tetracycline entered the cells faster when the bacterial outer membrane was permeabilized using EDTA. These results indicate that tetracycline enters the cell not only through the porins, but also it penetrates the lipid bilayer of the outer membrane. MDR pumps extruding TPP+ ions from E. coli cells, also interact with tetracycline and chloramphenicol. Genes of TetA pump are induced, when the cells are incubated with low concentrations of tetracycline. On the other hand, incubation of the cells with tetracycline disturbs the activity of others MDR pumps in E. coli. Reserpine and chlorpromazine effectively inhibit activity of tetracycline-extruding MDR pumps, but Phe-Arg-β-naphtylamide does not show any inhibitory activity. Finally, it has been shown that action of the MDR pump inhibitors is stronger, when they are added to the bacterial suspension in the absence of antibiotics.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:LABT_ETD/oai:elaba.lt:LT-eLABa-0001:E.02~2007~D_20090908_194033-38249 |
| Date | 08 September 2009 |
| Creators | Švambarytė, Sandra |
| Contributors | Daugelavičius, Rimantas, Vilnius University |
| Publisher | Lithuanian Academic Libraries Network (LABT), Vilnius University |
| Source Sets | Lithuanian ETD submission system |
| Language | Lithuanian |
| Detected Language | English |
| Type | Master thesis |
| Format | application/pdf |
| Source | http://vddb.library.lt/obj/LT-eLABa-0001:E.02~2007~D_20090908_194033-38249 |
| Rights | Unrestricted |
Page generated in 0.0024 seconds