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Signalkaskaden und Steuermechanismen in den Speicheldrüsen von Dipteren / Signalling pathways and control mechanisms in the salivary glands of Diptera

Flüssigkeitssekretion und Proteinsekretion werden in Speicheldrüsen von Insekten über Hormone und Neurotransmitter gesteuert. Diese entfalten ihre physiologische Wirkung in den sekretorischen Drüsenzellen hauptsächlich über den zyklischen Adenosinmonophosphat (cAMP)-Signalweg und den Inositoltrisphosphat (IP<SUB>3</SUB>) / Ca<sup>2+</sup>-Signalweg. Die Mechanismen möglicher Wechselwirkungen zwischen diesen Signalwegen und ihre physiologischen Auswirkungen sind unzureichend bekannt.<p>
Im Mittelpunkt dieser Arbeit stand die Frage, ob und wie sich der Ca<sup>2+</sup>-Signalweg und der cAMP-Signalweg in der Speicheldrüse der Diptere <I>Calliphora vicina</I> beeinflussen. Substanzen wie 5-Fluoro-α-Methyltryptamin und Histamin wurden in früheren Arbei-ten als Agonisten genutzt, um in den Speicheldrüsen von <I>C. vicina</I> selektiv den cAMP-Signalweg (getrennt vom IP<SUB>3</SUB>/Ca<sup>2+</sup>-Signalweg) zu aktivieren. Es zeigte sich in transepithelialen Potentialmessungen und mikrofluorometrischen Ca<sup>2+</sup>-Untersuchungen, dass beide Substanzen sowohl den cAMP-Weg als auch den Ca<sup>2+</sup>-Signalweg aktivierten. Die physiologischen Ursachen der Histamin-induzierten Ca<sup>2+</sup>-Erhöhung wurden genauer untersucht. <p>
Zusammengefasst zeigten diese Untersuchungen, dass Histamin wie 5-HT den cAMP-Weg und die Phosphoinositidkaskade aktivierte. Im Gegensatz zu den 5-HT-induzierten Ca<sup>2+</sup>-Oszillationen, welche durch interzelluläre Ca<sup>2+</sup>-Wellen synchronisiert werden, verursachte Histamin bei niedrigen Konzentrationen lokale Ca<sup>2+</sup>-Oszillationen in einzelnen Zellen (keine Wellen). Bei höheren Histamin-Konzentrationen war eine anhaltende Ca<sup>2+</sup>-Erhöhung oder ein synchrones <quote>Ca<sup>2+</sup>-beating</quote> in der gesamten Drüse zu beobachten. <p>
Des Weiteren wurde die Frage untersucht, ob eine Erhöhung der intrazellulären cAMP-Konzentration den IP<SUB>3</SUB> Ca<sup>2+</sup>-Signalweg in den Epithelzellen der Speicheldrüse beeinflussen kann. Es zeigte sich, dass cAMP den durch schwellennahe 5-HT-Konzentrationen induzierten Ca<sup>2+</sup>-Anstieg verstärkte. Diese Verstärkung wurde durch eine PKA-vermittelte Sensitivierung des IP<SUB>3</SUB>-Rezeptor/Ca<sup>2+</sup>-Kanals für IP<SUB>3</SUB> verursacht. Immunzytochemische Untersuchungen deuten dar-auf hin, dass die Proteinkinase A eng mit dem IP<SUB>3</SUB>-Rezeptor/Ca<sup>2+</sup>-Kanal assoziiert ist.
Diese Messungen zeigen erstmals, dass auch bei Invertebraten der Botenstoff cAMP, PKA-vermittelt, den IP<SUB>3</SUB>-Rezeptor/Ca<sup>2+</sup>-Kanal des ER für IP<SUB>3</SUB> sensitiviert. / Fluid- and protein-secretion in the salivary glands of insects are controlled by hormones or neurotransmitters. These agonists activate two signalling cascades: the cAMP-pathway and the IP>sub>3</sub>/Ca-pathway. The functional crosstalk between these two signalling pathways is poorly understood. <p>
Functional crosstalk between cAMP-pathway and IP<sub>3</sub>/Ca<sup>2+</sup>-pathway was investigated in the salivary glands of the blowfly, <I>Calliphora vicina</I>. Histamine and 5-alpha-methyltryptamine were used in an attempt to activate the cAMP-pathway selectively, as suggested previously. By using transepithelial potential-measurements and microfluorometric Ca<sup>2+</sup>-imaging it was demonstrated that both substances activate the cAMP- and the IP<sub>3</sub>/Ca<sup>2+</sup>-pathway. The physiological effects of histamine were investigated in detail. These experiments show that histamine causes an intracellular Ca<sup>2+</sup>-elevation that, in some preparations exhibits oscillations with concentration-dependent frequencies. In contrast to 5-HT induced intracellular Ca<sup>2+</sup>-oscillations and propagating intercellular Ca<sup>2+</sup>-waves histamine produces local Ca<sup>2+</sup>-oscillations in single cells or synchronous <quote>Ca<sup>2+</sup>-beating</quote> in the whole gland.<p>
In addition the effects of increasing cAMP on the IP<sub>3</sub>/Ca<sup>2+</sup>-pathway in the salivary glands of the blowfly were studied. It could be demonstrated that cAMP augments the 5-HT-induced Ca<sup>2+</sup>-increase in glands stimulated with low doses of 5-HT. This potentiation is the result of a PKA-mediated sensitisation of the IP<sub>3</sub>-receptor/Ca<sup>2+</sup>-channel for IP<sub>3</sub>. Results of immunocytochemical analyses show that the PKA is spatially associated with the ER.<p>
These results show for the first time that in invertebrates as well as in vertebrates the second messenger cAMP sensitises the IP<sub>3</sub>-receptor/Ca<sup>2+</sup>-channel for IP<sub>3</sub> by the action of a PKA.

Identiferoai:union.ndltd.org:Potsdam/oai:kobv.de-opus-ubp:771
Date January 2006
CreatorsSchmidt, Ruth Maria
PublisherUniversität Potsdam, Mathematisch-Naturwissenschaftliche Fakultät. Institut für Biochemie und Biologie
Source SetsPotsdam University
LanguageGerman
Detected LanguageGerman
TypeText.Thesis.Doctoral
Formatapplication/pdf
Rightshttp://opus.kobv.de/ubp/doku/urheberrecht.php

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