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Previous issue date: 2007 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Introdução: Trichosporon tem sido descrito como patogeno oportunista emergente relacionado as infeccoes disseminadas em pacientes imunocomprometidos, sobretudo em individuos apresentando neutropenia intensa. E bastante evidente que ha poucas informacoes disponiveis sobre as caracteristicas das infeccoes por este patogeno principalmente nos hospitais brasileiros, sendo necessaria a realizacao de estudos que permitam a caracterizacao do seu perfil epidemiologico. Objetivos: 1) Identificar por metodos fenotipicos e genotipicos as especies de Trichosporon isoladas de hemoculturas obtidas de pacientes hospitalizados; 2) Adaptar a metodologia do CLSI para a avaliacao da sensibilidade a antifungicos de isolados de Trichosporon spp.; 3) Avaliar Etest® para predizer a sensibilidade a anfotericina B; 4) Avaliar o perfil de sensibilidade de diferentes especies do genero Trichosporon, em relacao a seis antifungicos. Material e Metodos: Foram utilizadas 23 cepas de Trichosporon spp. isoladas de hemoculturas provenientes de dois hospitais terciarios da cidade de São Paulo e coletadas entre os anos de 1995 e 2004. As leveduras foram identificadas em nivel de especie atraves de caracteristicas morfologicas e bioquimicas, sendo esta identificacao confirmada por estudos moleculares. Para tanto, foi amplificada a regiao 18S do rDNA para a confirmacao da identificacao do genero e realizado o sequenciamento da regiao IGS 1 para confirmacao da identificacao de especie. A avaliacao da sensibilidade aos antifungicos foi realizada por dois diferentes metodos: microdiluicao em caldo e difusao em agar por Etest®. Resultados: A identificacao fenotipica foi comparada com a genotipica demonstrando algumas incongruencias quanto as duas metodologias. Tres isolados foram erroneamente identificados como: T asteroides (identificacao molecular: T asahii varo asahil); T inkin (identificacao molecular: Tasahii var. asahii) e T asahii (identificacao molecular: T asteroides), enquanto que quatro isolados nao foram identificados em nivel de especie pelo metodo fenotipico. Houve 61 por cento de concordancia entre as duas metodologias, sendo T asahii a especie mais frequentemente identificada na presente serie. Anfotericina B foi o unico antifungico testado pelas duas metodologias. As CIMs da microdiluicao em caldo apresentaram-se distribuidas em menor espectro de diluicoes, enquanto que no Etest@ as CIMs apresentaram-se num largo espectro. Os isolados de T asahii apresentaram CIMs mais elevadas e menores indices de sensibilidade a anfotericina B, por ambos os metodos, quando comparados com isolados de T nao-asahii. Houve elevada sensibilidade aos azolicos. Em contrapartida, 5-fluorocitosina e caspofungina nao apresentaram atividade in vitro contra estes isolados. Conclusao: O sequenciamento da regiao IGS1 foi suficiente para a identificacao de todos os isolados clinicos incluindo especies geneticamente relacionadas. Mesmo utilizando numero limitado de cepas, observamos que os triazolicos apresentaram melhor padrao de atividade antifungica contra os isolados de Trichosporon spp / Introduction: The genus Trichosporon has been described as an emergent opportunistic pathogen related to disseminated infections in immunocompromised patients, specifically those individuals with intense neutropenia. It is highly evident that there is not enough information available about the characteristics of the infection caused by this pathogen, mainly in Brazilian hospitals. Therefore, it is important to investigate trichosporonosis epidemiology. Objectives: 1) To identify strains isolated from blood cultures using phenotypic and genotypic methods. 2) To adapt CLSI methodology for the evaluation of Trichosporon spp. sensitivity to antifungal drugs. 3) To evaluate Etest® for predicting sensitivity to Amphotericin B. To evaluate the sensitivity profile of different Trichosporon species to 6 antifungal drugs. Material and methods: We analyzed 23 strains of Trichosporon spp.
recovered from blood cultures of two tertiary hospitals in São Paulo and collected between 1995 and 2004. The yeasts were identified to species level based on their morphological and biochemical characteristics and subsequently by molecular
biology. For those purposes, we amplified the18S rDNA region to confirm genus
identification and sequenced the IGS1 region of rDNA to confirm species phenotypic
identification. We used two different methods to investigate sensitivity to antifungal
drugs: broth microdilution and agar-diffusion disk test using Etest®. Results: We
observed some incongruences between the phenotypic and genotypic methods used
for identification. Three isolates were misidentified as T. asteroids (molecular
identification: T. asahii var. asahii). T. inkin (molecular identification: T. asteroids),
while four isolates could not be identified to species level using phenotypic methods.
The two different methods agreed on 61% of the cases. T. asahii was the most
commonly isolated species in the present study. Amphotericin B was the only
antifungal drug tested with both methodologies. Broth microdilution MICs were less
variable within different dilutions, while Etest® MICS showed broader variation. T.
asahii isolates had higher MICs values and were less susceptible to Amphotericin B
for both methods than Non-Asahii Trichosporon. The isolates were highly sensitive to
azoles. Nevertheless, 5-fluorocitosin and caspofungin had no in vitro activity against
the clinical isolates analyzed. Conclusion: The IGS1 region sequencing was enough
to identify all the clinical isolates, including closely related species. Although the
number of strains tested was small, we observed that triazoles had better antifungal
activity against Trichosporon spp. isolates. / BV UNIFESP: Teses e dissertações
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.unifesp.br:11600/23440 |
| Date | January 2007 |
| Creators | Chagas-Neto, Thomas Cardoso [UNIFESP] |
| Contributors | Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), Colombo, Arnaldo Lopes [UNIFESP] |
| Publisher | Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP) |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | 98 f. |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UNIFESP, instname:Universidade Federal de São Paulo, instacron:UNIFESP |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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