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Caracterização microbiológica de isolados clínicos de Trichosporon spp / Microbiological characterization of clinical isolates of Trichosporon spp

Chagas-Neto, Thomas Cardoso [UNIFESP] January 2007 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2015-12-06T23:46:56Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Introdução: Trichosporon tem sido descrito como patogeno oportunista emergente relacionado as infeccoes disseminadas em pacientes imunocomprometidos, sobretudo em individuos apresentando neutropenia intensa. E bastante evidente que ha poucas informacoes disponiveis sobre as caracteristicas das infeccoes por este patogeno principalmente nos hospitais brasileiros, sendo necessaria a realizacao de estudos que permitam a caracterizacao do seu perfil epidemiologico. Objetivos: 1) Identificar por metodos fenotipicos e genotipicos as especies de Trichosporon isoladas de hemoculturas obtidas de pacientes hospitalizados; 2) Adaptar a metodologia do CLSI para a avaliacao da sensibilidade a antifungicos de isolados de Trichosporon spp.; 3) Avaliar Etest® para predizer a sensibilidade a anfotericina B; 4) Avaliar o perfil de sensibilidade de diferentes especies do genero Trichosporon, em relacao a seis antifungicos. Material e Metodos: Foram utilizadas 23 cepas de Trichosporon spp. isoladas de hemoculturas provenientes de dois hospitais terciarios da cidade de São Paulo e coletadas entre os anos de 1995 e 2004. As leveduras foram identificadas em nivel de especie atraves de caracteristicas morfologicas e bioquimicas, sendo esta identificacao confirmada por estudos moleculares. Para tanto, foi amplificada a regiao 18S do rDNA para a confirmacao da identificacao do genero e realizado o sequenciamento da regiao IGS 1 para confirmacao da identificacao de especie. A avaliacao da sensibilidade aos antifungicos foi realizada por dois diferentes metodos: microdiluicao em caldo e difusao em agar por Etest®. Resultados: A identificacao fenotipica foi comparada com a genotipica demonstrando algumas incongruencias quanto as duas metodologias. Tres isolados foram erroneamente identificados como: T asteroides (identificacao molecular: T asahii varo asahil); T inkin (identificacao molecular: Tasahii var. asahii) e T asahii (identificacao molecular: T asteroides), enquanto que quatro isolados nao foram identificados em nivel de especie pelo metodo fenotipico. Houve 61 por cento de concordancia entre as duas metodologias, sendo T asahii a especie mais frequentemente identificada na presente serie. Anfotericina B foi o unico antifungico testado pelas duas metodologias. As CIMs da microdiluicao em caldo apresentaram-se distribuidas em menor espectro de diluicoes, enquanto que no Etest@ as CIMs apresentaram-se num largo espectro. Os isolados de T asahii apresentaram CIMs mais elevadas e menores indices de sensibilidade a anfotericina B, por ambos os metodos, quando comparados com isolados de T nao-asahii. Houve elevada sensibilidade aos azolicos. Em contrapartida, 5-fluorocitosina e caspofungina nao apresentaram atividade in vitro contra estes isolados. Conclusao: O sequenciamento da regiao IGS1 foi suficiente para a identificacao de todos os isolados clinicos incluindo especies geneticamente relacionadas. Mesmo utilizando numero limitado de cepas, observamos que os triazolicos apresentaram melhor padrao de atividade antifungica contra os isolados de Trichosporon spp / Introduction: The genus Trichosporon has been described as an emergent opportunistic pathogen related to disseminated infections in immunocompromised patients, specifically those individuals with intense neutropenia. It is highly evident that there is not enough information available about the characteristics of the infection caused by this pathogen, mainly in Brazilian hospitals. Therefore, it is important to investigate trichosporonosis epidemiology. Objectives: 1) To identify strains isolated from blood cultures using phenotypic and genotypic methods. 2) To adapt CLSI methodology for the evaluation of Trichosporon spp. sensitivity to antifungal drugs. 3) To evaluate Etest® for predicting sensitivity to Amphotericin B. To evaluate the sensitivity profile of different Trichosporon species to 6 antifungal drugs. Material and methods: We analyzed 23 strains of Trichosporon spp. recovered from blood cultures of two tertiary hospitals in São Paulo and collected between 1995 and 2004. The yeasts were identified to species level based on their morphological and biochemical characteristics and subsequently by molecular biology. For those purposes, we amplified the18S rDNA region to confirm genus identification and sequenced the IGS1 region of rDNA to confirm species phenotypic identification. We used two different methods to investigate sensitivity to antifungal drugs: broth microdilution and agar-diffusion disk test using Etest®. Results: We observed some incongruences between the phenotypic and genotypic methods used for identification. Three isolates were misidentified as T. asteroids (molecular identification: T. asahii var. asahii). T. inkin (molecular identification: T. asteroids), while four isolates could not be identified to species level using phenotypic methods. The two different methods agreed on 61% of the cases. T. asahii was the most commonly isolated species in the present study. Amphotericin B was the only antifungal drug tested with both methodologies. Broth microdilution MICs were less variable within different dilutions, while Etest® MICS showed broader variation. T. asahii isolates had higher MICs values and were less susceptible to Amphotericin B for both methods than Non-Asahii Trichosporon. The isolates were highly sensitive to azoles. Nevertheless, 5-fluorocitosin and caspofungin had no in vitro activity against the clinical isolates analyzed. Conclusion: The IGS1 region sequencing was enough to identify all the clinical isolates, including closely related species. Although the number of strains tested was small, we observed that triazoles had better antifungal activity against Trichosporon spp. isolates. / BV UNIFESP: Teses e dissertações
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Avaliação comparativa da acurácia de diferentes testes fenotípicos para a detecção de amostras produtoras de metalo-beta-lactamsaes / Comparative evaluation of the accuracy of different phenotypic testes to detect metallo-beta-lactamase-producing strains

Picão, Renata Cristina [UNIFESP] January 2007 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2015-12-06T23:46:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Objetivo: Avaliar a acuracia de diferentes testes fenotipicos para a deteccao da producao de MBL entre amostras produtoras de IMP, VIM, SPM, GIM, ou SIM, incluindo Pseudomonas, Acinetobacter spp. e enterobacterias. Metodos: Foram testadas 46 bacterias nao relacionadas geneticamente e produtoras de diferentes tipos de MBL. Dezenove amostras nao produtoras de MBL foram incluidas como controles negativos. Foi avaliada a capacidade do inibidor de MBL (IMBL) em inibir o crescimento bacteriano e em realizar a hidrolise do substrato. Os isolados foram submetidos aos testes de disco aproximacao e disco combinado para adeteccao da producao de MBL, utilizando imipenem e ceftazidima em combinacao com diferentes IMBLs. Resultados: Foi obtido 100 por cento de sensibilidade e especificidade para a deteccao da producao de MBL por disco aproximacao utilizando acido mercaptopropionico como IMBL, em combinacao com ceftazidima e imipenem, para P. aeruginosa e Acinetobacter spp., respectivamente. A tecnica de disco combinado utilizando imipenem e EDT A apresentou os mesmos resultados para detectar enterobacterias produtoras de MBL, considerando-se como ponto de corte o aumento de pelo menos 5,0 mm na zona de inibicao do crescimento bacteriano. Conclusoes: Nossos resultados indicam que ambos os metodos fenotipicos para a deteccao de MBL, disco aproximacao e disco combinado, devem ser escolhidos apos a identificacao da bacteria-teste. Adicionalmente, devem ser considerados a prevalencia local de bacterias que apresentem este determinante de resistencia, assim como a habilidade de tecnicos especializados em interpretar corretamente a inibicao de MBL / The emergence of metallo-β-lactamase (MBL)-producing isolates is a challenge to routine microbiology laboratories, since there are no standardized methods for detecting such isolates. The aim of this study was to evaluate the accuracy of different phenotypic methods to detect MBL production among Pseudomonas, Acinetobacter spp and enterobacterial isolates, including GIM-, IMP-, SIM-, SPM-, and VIM- variants. A total of 46 genetically unrelated P. aeruginosa, P. putida, Acinetobacter spp. and enterobacterial strains producing distinct MBLs were tested. Nineteen strains were included as negative controls. The inhibition of bacterial growth and β-lactam hydrolysis caused by MBL-inhibitors (IMBL) were also evaluated. The isolates were tested for MBL production by both double disk synergy test (DDST) and combined disk (CD) using imipenem and ceftazidime as substrates in combination with distinct IMBL. One hundred percent sensitivity and specificity was achieved by DDST using 2-mercaptopropionic acid in combination with ceftazidime and imipenem for detection of MBL production among P. aeruginosa and Acinetobacter spp. isolates, respectively. CD showed the same results for detecting MBL-producing enterobacteria by combining imipenem and EDTA with a 5.0 mm breakpoint increase in the inhibition zone. Our results indicate that both phenotypic methods to detect MBL-producing isolates should be based on the genera to be tested regardless of the enzyme produced by such isolates as well as the local prevalence of MBL producers and on the ability of specialized technicians to correctly interpret MBL inhibition. / FAPESP: 2006/07197-0 / BV UNIFESP: Teses e dissertações
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Diversidade e variação na abundância de recursos e biologia de imaturos de Eumaeini (Lycaenidae, Tcheclinae) em plantas do cerrado

Silva, Neuza Aparecida Pereira da 30 September 2016 (has links)
Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Ecologia, 2016. / Submitted by Camila Duarte (camiladias@bce.unb.br) on 2017-01-20T20:40:15Z No. of bitstreams: 1 2016_NeuzaAparecidaPereiradaSilva.pdf: 6004071 bytes, checksum: 4c7f347ab3012bfb345e6f33384f7447 (MD5) / Approved for entry into archive by Ruthléa Nascimento(ruthleanascimento@bce.unb.br) on 2017-03-13T15:59:49Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_NeuzaAparecidaPereiradaSilva.pdf: 6004071 bytes, checksum: 4c7f347ab3012bfb345e6f33384f7447 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-13T15:59:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_NeuzaAparecidaPereiradaSilva.pdf: 6004071 bytes, checksum: 4c7f347ab3012bfb345e6f33384f7447 (MD5) / Eumaeini (Lepidoptera, Lycaenidae) é uma tribo rica em espécies de borboletas na região Neotropical. A coloração críptica e interações simbióticas com formigas são atributos ecológicos de defesa das lagartas desses lepidópteros. Contudo, sabe-se pouco da história de vida e da relação entre recursos, abundância e interações desses licenídeos. Os objetivos desse estudo foram avaliar os efeitos da diversidade e abundância dos recursos (inflorescências) e a presença de formigas sobre a abundância de imaturos de Eumaeini; fornecer informações sobre a história natural e características morfológicas de Paiwarria venulius (Cramer) e Paiwarria aphaca (Hewitson) comparando-as com lagartas aposemáticas de Parides Hübner (Papilionidae), sugeridas como possíveis modelos miméticos, e apresentar a biologia e morfologia dos imaturos de Strymon crambusa (Hewitson), uma espécie rara em levantamentos. As amostragens ocorreram em mata de galeria, cerrado sensu stricto e campo sujo. Os resultados indicaram que a abundância de inflorescências afetou positivamente a abundância dos licenídeos, mas a composição de espécies não foi afetada pela composição florística. A presença de formigas no total das plantas também exibiu efeito sobre a abundância dos imaturos. Lagartas das duas espécies de Paiwarria apresentam escolos e coloração conspícua sobre folhas das plantas hospedeiras. P. venulius possui órgão nectário dorsal enquanto P. aphaca não, além disso, o padrão de coloração da primeira exibe maior convergência fenotípica com o encontrado nas lagartas de Parides spp.. P. venulius é registrada também em áreas de mata, enquanto P. aphaca ocorre em áreas de cerrado. As diferenças morfológicas entre elas podem estar relacionadas aos caracteres adaptativos na transição do ambiente de mata para o savânico ou vice versa. Lagartas de S. crambusa são crípticas e são localmente especializadas em Oxalidaceae. Esta tese fornece informações inéditas sobre padrões e processos ecológicos e evolutivos que podem estar atuando em diferentes escalas nas comunidades de Lycaenidae no Cerrado. / In the Neotropics Eumaeini (Lycaenidae) is a very species rich tribe. Their caterpillar cryptic coloration and symbiotic interactions with ants (myrmecophily) are ecological attributes recognized as defense strategies. Little is known about the life history and the relation between resources, abundance and interactions of these lepidopterans. The objectives of this study were to evaluate the effects of diversity and abundance of inflorescences and the presence of ants on the plants on the abundance of immature stages of Eumaeini, furnish informations on the natural history and morphological characteristics of Paiwarria venulius (Cramer) and Paiwarria aphaca (Hewitson), making comparisons with aposematic caterpillars of Parides Hübner (Papilionidae), suggested as possible mimetic models, also presents the biology and morphology of immatures Strymon crambusa (Hewitson), a species that is infrequently registered. Sampling was conducted in gallery forest, cerrado sensu stricto and campo sujo. The results indicated that the abundance of inflorescences positively affected the abundance of Eumaeini immatures, but the species composition were not affect by floristic composition. The presence of ants on the plants also had an effect on the immatures abundance. Caterpillar of both species of Paiwarria have scoli and a conspicuous coloration on the leaves of their food plants. P. venulius presents the dorsal nectary organ while P. aphaca does not, and the first has a higher phenotypic convergence with caterpillars of Parides spp.. P. aphaca occurs in savanna areas, while P. venulius is also in forest areas. Morphological differences between the two species of Paiwarria may be relate to adaptive characteristics in the transition from the gallery forest to the cerrado or vice versa. S. crambusa have cryptic caterpillars and are locally specialized in Oxalidaceae. This thesis provides new information on patterns and ecological and evolutionary processes that may be acting in different scales in communities of Lycaenidae in the Cerrado.
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Caracterização fenotípica de pacientes com amelogênese imperfeita autossômica recessiva e quadros sindrômicos

Alves, Priscila Gomes 14 September 2012 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2012. / Submitted by Jaqueline Ferreira de Souza (jaquefs.braz@gmail.com) on 2013-01-09T14:01:52Z No. of bitstreams: 1 2012_PriscilaGomesAlves.pdf: 2754109 bytes, checksum: 0bade87fe4b724e8b185d716ad5599cb (MD5) / Approved for entry into archive by Marília Freitas(marilia@bce.unb.br) on 2013-01-10T13:37:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_PriscilaGomesAlves.pdf: 2754109 bytes, checksum: 0bade87fe4b724e8b185d716ad5599cb (MD5) / Made available in DSpace on 2013-01-10T13:37:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_PriscilaGomesAlves.pdf: 2754109 bytes, checksum: 0bade87fe4b724e8b185d716ad5599cb (MD5) / Amelogênese imperfeita (AI) é um grupo de alterações genéticas que afeta a formação e mineralização do esmalte dental. O termo amelogênese imperfeita é usado para definir a forma isolada, sem envolvimento sistêmico. No entanto, mais recentemente, esse termo também tem sido utilizado para indicar a presença de defeitos de esmalte generalizados em várias síndromes. O propósito do presente estudo foi realizar a caracterização fenotípica de pacientes com AI autossômica recessiva e possíveis quadros sindrômicos em pacientes atendidos na Clínica de Atendimento de Pacientes Portadores de Anomalias Dentárias do Hospital Universitário de Brasília. Todos os pacientes foram submetidos a exames clínicos, complementares e à análise histológica dos tecidos afetados. As manifestações bucais observadas nesses pacientes, associadas a AI, incluíram alterações na dentina, mordida aberta anterior, hiperplasia gengival e lesões periapicais. Histologicamente verificou-se a presença de esmalte hipoplásico com alteração em sua estrutura prismática, dentina interglobular com vários graus de comprometimento, calcificações associada a ilhas epiteliais tanto na gengiva quanto no folículo pericoronário. Dentre as alterações de outros órgãos e sistemas observados nesses pacientes, os exames médicos detectaram distúrbios na mineralização óssea, desordens neurológicas, auditivas e renais. As manifestações bucais associadas às alterações de outros órgãos e sistemas descritas nessas famílias estudadas nunca foram relatadas na literatura. Assim, a partir da caracterização fenotípica dessas duas famílias sugerem-se estudos moleculares para melhor entender as bases moleculares da AI sindrômica nessas famílias. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Amelogenesis imperfecta (AI) is a group of hereditary disorders that primarily affects the formation and mineralization of dental enamel. The term amelogenesis imperfecta usually defines an isolated trait without any systemic involvement. However, more recently, it has been also used to indicate the presence of generalized enamel defects in several syndromes or systemic conditions. The aim of this study was the to characterize the oro-dental features of two familes with an autossomal recessive form of AI treated in the Oral Care Center for Inherited Diseases, University Hospital of Brasilia. All individuals underwent clinical and complementary examination, and histological analysis of the affected tissues. Besides AI, other oral manifestations were observed in these patients including alterations in dentin, anterior open bite, gingival hyperplasia and periapical lesions. Histological analyses revealed the presence of enamel hypoplasia with structural changes in its prismatic organization, interglobular dentin with varying degrees of commitment, calcifications associated with epithelial islands in both the gum and in the dental follicle. Among the others organ systems alterations observed in these patients, medical examinations detected bone mineralization disorders, neurological, hearing and nephrological disorders. Oral manifestations associated with changes in other organs and systems described in these families have never been reported in the literature. Further molecular genetics analyses will be necessary in order to better understand the molecular basis of the syndromic AI in these families.
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Estudo da fenotipagem de quatro enzimas metabolizadoras de fármacos em uma amostra da população do estado do Ceará / A population phenotyping study of four drug-metabolizing enzymes in Ceará – Brazil

Santana, Gilmara Silva de Melo January 2004 (has links)
SANTANA, Gilmara Silva de Melo. Estudo da fenotipagem de quatro enzimas metabolizadoras de fármacos em uma amostra da população do estado do Ceará. 2004. 190 f. Tese (Doutorado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2004. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-06-08T16:37:20Z No. of bitstreams: 1 2004_tese_gsmsantana.pdf: 1006592 bytes, checksum: 892052806d1f1ef13bdfef44e2f0be5f (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-06-11T15:31:53Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2004_tese_gsmsantana.pdf: 1006592 bytes, checksum: 892052806d1f1ef13bdfef44e2f0be5f (MD5) / Made available in DSpace on 2012-06-11T15:31:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2004_tese_gsmsantana.pdf: 1006592 bytes, checksum: 892052806d1f1ef13bdfef44e2f0be5f (MD5) Previous issue date: 2004 / Characterization of acetylator and oxidative metabolizers phenotypes is of clinical relevance, as it has been shown that the pharmacological response of several therapeutic agents. The studies of phenotypage and genotipage have as purpose to detect and to mensurar polimorfismos in these enzymes. In this study, we assessed in vivo activities of CYP1A2, CYP2A6, Xantine Oxidase (XO) and NAT2 in sample of 82 volunteers (40 men and 42 women) from Ceará – Brazil using caffeine as probe. The volunteers were free from significant cardiac, hepatic, renal, pulmonary, gastrointestinal and hematological disease, as assessed by physical investigation, ECG and hematological and biochemical tests. The study was open, the volunteers were hospitalized, having already had a normal evening meal, and after an overnight fast they received a single 200 mg dose of caffeine tablet. Blood samples were collected in regular interview ( 0; 5min; 15min; 25min; 35min; 45min; 1h; 1,25h; 1,5h; 2h; 4h; 6h; 8h; 12h and 24 hour) after the administration of caffeine. Urine was harvested in its total volume during the 10 hours after the administration of caffeine, the total urinário volume was quantified and an aliquot one was stored for determination of the metabólitos. The caffeine was determined in human plasma and the metabolites were determined in human urinary by HPLC using teobromina as an internal standard. The metabolites assessed were: 1U – 1-methyluric acid; 17U – 1, 7-dimethyluric acid; 1X – 1-methylxantine; 17X – 1, 7-1-dimethylxantine e AFMU – 5-acetylamino-6-formylamino-3methyluracil. The following molar ratios were calculated as an index for CYP1A2 activity [(AFMU + 1X + 1U)/ 17U]; CYP2A6 activity [17U / (AFMU + 1X + 1U + 17X + 17U)]; NAT2 activity [AFMU/ (AFMU + 1X + 1U)] and Xanthine Oxidase activity [1U/ (1X + 1U)]. The enzymatic activities were plotted in histogram. The frequency distributions of the CYP1A2, CYP2A6, XO and NAT2 were not normally distributed, showing three phenotypes. Afterwards the volunteers were classified by enzymatic activities in ten groups, and the lowest and highest metabolizers groups were chosen to determine the following pharmacokinetic parameters: AUC0-24, t1/2, ke, CL and Vd/Kg. The comparison of these parameters (test “t” de Student) between these two groups it showed significant differences (p<0.05). Our findings may suggest that the heterogeneous population assessed (health volunteers from Ceará - Brazil) has shown polymorphism in the enzymatic activities of the CYP1A2, NAT2, XO and CYP2A6. / caracterização do fenótipo acetilador e oxidativo das atividades das enzimas metabolizadoras é de fundamental relevância para avaliação da resposta farmacológica aos vários agentes terapêuticos. Os estudos de fenotipagem e genotipagem têm como finalidade detectar e mensurar polimorfismos nestas enzimas. O estudo teve como objetivo determinar o perfil fenotípico da atividade metabolizadora das enzimas CYP1A2, CYP2A6, XO e NAT2 em uma amostra de oitenta voluntários saudáveis da população do estado do Ceará, utilizando a cafeína como fármaco “probe”. Os voluntários foram avaliados através de consulta médica para confirmação do estado de higidez; as funções metabólicas, hepática e renal foram avaliadas através de exames laboratoriais hematológicos e bioquímicos. O protocolo clínico consistiu de um internamento onde os voluntários receberam um comprimido de 200mg de cafeína e coletas de sangue e urina. As amostras de sangue seguiram os seguintes intervalos a partir da administração: 0; 0:05; 0:15; 0:25; 0:35; 0:45; 1:00; 1:15; 1:30; 2; 4; 6; 8; 12 e 24 horas. A urina foi colhida em seu volume total durante as 10 horas após a administração, o volume urinário total foi quantificado e uma alíquota foi armazenada para determinação dos metabólitos. O protocolo analítico consistiu de dosagem por HPLC das concentrações plasmáticas de cafeína e das concentrações urinárias dos cinco principais metabólitos da cafeína: 1U – ácido 1-metilúrico; 17U – ácido 1,7-dimetilúrico; 1X – metilxantina; 17X – 1,7-dimetilxantina e AFMU – 5-acetilamino-6-formilamino-3-metiluracil. A partir das concentrações molares urinárias dos metabólitos foram determinadas as atividades das enzimas: CYP1A2 = (AFMU + 1X + 1U)/ 17U; CYP2A6 = 17U / (AFMU + 1X + 1U + 17X + 17U); NAT2 = AFMU/ (AFMU + 1X + 1U) e XO = 1U/ (1X + 1U). Os valores das atividades enzimáticas foram submetidos a análise por estatística descritiva (histograma) não apresentando distribuição normal. Foram identificados pelo menos três fenótipos metabolizadores para as enzimas CYP1A2, NAT2 e XO. Com base na atividade de cada enzima os voluntários foram divididos em dez grupos organizados categoricamente. Os voluntários dos grupos de maior e menor atividade enzimática foram escolhidos para determinação dos parâmetros farmacocinéticos (ASC; t1/2; ke; Vd/Kg; CL). A comparação destes parâmetros (teste “t” de Student) entre os dois grupos apresentou diferenças significantes (p<0,05). Nossos resultados sugerem a existência de polimorfismo nas enzimas estudadas de acordo com a heterogeneidade das atividades enzimáticas na amostra da população de voluntários saudáveis do estado do Ceará.
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Efeito do farnesol sobre o fenótipo de resistência e a produção de fosfolipase e protease em cepas de Candida spp / Effect of farnesol on the resistance phenotype and phospholipase and protease production in strains of Candida spp

Teixeira, Carlos Eduardo Cordeiro January 2011 (has links)
TEIXEIRA, Carlos Eduardo Cordeiro. Efeito do farnesol sobre o fenótipo de resistência e a produção de fosfolipase e protease em cepas de Candida spp. 2011. 96 f. Dissertação (Mestrado em Microbiologia Médica)- Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2011. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-04-29T14:09:21Z No. of bitstreams: 1 2011_dis_cecteixeira.pdf: 2805174 bytes, checksum: b92b5c60e19665176be16931f7c6664f (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes(erikaleitefernandes@gmail.com) on 2013-04-29T16:30:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_dis_cecteixeira.pdf: 2805174 bytes, checksum: b92b5c60e19665176be16931f7c6664f (MD5) / Made available in DSpace on 2013-04-29T16:30:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_dis_cecteixeira.pdf: 2805174 bytes, checksum: b92b5c60e19665176be16931f7c6664f (MD5) Previous issue date: 2011 / There are several reports of in vitro resistance to antifungal drugs, especially azole derivatives, in strains of Candida spp. For this reason, the pursuit for new compounds that present antifungal properties is necessary. Thus, this study aimed at evaluating the antifungal activity of farnesol and its interaction with classical antifungal drugs against Candida spp., as well as evaluating its effect on the production of phospholipase and protease, which are important virulence factors for Candida species. Fourty-five strains of Candida spp. (23 C. albicans, 16 C. parapsilosis and 6 C. tropicalis) were tested through broth microdilution as described by the Clinical Laboratory Standards Institute (CLSI), document M27A2, and the minimum inhibitory concentrations (MICs) for amphotericin B (AMB), fluconazole (FLC), itraconazole (ITC), caspofungin (CAS) and farnesol (FAR) were individually determined. In addition, the effect of FAR on phospholipase activity was assessed by growing the strains on 2% Sabouraud agar, supplemented with egg yolk, and protease activity was determined through spectrophotometry. Then, 13 strains were randomly chosen, pre-incubated at three sub-inhibitory concentrations of FAR for 24 hours and re-submitted to microdilution assay. For the 45 evaluated Candida spp. strains the MIC values for FAR varied from 9.37 to 150 µM. For the classical antifungal drugs, MICs ranged from 0.0625 to 4 µg/mL for AMB, with 19 resistant strains (MIC>1 µg/mL); from 0.0125 to >64 for FLC, with 18 resistant strains (MIC> 64 µg/mL); from 0.03125 to >16 µg/mL for ITC, with 35 resistant strains (MIC ≥1 µg/mL), and from 0.0625 to 2 µg/mL for CAS, with six resistant strains (MIC≥2 µg/mL). All resistant strains were tested against the combination of FAR with the drug to which they presented resistance. The combination of AMB and FAR was synergistic against 94.7% (18/19) of the Candida spp. isolates, as shown through the obtention of FICI≤0.5. FAR and FLC interacted synergistically against all tested strains (n=18), exhibiting FICI values of ≤0.5. The combination of FAR and ITC presented synergistic interactions (FICI≤0.5) against 94.4% of the tested isolates (33/35). Finally, FAR and CAS showed to interact synergistically (FICI≤0.5) against all tested strains. Concerning virulence factors, it was observed that 17/45 isolates produced phospholipase, with a mean Pz of 0.71. After incubating these strains at three different concentrations of FAR the mean Pz values of 0.71, 0.61 and 0.54 were obtained, after incubation at the lowest, the intermediate and the highest concentrations of FAR, respectively. In addition, it was observed that the 14 randomly chosen strains that were screened for protease activity produced low concentrations of these enzymes, varying from 0.002 to 0.02 U/mL and that FAR presented no effect on enzymatic production. Finally, it was observed that pre-incubating strains at the highest sub-inhibitory concentration of FAR reduced the MIC range of the tested antifungal drugs. These results especially show the effects of FAR on the susceptibility of Candida species to classical antifungal drugs, providing perspectives for the development of researches on the mechanisms of this compound on fungal cell metabolism / Diversos são os relatos de resistência in vitro de cepas de Candida spp. a fármacos antifúngicos, em especial a derivados azólicos. Deste modo, a prospecção de novos compostos com propriedade antifúngica se faz necessária. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar a atividade antifúngica do sesquiterpeno farnesol, sua ação sinérgica com antifúngicos fluconazol (FLC), itraconazol (ITC), voriconazol (VRZ), anfotericina B (AMB) e caspofungina (CASP), bem como avaliar sua ação sob a atividade enzimática de fosfolipases e proteases, consideradas importantes fatores de virulência em Candida spp. Para tanto, foram avaliadas cepas de C. albicans (n=23), C. parapsilosis (n=16) e C. tropicalis (n=6). A concentração inibitória mínima (CIM) foi determinada por meio da técnica de microdiluição, preconizada pelo Clinical Laboratory Standards Institute (CLSI). Em adição, foi investigado o efeito do farnesol sobre a atividade de fosfolipase utilizando ágar Sabouraud suplementado com gema de ovo e a atividade de protease por técnica espetrofotomética. Paralelamente 14 cepas escolhidas aleatoriamente, foram pré-incubadas em três concentrações sub-CIM de farnesol, afim de avaliar se o farnesol era capaz de causar algum dano na sensibilidade da cepa. Para as 45 cepas avaliadas, os valores de CIM para farnesol variaram de 9,37 a 150 µM para Candida spp. Para os derivados azólicos, o intervalo dos valores de CIM para fluconazol foi de 0,03125 a > 64 µg/ml, observando-se a presença de 18 cepas resistentes (CIM > 64 µg/mL). Em relação ao itraconazol, os valores de CIM variaram de 0,03125 a >16 µg/mL e 35 cepas apresentaram resistência a esse antifúngico (CIM ≥1 µg/mL). Constatou-se que das 45 cepas em estudo, 19 apresentaram resistência a anfotericina B, com CIM > 1 µg/mL. Quanto a caspofungina, os valores de CIM variaram de 0,0625 a 2 µg/mL, com apenas seis cepas exibido resistência, com CIM de 2 µg/mL. A combinação anfotericina B e farnesol apresentou sinergismo em 94,7% (18/19) das cepas de Candida spp. resistentes, evidenciado pelos valores de FICI ≤ 0,5. Na associação fluconazol e farnesol, observou-se uma interação sinérgica frente a todas as cepas de Candida spp. avaliadas, apresentando FICI ≤ 0,5. Trinta e seis cepas (18 C. albicans, 12 C. parapsilosis e 6 C. tropicalis) foram testadas frente à associação de itraconazol e farnesol, observando a ocorrência de sinergismo (FICI ≤ 0,5) em 94,4% dos isolados. Quanto à caspofungina todas as cepas testadas (C. parapsilosis, n=4; C. albicans, n=2) tiveram FICI ≤ 0,5, caracterizando associação sinérgica com o farnesol. Após constatação de que 17 das 45 cepas expressavam a enzima fosfolipase, as mesmas foram incubadas em concentrações sub-CIM de farnesol, por 24 horas, quando observou–se uma medida de Pz média de 0,73 para as cepas testadas sem contato com farnesol e valores de 0,71, 0,61, e 0,54 para aquelas incubadas em doses sub-inibitória de farnesol. Em relação à produção de protease, observou-se que todas as 14 cepas produziam a enzima, em baixas concentrações, variando de 0,002 a 0,02 U/mL, e que a pré-incubação com farnesol não interferiu na produção enzimática. No tocante a pré-incubação das cepas com farnesol constatou-se que o mesmo interferi direta e indiretamente no fenômeno de resistência das cepas. Estes resultados demonstram, em especial, o efeito do composto farnesol sobre a sensibilidade antifúngica de Candida spp., abrindo a perspectiva de novos estudos com o intuito de determinar os mecanismos de ação desses compostos no metabolismo celular dos fungos.
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Toxoplasmose experimental no modelo murino com fenótipo extremo para tolerância oral: caracterização celular e humoral

Dias, Raul Ramos Furtado January 2014 (has links)
Made available in DSpace on 2015-11-11T12:13:54Z (GMT). No. of bitstreams: 2 raul_dias_ioc_dout_2014.pdf: 7886227 bytes, checksum: accba0e5a6fdc7af44ece1654e72921c (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015-04-14 / O tecido linfóide das mucosas apresenta estruturas especializadas contendo células imunorreguladoras e mecanismos capazes de determinar indução de tolerância ou resposta inflamatória após a administração oral de um antígeno. Diversos agentes causadores de doenças utilizam a via oral como rota de infecção, dentre eles o Toxoplasma gondii. A infecção por T. gondii pode gerar diversas manifestações patológicas, como por exemplo, a doença inflamatória intestinal, que envolve diferentes tipos celulares, diversas citocinas, bem como a participação da microbiota intestinal. Para melhor compreender o envolvimento dos diversos tipos celulares e elementos humorais na toxoplasmose, elegemos como modelos experimentais as linhagens de camundongos geneticamente selecionados para tolerância oral: TR (resistentes à tolerância) e TS (susceptíveis à tolerância). Os camundongos TS se caracterizam por baixa resposta inflamatória e maior quantidade de células T regulatórias produtoras de IL-10. Em contraste, os camundongos TR produzem fortes reações inflamatórias. A caracterização da toxoplasmose experimental nos camundongos TR e TS infectados por gavagem com T. gondii foi feita por análise histológica e imunohistoquímica de cortes do intestino, fígado e baço, dosagem de citocinas e quimiocinas, além da caracterização da microbiota intestinal Nossos resultados confirmam o estabelecimento de uma resposta inflamatória intestinal aguda nos camundongos TR, que ocorre durante os 14 dias iniciais da infecção. As lesões apresentam macrófagos e, em menor número, células dendríticas. Além disso, o perfil de citocinas corrobora essas observações, com alta produção de citocinas pró-inflamatórias, tanto sistêmica quanto localizada. Os camundongos TS, por outro lado, apresentaram um perfil característico voltado para a regulação, inibindo a infecção intestinal e produção de citocinas inflamatórias, ao mesmo tempo em que favorece um aumento da quantidade de parasitos nos órgãos. O perfil da microbiota intestinal não apresentou diferenças qualitativas entre as linhagens TS e TR, porém os camundongos TS possuem maior presença de bactérias do gênero Prevotella, enquanto nos camundongos TR predomina a família Enterobacteriaceae. Esses enterotipos observados não exibiram mudanças significativas ao longo do período de infecção de 21 dias dentro das mesmas linhagens / The mucosal lymphoid tissue has specialized structures containing immunoregulatory cells and mechanisms to determine the induction of tolerance or inflammatory response following oral administration of an antigen. Several agents causative of diseases uses the oral route as a form of infection, including Toxoplasma gondii . T. gondii infection can lead to various pathological manifestations , such as inflammatory bowel disease, involving various cell types, several cytokines, as well as the involvement of the intestinal microbiota. To better understand the involvement of different cell types and humoral elements in the toxoplasmosis , we choose as experimental models two lineages of mice genetically selected for oral tolerance: TR (tolerance resistant) and TS (tolerance susceptible) . TS mice are characterized by low inflammatory response and increased amount of regulatory T cells producing IL - 10 . In contrast, the TR mice produce strong inflammatory reactions. Characterization of experimental toxoplasmosis in TR and TS mice infected by gavage with T. gondii was made by histological and immunohistochemical analysis of sections of the intestine, liv er and spleen , dosage of cytokines and chemokines, in addition to characterization of intestinal microbiota. Our results confirm the setting of an acute inflamm atory response in the intestines of TR mice , which occurs during the initial 14 days from infect ion. Lesions presented macrophages and to a lesser number, dendritic cells. Moreover, the cytokine profile supports these observations, with a high production of pro - inflammatory cytokines, either systemic or localized. TS mice, on the other hand, showed a characteristic profile directed to regulati on , inhibiting intestinal infection and production of inflammatory cytokines at the same time it promotes an increase in the number of parasites in the organs . The intestinal microbiota profile did not differ qua litatively between the TS and TR lineages , but TS mice have greater presence of bacteria of genus Prevotella , while in TR mice pre dominates the Enterobacteriaceae family . The se enterotip e s showed no significant changes during the 21 day period within the same lineages
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Caracterização clínica, hematológica e molecular dos adultos com β talassemia no Ceará / Characterization clinical, hematological and molecular of adults with β thalassemia in Ceará

Martins, Michelle Freitas January 2010 (has links)
MARTINS, Michelle Freitas. Caracterização clínica, hematológica e molecular dos adultos com β talassemia no Ceará. 2010. 84 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2010. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2011-12-22T15:45:29Z No. of bitstreams: 1 2010_dis_mfmartins.pdf: 2051486 bytes, checksum: 4814e2ffcebed41f58aba297f0cf6f41 (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-02-01T14:22:43Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_dis_mfmartins.pdf: 2051486 bytes, checksum: 4814e2ffcebed41f58aba297f0cf6f41 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-02-01T14:22:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_dis_mfmartins.pdf: 2051486 bytes, checksum: 4814e2ffcebed41f58aba297f0cf6f41 (MD5) Previous issue date: 2010 / Background: Beta thalassemia is a group of disorders, each resulting from a genetic defect in the rate of synthesis of one or more globin chains of hemoglobin (Hb). The imbalance in the production of globin chains can result in ineffective erythropoiesis, insufficient production of hemoglobin, hemolysis and anemia of varying degree. Beta thalassemia is more common in countries bordering the Mediterranean Sea, reflecting the participation of these peoples in the formation of the Brazilian population. The predominant mutations in Brazil are the IVS-I-1, IVS-I-6, IVS-I-110 and CD 39, which are associated with different clinical conditions and are mostly regionally specific. Objective: To characterize the clinical, hematological and molecular adults with beta thalassemia of the University Hospital Cantídeo Walter and followed at a referral center for Hematology of the state of Ceará (Hemoce). Methods: We analyzed 22 individuals with beta thalassemia, 7 intermediate and 15 minor, in both sexes, from February 2008 to September 2009. Clinical data and laboratory tests: blood count, levels of Hb A2 and Hb F, serum iron, total capacity and latent iron binding (CTLFe, CLLFe), ferritin and transferrin saturation index (IST) were obtained from medical records, diagnosis. About 5 mL of venous blood was collected in tubes containing EDTA anticoagulant for molecular study. The analysis of mutations was performed using the technique of chain reaction mediated by allele specific polymerase (PCR-AE), where we analyzed the following mutations: IVS-I-1, IVS-I-6, IVS-I-110 and CD 39. Statistical analysis was carried out in software R (version 2.7.0) and the level of significance was 5%. Results: Of 22 patients studied, 15 were patients with β thalassemia minor and seven intermediate. The age ranged 18-68 years with a mean of 44.7 years. 18.2% male and 81.8% female. The mutations were characterized in 68.2% of cases, which had the most frequent IVS-I-6, followed by the codon 39. The mutation IVS-I-1 was found in one patient and IVS-I-110 was not found. There was no significant clinical differences between the hematological and biochemical parameters. There was a discrepancy between phenotype and genotype in some patients, but no significant difference between mutations and clinical manifestations. Conclusions: The results of this study reinforce the dominance of the mutation IVS-I-6 in northeastern Brazil. Are recommended further studies to investigate the co-inheritance with α-thalassemia in these patients to justify the discrepancy between genotypes and phenotypes. / Introdução: A beta talassemia é um grupo de distúrbios, cada um resultando de um defeito genético, na velocidade de síntese de uma ou mais cadeias globínicas da hemoglobina (Hb). A desproporção na produção das cadeias globínicas pode resultar em eritropoese ineficaz, produção insuficiente de Hb, hemólise e anemia de grau variado. A beta talassemia é mais frequente nos países banhados pelo mar Mediterrâneo, refletindo a participação desses povos na formação da população brasileira. As mutações predominantes no Brasil são a IVS-I-1, IVS-I-6, IVS-I-110 e o CD 39, as quais estão associadas a diversos quadros clínicos e são, em sua maioria, regionalmente específicas. Objetivo: Caracterizar o perfil clínico, hematológico e molecular dos indivíduos adultos com beta talassemia do Hospital Universitário Walter Cantídeo, em acompanhamento no centro de referência de Hematologia e Hemoterapia do estado do Ceará (HEMOCE). Metodologia: Foram analisados 22 indivíduos portadores de beta talassemia, sendo 7 intermediária e 15 menor, de ambos os sexos, no período de fevereiro de 2008 a setembro de 2009. Os dados clínicos e laboratoriais: hemograma, níveis de Hb A2 e de Hb F; ferro sérico; capacidade total e latente de ligação do ferro (CTLFe, CLLFe), ferritina e índice de saturação da transferrina (IST), foram obtidos dos prontuários, ao diagnóstico. Cerca de 5 mL de sangue venoso foi coletado em tubo contendo o anticoagulante EDTA para o estudo molecular. A análise das mutações foi realizada por meio da técnica da reação em cadeia mediada pela polimerase alelo específico (PCR-AE), onde foram analisadas as seguintes mutações: IVS-I-1, IVS-I-6, IVS-I-110 e o CD 39. As análises estatísticas foram desenvolvidas no software livre R (versão 2.7.0) e o nível de significância estabelecido foi 5%. Resultados: Dos 22 pacientes estudados, 15 eram portadores de β talassemia menor e sete intermediária. A idade variou de 18 a 68 anos, com média de 44,7 anos. 18,2 % do sexo masculino e 81,8% do sexo feminino. As mutações foram caracterizadas em 68,2% dos casos, que teve como mais frequente a IVS-I-6, seguida do códon 39. A mutação IVS-I-I foi caracterizada em um paciente e a IVS-I-110 não foi encontrada. Não houve diferença clínica significante entre os parâmetros hematológicos e bioquímicos. Houve discrepância entre o fenótipo e o genótipo em alguns pacientes, porém não houve diferença significativa entre as mutações e as manifestações clínicas. Conclusões: Os resultados do presente estudo reforçam o predomínio da mutação IVS-I-6 no nordeste do Brasil. Recomendam-se estudos posteriores para investigação da co-herança com a α talassemia nesses pacientes para justificar a discrepância entre genótipos e fenótipos.
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Tolerancia a choque frio em Triatoma infestans klug

Campos, Silvana Gisele Pegorin de 28 July 2018 (has links)
Orientador : Maria Luiza Silveira Mello / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-28T03:44:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Campos_SilvanaGiselePegorinde_M.pdf: 3073140 bytes, checksum: 9e2acfb11ab88d93ace1003d404ebd12 (MD5) Previous issue date: 2001 / Mestrado
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Caracterização fenotípica e fitogenética da macho-esterilidade em triticale / Phenotypic and citogenetic characterization of male-sterility in triticale

Guerra, Divanilde January 2008 (has links)
O triticale é o primeiro cereal cultivado criado pelo homem proveniente da hibridação entre duas espécies distintas, o trigo (Triticum spp.) e o centeio (Secale cereale). Uma fonte de macho-esterilidade, derivada do cultivar IAPAR 54-OCEPAR 4, foi detectada em 2001 na Estação Experimental Agronômica da UFRGS, em Eldorado do Sul - RS. Este trabalho teve como objetivo realizar a caracterização fenotípica e citogenética desta fonte de macho-esterilidade, a fim de entender suas causas e potencial de aplicação em programas de melhoramento. A caracterização fenotípica da machoesterilidade foi realizada nos anos de 2005 e 2006, através da observação da abertura das flores no estádio de antese e da fertilidade da espiga. Os resultados indicam que a machoesterilidade é parcial e o caráter macho-estéril é herdável, porém há grande influência do ambiente sobre a manifestação do caráter. A menor fertilidade de espigas foi observada em plantas que apresentaram fenótipo macho-estéril, porém indivíduos caracterizados como macho-férteis também apresentaram fertilidade reduzida, quando comparados com as testemunhas. Plantas com fenótipos macho-estéreis, em 2006, derivadas de plantas também caracterizadas como macho-estéreis, em 2005, tiveram menor fertilidade de espiga do que aquelas derivadas de plantas caracterizadas como não macho-estéreis. Análises do comportamento meiótico da população macho-estéril revelaram diversas anormalidades nas fases da meiose, com níveis de irregularidades acima daqueles encontrados nos genótipos testemunha, os quais também apresentaram elevada anormalidade. O índice meiótico foi baixo, mas não diferiu da testemunha IAPAR 54-OCEPAR 4. Houve redução de em torno de 50% da fertilidade do pólen, quando comparada com o progenitor da população, corroborando com a baixa fertilidade observada a campo. Análises de plantas F2, derivadas do cruzamento entre plantas macho-estéreis e cultivares testemunhas, assim como de plantas dos respectivos retrocruzamentos, revelaram a restauração da viabilidade do pólen. A expressão do fenótipo macho-estéril parece estar associado à maior instabilidade da formação de tétrades na meiose. A fertilidade de espiga não é diretamente relacionada com a viabilidade do pólen, porém parece estar associada à estabilidade de formação de tétrades. A fertilidade de espiga deveria ser considerada como um critério para seleção de genitores nos programas de melhoramento de triticale, como uma forma de melhorar a estabilidade da meiose e do rendimento de grãos. / The triticale is the first cultivated cereal created by man from hybridization between two different species, wheat (Triticum spp.) and Rye (Secale cereale). A new source of male-sterility was detected at the UFRGS Agronomic Experimental Station, located in Eldorado do Sul, Southern Brazil. This study aimed to perform the phenotypic and cytogenetic characterization of that source of male-sterility, in order to understand its causes and assess the practicality of its incorporation in triticale breeding programs. The phenotypic characterization of male-sterility was carried out at the field in 2005 and 2006 through the visual observation of the degree of spikelet openness, at the anthesis stage, and also by the level of fertility of the spikes. The results indicate that the male-sterility is partial and must be heritable at some degree, but there is a strong environmental effect on the expression of this trait. Smaller spike fertility was observed in plants characterized as male-sterile by the spikelet appearance. However, plants characterized as male-fertile also showed reduced fertility, compared to the check varieties, but at a lower degree than the male-sterile plants. Moreover, plants that showed the male-sterile visual phenotype in 2006 and derived from plants that were characterized as male-sterile in 2005 were less fertile than those 2006 plants that were also visually male-sterile but derived from apparently male-fertile plants. Cytogenetic analysis of meiosis of the male-sterile population revealed several abnormalities, at all meiosis phases, but with levels of abnormalities above of that found for the checks, which also showed a high degree of irregularities. The population meiotic index was law and did not differ from the progenitor IAPAR 54 – OCEPAR 4. The pollen fertility in the male-sterile population was reduced by about 50% of the pollen fertility level showed by the population progenitor, agreeing with low spike fertility observed. Analysis of F2 plants, derived from the cross between male-sterile plants and check cultivars, as well as of some backcrosses, revealed the fast restoration of pollen viability. The expression of the male-sterile phenotype seems to be associated with the instability of tetrad formation in meiosis. Spike fertility is not directly associated with pollen viability, but seems to be linked to the stability of tetrad formation. The spike fertility should be considered as a selection criterion of parental genotypes to compose the crossing block of triticale breeding programs, as a mean of improving meiosis stability and grain yield.

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