TEIXEIRA, Carlos Eduardo Cordeiro. Efeito do farnesol sobre o fenótipo de resistência e a produção de fosfolipase e protease em cepas de Candida spp. 2011. 96 f. Dissertação (Mestrado em Microbiologia Médica)- Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2011. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-04-29T14:09:21Z No. of bitstreams: 1 2011_dis_cecteixeira.pdf: 2805174 bytes, checksum: b92b5c60e19665176be16931f7c6664f (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes(erikaleitefernandes@gmail.com) on 2013-04-29T16:30:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_dis_cecteixeira.pdf: 2805174 bytes, checksum: b92b5c60e19665176be16931f7c6664f (MD5) / Made available in DSpace on 2013-04-29T16:30:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_dis_cecteixeira.pdf: 2805174 bytes, checksum: b92b5c60e19665176be16931f7c6664f (MD5) Previous issue date: 2011 / There are several reports of in vitro resistance to antifungal drugs, especially azole derivatives, in strains of Candida spp. For this reason, the pursuit for new compounds that present antifungal properties is necessary. Thus, this study aimed at evaluating the antifungal activity of farnesol and its interaction with classical antifungal drugs against Candida spp., as well as evaluating its effect on the production of phospholipase and protease, which are important virulence factors for Candida species. Fourty-five strains of Candida spp. (23 C. albicans, 16 C. parapsilosis and 6 C. tropicalis) were tested through broth microdilution as described by the Clinical Laboratory Standards Institute (CLSI), document M27A2, and the minimum inhibitory concentrations (MICs) for amphotericin B (AMB), fluconazole (FLC), itraconazole (ITC), caspofungin (CAS) and farnesol (FAR) were individually determined. In addition, the effect of FAR on phospholipase activity was assessed by growing the strains on 2% Sabouraud agar, supplemented with egg yolk, and protease activity was determined through spectrophotometry. Then, 13 strains were randomly chosen, pre-incubated at three sub-inhibitory concentrations of FAR for 24 hours and re-submitted to microdilution assay. For the 45 evaluated Candida spp. strains the MIC values for FAR varied from 9.37 to 150 µM. For the classical antifungal drugs, MICs ranged from 0.0625 to 4 µg/mL for AMB, with 19 resistant strains (MIC>1 µg/mL); from 0.0125 to >64 for FLC, with 18 resistant strains (MIC> 64 µg/mL); from 0.03125 to >16 µg/mL for ITC, with 35 resistant strains (MIC ≥1 µg/mL), and from 0.0625 to 2 µg/mL for CAS, with six resistant strains (MIC≥2 µg/mL). All resistant strains were tested against the combination of FAR with the drug to which they presented resistance. The combination of AMB and FAR was synergistic against 94.7% (18/19) of the Candida spp. isolates, as shown through the obtention of FICI≤0.5. FAR and FLC interacted synergistically against all tested strains (n=18), exhibiting FICI values of ≤0.5. The combination of FAR and ITC presented synergistic interactions (FICI≤0.5) against 94.4% of the tested isolates (33/35). Finally, FAR and CAS showed to interact synergistically (FICI≤0.5) against all tested strains. Concerning virulence factors, it was observed that 17/45 isolates produced phospholipase, with a mean Pz of 0.71. After incubating these strains at three different concentrations of FAR the mean Pz values of 0.71, 0.61 and 0.54 were obtained, after incubation at the lowest, the intermediate and the highest concentrations of FAR, respectively. In addition, it was observed that the 14 randomly chosen strains that were screened for protease activity produced low concentrations of these enzymes, varying from 0.002 to 0.02 U/mL and that FAR presented no effect on enzymatic production. Finally, it was observed that pre-incubating strains at the highest sub-inhibitory concentration of FAR reduced the MIC range of the tested antifungal drugs. These results especially show the effects of FAR on the susceptibility of Candida species to classical antifungal drugs, providing perspectives for the development of researches on the mechanisms of this compound on fungal cell metabolism / Diversos são os relatos de resistência in vitro de cepas de Candida spp. a fármacos antifúngicos, em especial a derivados azólicos. Deste modo, a prospecção de novos compostos com propriedade antifúngica se faz necessária. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar a atividade antifúngica do sesquiterpeno farnesol, sua ação sinérgica com antifúngicos fluconazol (FLC), itraconazol (ITC), voriconazol (VRZ), anfotericina B (AMB) e caspofungina (CASP), bem como avaliar sua ação sob a atividade enzimática de fosfolipases e proteases, consideradas importantes fatores de virulência em Candida spp. Para tanto, foram avaliadas cepas de C. albicans (n=23), C. parapsilosis (n=16) e C. tropicalis (n=6). A concentração inibitória mínima (CIM) foi determinada por meio da técnica de microdiluição, preconizada pelo Clinical Laboratory Standards Institute (CLSI). Em adição, foi investigado o efeito do farnesol sobre a atividade de fosfolipase utilizando ágar Sabouraud suplementado com gema de ovo e a atividade de protease por técnica espetrofotomética. Paralelamente 14 cepas escolhidas aleatoriamente, foram pré-incubadas em três concentrações sub-CIM de farnesol, afim de avaliar se o farnesol era capaz de causar algum dano na sensibilidade da cepa. Para as 45 cepas avaliadas, os valores de CIM para farnesol variaram de 9,37 a 150 µM para Candida spp. Para os derivados azólicos, o intervalo dos valores de CIM para fluconazol foi de 0,03125 a > 64 µg/ml, observando-se a presença de 18 cepas resistentes (CIM > 64 µg/mL). Em relação ao itraconazol, os valores de CIM variaram de 0,03125 a >16 µg/mL e 35 cepas apresentaram resistência a esse antifúngico (CIM ≥1 µg/mL). Constatou-se que das 45 cepas em estudo, 19 apresentaram resistência a anfotericina B, com CIM > 1 µg/mL. Quanto a caspofungina, os valores de CIM variaram de 0,0625 a 2 µg/mL, com apenas seis cepas exibido resistência, com CIM de 2 µg/mL. A combinação anfotericina B e farnesol apresentou sinergismo em 94,7% (18/19) das cepas de Candida spp. resistentes, evidenciado pelos valores de FICI ≤ 0,5. Na associação fluconazol e farnesol, observou-se uma interação sinérgica frente a todas as cepas de Candida spp. avaliadas, apresentando FICI ≤ 0,5. Trinta e seis cepas (18 C. albicans, 12 C. parapsilosis e 6 C. tropicalis) foram testadas frente à associação de itraconazol e farnesol, observando a ocorrência de sinergismo (FICI ≤ 0,5) em 94,4% dos isolados. Quanto à caspofungina todas as cepas testadas (C. parapsilosis, n=4; C. albicans, n=2) tiveram FICI ≤ 0,5, caracterizando associação sinérgica com o farnesol. Após constatação de que 17 das 45 cepas expressavam a enzima fosfolipase, as mesmas foram incubadas em concentrações sub-CIM de farnesol, por 24 horas, quando observou–se uma medida de Pz média de 0,73 para as cepas testadas sem contato com farnesol e valores de 0,71, 0,61, e 0,54 para aquelas incubadas em doses sub-inibitória de farnesol. Em relação à produção de protease, observou-se que todas as 14 cepas produziam a enzima, em baixas concentrações, variando de 0,002 a 0,02 U/mL, e que a pré-incubação com farnesol não interferiu na produção enzimática. No tocante a pré-incubação das cepas com farnesol constatou-se que o mesmo interferi direta e indiretamente no fenômeno de resistência das cepas. Estes resultados demonstram, em especial, o efeito do composto farnesol sobre a sensibilidade antifúngica de Candida spp., abrindo a perspectiva de novos estudos com o intuito de determinar os mecanismos de ação desses compostos no metabolismo celular dos fungos.

Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-08-22T20:05:06Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Adriana Ferreira de Souza.pdf: 1586354 bytes, checksum: c17580ce2e26e119766228179c5b2459 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-08-29T21:35:29Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Adriana Ferreira de Souza.pdf: 1586354 bytes, checksum: c17580ce2e26e119766228179c5b2459 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-29T21:35:29Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Adriana Ferreira de Souza.pdf: 1586354 bytes, checksum: c17580ce2e26e119766228179c5b2459 (MD5) Previous issue date: 2016-04-08 / CNPq / Os biossurfactantes são compostos produzidos por bactérias, leveduras e fungos filamentosos, que apresentam na molécula uma porção hidrofóbica e outra hidrofílica, com potencial de redução da tensão superficial da água e ou emulsificação, sendo estes denominados de bioemulsificantes. Os micro-organismos que apresentam habilidade de acumular a partir de 20% em relação ao seu peso seco, são denominados oleaginosos, considerados como fontes promissoras para a produção de biodiesel. Neste sentido, estudos foram realizados com a Candida lipolytica UCP0988, no estado anamorfo, investigando a produção simultânea de bioemulsificante e lipídeos, empregando como substratos alternativos óleo de soja pós-fritura e milhocina, utilizando um planejamento fatorial de 2². O cultivo foi realizado em Erlenmeyers contendo 100 mL do meio de produção de acordo com o planejamento, com 1% de inoculo de 10⁷ cel/mL, incubados a 28ºC, 150 rpm por 96h. O bioemulsificante foi produzido no líquido metabólico livre de células, avaliado pela atividade e índice de emulsificação, caracterizado pelo tamanho das partículas, estabilidade com relação à diferentes pH, NaCl e altas temperaturas, teste de deslocamento de óleo (ODA) e aplicação na remoção de poluente hidrofóbico. Da biomassa obtida foi avaliada a acumulação de lipídeos, seguido a extração, transesterificação e caracterização dos ácidos graxos por cromatografia gasosa. Os resultados demonstraram que o bioemulsificante foi produzido no final da fase exponencial com 6,704 Unidades de atividade de emulsificação (UAE) em hexadecano e índice de emulsificação de 96,66% com o óleo queimado de motor na condição 4 do planejamento (milhocina 5% e óleo de soja pós-fritura 8%), com a formação de emulsão estável em todas as temperaturas, em pH 2 e 4 com 2% de salinidade e capacidade de remover 93,74% do óleo diesel. Além disso, o bioemulsificante demonstrou propriedade dispersante após o deslocamento de 45,34 cm² do óleo na condição do ponto central do planejamento. A biomassa de C. lipolytica mostrou acúmulo de lipídios observado por citoquimica, obteve 42,00% de lipídios totais e sendo 96,7% deles correspondentes a ésteres metílicos de ácidos graxos. A Candida lipolytica apresentou boa produção de bioemulsificante e biodiesel usando conversão metabólica dos resíduos agroindustriais, tornando o bioprocesso econômico e com grande potencial na aplicação biotecnológica. / Biosurfactants are compounds produced by bacteria, yeasts and filamentous fungi, which have in the molecule a hydrophobic portion and one hydrophilic, with a potential for reducing the surface tension of water and/or emulsification, these being called bioemulsifiers. However, some microorganisms having ability to accumulate 20% or more of lipids in relation to its dry weight are called oleaginous, considered as main sources for production of biodiesel. In this respect, studies have been carried out with the yeast Candida lipolytica UCP0988, at anamorph state, investigating the simultaneous production of bioemulsifier and lipids, using as alternative substrates post-frying soybean oil and corn steep liquor, employing a 2² factorial design. Cultivation was carried out in Erlenmeyer flasks containing 100 mL of the production medium according the experimental design, with 1% inoculum (10⁷ cells/mL), incubated at 28°C, 150 rpm for 96h. The bioemulsifier was produced in the cell-free metabolic liquid, assessed the emulsifying activity and index, characterized by particle size, stability against pH, NaCl and temperature, oil displacement test (ODA) and application to removal hydrophobic pollutant. Accumulation of lipids was evaluated from the biomass, followed by extraction and characterization of fatty acids by gas chromatography. The results showed that the bioemulsifier was produced in the late exponential phase with 6.704 units of emulsification activity (UEA) and index de 96,66% at condition 4 of factorial design (corn steep liquor 5% and post-frying soybean oil 8%), stable emulsion in all temperatures, at pH 2 and 4 and 2% salinity were formed, and ability to removing 93,74% of diesel oil in sand. The results with displacement oil showed 45.34 cm² of dispersion (central point of the design). The biomass of C. lipolytica showed lipid accumulation observed by Sudan Black staining technique, which 42% of total lipids, and 96.70% of them corresponding to fatty acids methyl esters. C. lipolytica demonstrated the ability to produce both bioemulsifier and lipids using metabolic conversion of corn steep liquor and post-frying soybean oil agroindustrials residues, making economic bioprocess and with great application potential to environmental biotechnology.

Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-09-04T19:58:03Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Juliana Maria Azevedo de Lyra.pdf: 3132284 bytes, checksum: e317cb1f9c952adb3328b338bdfc02be (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-09-17T22:53:14Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Juliana Maria Azevedo de Lyra.pdf: 3132284 bytes, checksum: e317cb1f9c952adb3328b338bdfc02be (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-17T22:53:14Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Juliana Maria Azevedo de Lyra.pdf: 3132284 bytes, checksum: e317cb1f9c952adb3328b338bdfc02be (MD5) Previous issue date: 2014-03-21 / FACEPE / Infecções fúngicas tem aumentado sua incidência, principalmente em imunocomprometidos. No Brasil, os fungos são responsáveis por cerca de 10% das infecções hospitalares, sendo as espécies de Candida responsáveis por cerca de 50% dos casos, seguidas pelo Aspergillus e Cryptococcus neoformans. O diagnóstico fúngico é dado pelo exame direto, que possui reduzida sensibilidade, e cultura que é tecnicamente laboriosa e demorada. A detecção do genoma de fungos apresenta diversas vantagens como a instalação precoce da terapia antifúngica diminuindo a mortalidade relacionada à infecção fúngica, e o tempo de internação dos pacientes em unidades de saúde. Este estudo tem como objetivo o desenvolvimento e avaliação de teste molecular para a detecção de infecção fúngica em pacientes imunocomprometidos através de PCR do tipo multiplex utilizando a sequência ITS como alvo, e sequências de rDNA específicas para detecção de 6 espécie de fungos de importância para a saúde humana: A. fumigatus, C. albicans, C. glabrata, C. tropicalis, C. parapsilosis e C. neoformans. Dos 84 pacientes analisados, 46 foram adultos em tratamento oncológico e 38 neonatos. Das 144 amostras de sangue submetidas a PCR convencional com os iniciadores para a detecção da região ITS, 84 foram positivas e 60 negativas. As amostras positivas foram submetidas a PCR multiplex para a determinação da espécie do fungo. 46 foram positivas para uma ou mais espécie fúngica, sendo as espécies mais encontradas a C. parapsilosis (23,8%), C. glabrata (19,0%), C. neoformans (14,2%), C. tropicalis e C. albicans (ambas 4,7% dos casos). A baixa frequência de C. albicans possivelmente está relacionada ao uso profilático do antifúngico fluconazol. A PCR convencional apresentou sensibilidade de 67,3% (53,2-79,0), especificidade de 47,2% (36,6-58,0), valor preditivo positivo de 44,0% (33,4-55,3) e valor preditivo negativo de 70,0% (56,6-80,8) em relação ao diagnóstico da doença, baseado na clínica, comprovação microbiológica e teste terapêutico. As curvas melting da PCR em tempo real utilizando o sistema de detecção SYBR Green obtidas pela amplificação da sequência subclonada de rDNA de cada espécie em plasmídeo apresentaram formato alargado, possivelmente devido a homologia entre o iniciador e diferentes regiões das sequências de rDNA das espécies de fungos estudadas, principalmente nas espécies de Candida, permitindo a amplificação inespecífica em diferentes temperaturas de anelamento avaliadas. As curvas de amplificação das sequências subclonadas de rDNA de cada espécie utilizando o sistema TaqMan apresentaram reprodutibilidade, e especificidade nos experimentos utilizando o par de iniciador e sonda especifico para uma dada espécie com sequências de rDNA clonadas das demais espécies de fungos analisadas, executando o teste para C. neoformans, mostrando o potencial do teste para utilização em amostras clínicas. / Fungal infections have increased its incidence, especially in immunocompromised patients. In Brazil, the fungi are responsible for about 10 % of nosocomial infections, with Candida species account for about 50% of cases, followed by Aspergillus and Cryptococcus neoformans. Fungal diagnosis is made by direct examination, which has reduced sensitivity, and culture that is technically laborious and time consuming. The detection of the fungal genome has several advantages as the early onset of antifungal therapy decreased mortality related to fungal infection, and length of stay of patients in healthcare facilities. This study aims at the development and evaluation of molecular test for the detection of fungal infection in immunocompromised patients by multiplex PCR using ITS sequence targeted and specific rDNA sequences for detection of 6 species of fungi of importance to the human health: A. fumigatus, C. albicans, C. glabrata, C. tropicalis, C. parapsilosis and C. neoformans. Of the 84 patients studied, 46 were adults undergoing cancer treatment and 38 neonates. 144 of blood samples with conventional PCR primers for detection of the ITS region, 84 were positive and 60 negative. The positive samples were subjected to multiplex PCR to determine the species of fungus. 46 were positive for one or more fungal species and the species most commonly found in C. parapsilosis (23.8%), C. glabrata (19.0%), C. neoformans (14.2%), C. tropicalis and C. albicans (both 4.7% of cases). The low frequency of C. albicans is probably related to the prophylactic use of antifungal fluconazole. Conventional PCR had a sensitivity of 67.3% (53.2 to 79.0), specificity of 47.2% (36.6 to 58.0), positive predictive value of 44.0% (from 33.4 to 55,3) and negative predictive value of 70.0% (56.6 to 80.8) compared to diagnosis based on clinical, microbiological and therapeutic proof test. The melting curves of real-time PCR using SYBR Green obtained by amplification of rDNA subcloned sequence of each species present in plasmid extended, possibly due to the homology between the initiator sequences and regions of rDNA of fungal species format studied, especially in Candida species, allowing nonspecific amplification at different annealing temperatures evaluated. The amplification curves of the subcloned rDNA sequences of each type using the TaqMan system showed reproducibility and specificity of the experiments using the pair of primer and probe specific for a species with cloned rDNA sequences of other species of fungi analyzed by running test for C. neoformans, showing the potential for use in clinical test samples.

Fungos no ambiente podem ser patogênicos ou oportunistas, dependendo da imunidade do hospedeiro. Existem várias espécies de fungos, por exemplo, Cândida albicans, Cryptococcus e Aspergillus. A primeira espécie fúngica pode ser tratada com o antifúngico fluconazol, que é um composto que contém anéis heterocíclicos 1,2,4-triazólicos. Além disso, existem cepas de fungos que são resistentes à terapia com fluconazol, que é o caso das Cândida krusei, Cândida tropicalis; entre outras. A busca por novos tratamentos envolve o desenvolvimento de novas moléculas sintéticas. Neste trabalho, sintetizamos uma biblioteca de compostos oxazolínicos e seus derivados 1,2,3-triazólicos. A atividade microbiológica foi avaliada contra 10 tipos de Cândida, 2 tipos de Cryptococcus e 2 tipos de Aspergillus. Além disso, foram feitos os testes de hemólise, citotoxicidade, combinações de drogas e permeabilidade de membrana. Os resultados sugerem um alto potencial terapêutico dos compostos e os propomos como potenciais novos antifúngicos. / Fungi in the environment may be pathogenic or opportunistic depending on the immune status of the host. There are several species of fungi, for example, Candida albicans, Cryptococcus and Aspergillus. The first fungal species can be treated with the antifungal fluconazole, which is a compound containing 1,2,4-triazole heterocyclic rings. In addition, there are strains of fungi that are resistant to fluconazole therapy, which is the case of Candida krusei, Candida tropicalis; among others. The search for new treatments involves the development of new synthetic molecules. In this work, we synthesized a library of oxazoline compounds and their 1,2,3-triazole derivatives. Microbiological activity was evaluated against 10 types of Candida, 2 types of Cryptococcus and 2 types of Aspergillus. In addition, hemolysis, cytotoxicity, drug combinations and membrane permeability were performed. The results suggest the high therapeutic potential of the compounds and we propose them as potential new antifungals.

CAPES / O estudo de alguns dos efeitos das radiações ultravioleta C (UV-C) e terapia fotodinâmica (TFD) em células das leveduras Saccharomyces boulardii e Candida albicans foi realizado expondo-se células destes micro-organismos a diferentes intensidades destas radiações, calculadas com base no tempo de exposição e potência das fontes utilizadas. A exposição à UV-C foi realizada após inoculação dos micro-organismos em ágar YEPD que em seguida foram expostos a uma distância de 35cm da fonte em tempos que variaram entre 5s e 40s para S. boulardii e 10s e 60s para C. albicans. Os experimentos foram realizados em triplicatas, sendo uma para verificação da sensibilidade da célula à radiação e uma para verificação da fotorreativação após a irradiação com UV-C. As células consideradas mutantes, isoladas em um segundo experimento, foram submetidas a provas bioquímicas, para avaliação de alterações em seu metabolismo, e posteriormente a microscopia, para avaliação de alterações morfológicas. Os experimentos com TFD foram realizados expondo-se os microrganismos aos agentes fotossensibilizantes e posteriormente a lâmpada de LEDs em tempos entre 3 min e 12min. Os resultados mostram que a radiação UV-C é eficiente na redução populacional dos micro-organismos estudados, além de terem sido observados, nos testes bioquímicos, alterações no metabolismo da S. boulardii, como perda da capacidade de assimilar açúcares e fontes de nitrogênio. As alterações morfológicas foram o alongamento celular e diminuição no tamanho da colônia. A TFD, por sua vez, não demonstrou ação antimicrobiana com a metodologia utilizada, apenas observou-se uma aparente recuperação das células que foram expostas às substâncias tóxicas utilizadas para sua fotossensibilização. Conclui-se que a levedura patogênica C. albicans é mais resistente à radiação UV-C comparando-se com a S. boulardii, pois necessita 60s de exposição à UV-C contra 40s para redução decimal de S. boulardii. A metodologia para TFD utilizada neste trabalho não provocou redução populacional as células estudas / The study of some effecs of ultraviolet C (UVC) and photodynamic therapy (PDT) in S. boulardii and C. albicans cells was performed by exposing the cells to different radiation intensities, and was computed based on the exposure time and power sources used. The exposure to UV-C was performed after the inoculation of microorganisms in YEPD agar and immediately exposed to UV-C rays at distance of 35 cm from the source for lengths of time ranging from 40s to 5s for S. boulardii and from 10s to 60s for C. albicans. The experiments were performed in triplicate, once for checking the cell’s sensitivity by radiation and once to test the occurrence of photoreactivation after irradiation with UV-C. The cells considered mutants, isolated in another experiment, were submitted to biochemical tests to assess changes in their metabolism, and, later, microscopy to assess morphological changes. The experiments with PDT were done by exposing the microorganisms to the photosensitizing agents and later to the LED bulb for lengths of time ranging from 3 min to 12 min. The results show that UV-C is effective in reducing the population of microorganisms. The biochemical tests also showed changes in the metabolism of the S. boulardii such as a loss in the ability to assimilate sugars and nitrogen sources. The morphological changes were cell elongation and reduction of the colony size. PDT, in turn, showed no antimicrobial action with this methodology. There was only an apparent recuperation of cells that were exposed to toxic substances used in its photosensitization. Our conclusion is that the pathogenic yeast C. albicans is more resistant to UV-C rays compared with the S. boulardii because it needs 60 seconds of exposure to UV-C against 40 seconds for a decimal reduction of S. boulardii. The methodology used for PDT in this study did not cause population reduction in the studied cells.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2017-03-30T14:39:41Z No. of bitstreams: 1 paulooswaldogarcia.pdf: 7631640 bytes, checksum: 323589981d539c20fc366715afa07f10 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-04-03T18:51:20Z (GMT) No. of bitstreams: 1 paulooswaldogarcia.pdf: 7631640 bytes, checksum: 323589981d539c20fc366715afa07f10 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-03T18:51:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 paulooswaldogarcia.pdf: 7631640 bytes, checksum: 323589981d539c20fc366715afa07f10 (MD5) Previous issue date: 2007-05-07 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Os distúrbios antrópicos como a atividade cafeeira na Zona da Mata de Minas Gerais foram os principais fatores responsáveis pela eliminação da cobertura vegetal. Com a redução dessas pressões em Juiz de Fora houve a regeneração dos ecossistemas florestais, principalmente, das florestas secundárias. A Reserva Biológica Municipal Santa Cândida, localizada no município de Juiz de Fora (21º41’20’’S e 43º20’40’’W), na Zona da Mata mineira, é um remanescente de floresta secundária com uma área estimada de 113,3 ha, cuja composição da flora arbórea ainda é desconhecida. O presente trabalho objetivou (a) caracterizar a composição florística e a estrutura da vegetação em diferentes trechos da reserva, (b) estabelecer a similaridade entre estes e (c) entre a reserva e outras áreas inventariadas em Minas Gerais. Para isso, foram estabelecidas 84 parcelas distribuídas em trechos de interior (Int-1, Int-2, Int-3) e borda (Bor-1, Bor-2, Bor-3) do fragmento, totalizando uma área amostral de 0,84 ha. Foram amostrados todos os indivíduos com circunferência a 1,30 m do solo (CAP) maior ou igual a 15 cm. No total, foram registrados 1.968 indivíduos, pertencentes a 52 famílias, 113 gêneros e 176 espécies. O índice de diversidade de Shannon-Wiener (H’) para a reserva foi de 4,298 e a equabilidade de Pielou (J’) foi igual a 0,83. Fabaceae (quanto à riqueza específica) Lauraceae, Meliaceae e Euphorbiaceae (tanto para riqueza de espécies quanto para abundância) apresentaram uma menor representatividade nos trechos de borda, sugerindo uma baixa tolerância a condições ambientais e bióticas mais severas. Por outro lado, Moraceae e Erytrhoxylaceae apresentaram uma maior representatividade nesses trechos. Cupania ludowigii, Piptadenia gonoacantha, Myrcia splendens, Apuleia leiocarpa e Guapira venosa se destacaram, juntamente com a categoria de mortas pelo valor de importância. Das espécies arbóreas presentes na reserva, 24 não tinham registro de ocorrência para o subdomínio do Vale do Paraíba do Sul e, destas, 9 não foram citadas para o estado de Minas Gerais. Aproximadamente 41% das plantas amostradas apresentaram altura entre 6,1 m e 10 m, com ampla variação de altura, com as emergentes apresentando até 36 m. Quanto às classes de circunferência, houve uma concentração de indivíduos nas menores classes, assegurando a regeneração do dossel pela reposição das plantas mortas. Não houve diferenças entre os índices de diversidade de Shannon-Wiener entre os trechos, porém as áreas de interior apresentaram uma riqueza de espécies observada maior. Os trechos Int-1 e Int-2 apresentaram a maior similaridade florística (58,6%), proporcionando a formação de um grupo através da análise de agrupamento, no entanto, a heterogeneidade entre a composição dos trechos dificultou a formação de outros grupos. Essa dissimilaridade vii ocasionou a separação clara de três trechos na reserva por meio da análise de correspondência distendida (DCA), divididos principalmente em decorrência dos trechos de borda Bor-1 e Bor-2. As análises estatísticas revelaram existir diferença significativa entre parte dos trechos de interior e as áreas de borda nos parâmetros de densidade absoluta, número de espécies por parcela e distribuição de freqüência de indivíduos por classes de circunferência e altura. Na reserva, há um predomínio de espécies secundárias iniciais e tardias em detrimento de espécies pioneiras. Porém, a maior abundância do grupo das secundárias iniciais influenciou o valor obtido para o índice sucessional (IS=2,11), indicando que a comunidade florestal encontra-se em estádio sucessional intermediário. Contudo, nos trechos de borda (Bor-1, Bor-2) o índice sucessional foi inferior a 2, o que sugere um estádio menos avançado da sucessão, face à maior abundância de espécies pioneiras e poucas espécies tardias. Desse modo, a caracterização da composição e da estrutura arbórea revelou uma grande diversidade florística, e ressalta a necessidade da implantação de atividades de manejo que assegurem a integridade da unidade de conservação, em função das condições diferenciadas entre os trechos e seu entorno. / The anthropogenic disturbances as coffee plantation in the Zona da Mata of Minas Gerais were main factors to the elimination of the vegetal coverage. After the reduction human activities in Juiz de Fora, there was the recovery of degraded ecosystem, resulting on secondary forests. The Biological Reserve Santa Cândida, situated in Juiz de Fora county (21º41' 20''' 40' S and 43º20' W), Zona da Mata of Minas Gerais, is a remnant secondary forest fragment with an area of 113,3 ha, whose tree community composition is still unknown. This study had as its aim (a) characterize the foristic composition and the structure of the vegetation in different areas in Biological Reserve Santa Cândida, (b) compare the floristic composition in internal and edge stands in the forest fragment through similarity coefficient, (c) test by cluster analysis the floristic composition among tree community sampled in Biological Reserve Santa Cândida and other surveys in Minas Gerais State. The phytosociological survey was made by 84 plots laid on the edge (Bor-1, Bor-2, Bor-3) and internal (Int-1, Int-2, Int-3) stands, resulting in 0,84 ha sampled area. All trees with circumference at breast height ≥ 15 cm were identified and measured (circumference and height). The survey registered 1.968 trees, distributed in 176 species, 113 genera and 52 families. The values of the Shannon-Wiener index (H') and equability respectively were 4,298 and 0,83. The families Fabaceae, Lauraceae, Meliaceae and Euphorbiaceae, as in species richness as abundance, were less common in edge stands, suggesting low tolerance in hardest biotic and abiotic conditions. Differently, Moraceae and Erytrhoxylaceae showed significant increase in species and individuals amount in the edge stands. In the case of sampled death plants and the species Cupania ludowigii, Piptadenia gonoacantha, Myrcia splendens, Apuleia leiocarpa e Guapira venosa were registered highest importance values in reserve. Some 24 trees species sampled in this study were not registered with distribution in Valley of South Paraíba and 9 species presented new occurrence in Minas Gerais State. Approximately 41% of the sampled individuals had height values between 6,1 m and 10 m with wide range in height class distribution and emergent layer reaching 36 m. The analysis of size class distribution demonstrated a concentration of individuals in the lesser size class, which may assure the canopy regeneration by replacement of the death plants. There wasn’t significant difference between Shannon-Wiener index between stands, but the internal stands showed highest observed species richness. The Int-1 and Int-2 stands had highest value to similarity coefficient (58,6%), which promoted the gathering of their floristic compositions through cluster analysis. However the different floristic compositions among other stands hindered the observation of other groups. This floristic ix heterogeneity in the Biological Reserve Santa Cândida tree community produced clear separation of three of six stands by detrended correspondence analysis (DCA) and resulting ordination analysis was directly influenced by tree species presents in edge stands Bor-1 and Bor-2. The statistical analysis demonstrated significant difference in the parameters density, number of species by plot, size class distributions and height class distributions between internal and edge stands. The ecological group analysis in this survey showed predominance of early and late secondary in detriment of pioneer species. The abundance of early secondary species affected the successional index value in the forest community (SI=2,11), indicating that forest community is intermediate successional stage. However, in the edge stands (Bor-1, Bor-2) the successional index values were about 2, due to an increase in the abundance of pioneer and a decrease in late secondary species, suggesting an initial stage in successional process. Therefore, the tree community composition and structure gained in this survey characterized a mosaic in the forest fragment and made the implantation of conservation activities in bordering stands evident to assure the integrity of the unit of conservation.

Com o aumento da expectativa de vida temos um maior contingente de pessoas portadoras de próteses totais, contudo não temos um protocolo bem estabelecido para higienização/desinfecção dessas próteses pelo paciente após a sua instalação. O objetivo desta pesquisa foi avaliar a ação antimicrobiana de diferentes meios de higienização de próteses totais, afim de se estabelecer um protocolo eficaz para a manutenção das próteses e com isso prevenir futuras estomatites protéticas. Para tanto foi testada a ação antimicrobiana dos agentes químico - a pastilha efervescente; e físico - o ultra-som, contra leveduras do gênero Candida, freqüentemente associadas à estomatite protética e contra os estreptococos do grupo mutans, responsáveis pela consolidação e progressão de alguns tipos de biofilme. 113 indivíduos participaram desta pesquisa, distribuídos aleatoriamente em 4 grupos, a saber: A- controle (25 pacientes) - apenas escovaram suas próteses com água, 3 vezes ao dia; B- (29 pacientes) utilizaram 1 pastilha efervescente ao dia por 5 minutos, durante 21 dias; C- (28 pacientes) fizeram o mesmo procedimento que o grupo A, com exceção de que, após 21 dias, as próteses foram submetidas ao ultra-som por 15 minutos; D-(31 pacientes) fizeram o mesmo que o grupo B, com exceção de que, após 21 dias, as próteses foram submetidas ao ultra-som por 15 minutos. Todos os procedimentos foram realizados por 21 dias e todos os grupos realizaram escovação da prótese com escovas dentais de cerdas macias Bitufo® e água. As colheitas do material das próteses ocorreram durante o exame inicial e após 21 dias da realização dos procedimentos de higienização listados acima. Antes do início dos procedimentos de higienização, todas as próteses receberam profilaxia profissional, afim de remover completamente o biofilme existente. As colheitas foram feitas por meio de escovação das próteses com PBS (salina tamponada fosfatada). Estas amostras foram submetidas a diluição decimal seriada e semeadas em placas contendo BHIA (Brain Heart Infusion Agar), Chromagar-Candida e SB20 (Ágar Sacarose Bacitracina) para a quantificação de aeróbios totais, Candida sp e estreptococos do grupo mutans, respectivamente. Após incubação em aerobiose por 24 horas; em aerobiose por 48 horas e em microaerofilia por 48-72 horas respectivamente, era realizada a quantificação dos microrganismos pesquisados e a verificação da eficácia dos procedimentos testados. Os resultados entre os tratamentos foram comparados por espécie, por meio de ANOVA para um fator de variação; ou por meio do teste de Kruskal-Wallis (?=0,05), a depender da aderência à distribuição normal. Pôde-se verificar que, frente à C. albicans (ANOVA, P=0,761), C. tropicalis (Kruskal-Wallis, P=0,944) e. C. glabrata (Kruskal-Wallis, P=0,803), os 3 tratamentos testados (pastilha efervescente, ultra-som e associação pastilha efervescente e ultra-som) não diferiram significativamente do controle (escovação e água), quanto à ação antimicrobiana. Por outro lado, o tratamento com pastilha efervescente e a associação pastilha efervescente e ultra-som, mostraram-se altamente eficientes em relação às cepas de estreptococos do grupo mutans (ANOVA, P<0,001). Em relação aos aeróbios totais, o tratamento com pastilhas efervescentes mostrou uma significante ação antimicrobiana, enquanto que a associação pastilha efervescente e ultra-som apresentou uma moderada ação sobre estes microrganismos (ANOVA, P=0,011). / With the increase of life expectation there is a greater number of people denture wearers. However, there isn\'t any protocol properly established about good oral hygiene/ disinfection these dentures by patient after its installation. The aim of this survey was evaluate the antimicrobial action of different hygiene methods to full maxillary dentures in order to establish some efficient protocol to maintenance of dentures and with this to prevent from future denture stomatitis. In this way, the antimicrobial action of a physical-chemical agent, effervescent tablets and of a physical agent, the ultrasonic were tested against Candida sp yeast which are frequently associated with denture stomatitis and against mutans streptococci which are responsible for consolidation and progression of some types of biofilm. 113 individuals who took part in this study were randomly assigned to one of 4 groups: A - Control (25 individuals): They just brushed their dentures with water, three times per day; B - (29 individuals): used of one effervescent tablet per day during five minutes; C - (28 individuals): the same of the group A, with exception of that after 21 days they had had their dentures submitted to ultrasonic for 15 minutes; D - (31 individuals): the same of the group B, with exception of that after 21 days they had had their dentures submitted to ultrasonic for 15 minutes. All procedures were carried out for 21 days and all groups brushed the dentures with dental brushes of soft bristles and water. The samples of dentures material were collected at baseline before any treatment after 21 days of treatment listed above. Prior to the beginning of these hygiene procedures, all dentures received professional prophylactic brushing in order to remote entirely the biofilm existent. The samples were collected by brushing the dentures with PBS, and sent to seriate decimal dilution and plated in BHIA (Brain Heart Infusion Agar), in Chromagar-Candida and in SB20 (Agar Sacarose Bacitracina) to quantification total aerobics, Candida sp and mutans streptococci, respectively. After incubation in aerobiosis for 24 hours, in aerobiosis for 48 hours and in microaerofilic for 48-72 hours, respectively. The outcomes among the treatments were compared by species, using ANOVA test to one factor of variation; or using Kruskal-Wallis test (=0,05), depending on adherence to normal distribution. It was verified that the antimicrobial action of the three treatments tested (effervescent tablets, the ultrasonic and the association between effervescent tablets and ultrasonic) weren\'t statistically different of the Control (brushing and water), against C. albicans (ANOVA, P=0,761), C. tropicalis (Kruskal-Wallis, P=0,944) e. C. glabrata (Kruskal-Wallis, P=0,803). However, the effervescent tablets treatment and the association between effervescent tablets and ultrasonic were highly efficient in relation to mutans streptococci (ANOVA, P<0,001). As for to total aerobics, the treatment with effervescent tablets showed a significant antimicrobial action, whereas the association between effervescent tablets and ultrasonic showed a moderate action against these microorganisms (ANOVA, P=0,011).

Com o aumento da expectativa de vida temos um maior contingente de pessoas portadoras de próteses totais, contudo não temos um protocolo bem estabelecido para higienização/desinfecção dessas próteses pelo paciente após a sua instalação. O objetivo desta pesquisa foi avaliar a ação antimicrobiana de diferentes meios de higienização de próteses totais, afim de se estabelecer um protocolo eficaz para a manutenção das próteses e com isso prevenir futuras estomatites protéticas. Para tanto foi testada a ação antimicrobiana dos agentes químico - a pastilha efervescente; e físico - o ultra-som, contra leveduras do gênero Candida, freqüentemente associadas à estomatite protética e contra os estreptococos do grupo mutans, responsáveis pela consolidação e progressão de alguns tipos de biofilme. 113 indivíduos participaram desta pesquisa, distribuídos aleatoriamente em 4 grupos, a saber: A- controle (25 pacientes) - apenas escovaram suas próteses com água, 3 vezes ao dia; B- (29 pacientes) utilizaram 1 pastilha efervescente ao dia por 5 minutos, durante 21 dias; C- (28 pacientes) fizeram o mesmo procedimento que o grupo A, com exceção de que, após 21 dias, as próteses foram submetidas ao ultra-som por 15 minutos; D-(31 pacientes) fizeram o mesmo que o grupo B, com exceção de que, após 21 dias, as próteses foram submetidas ao ultra-som por 15 minutos. Todos os procedimentos foram realizados por 21 dias e todos os grupos realizaram escovação da prótese com escovas dentais de cerdas macias Bitufo® e água. As colheitas do material das próteses ocorreram durante o exame inicial e após 21 dias da realização dos procedimentos de higienização listados acima. Antes do início dos procedimentos de higienização, todas as próteses receberam profilaxia profissional, afim de remover completamente o biofilme existente. As colheitas foram feitas por meio de escovação das próteses com PBS (salina tamponada fosfatada). Estas amostras foram submetidas a diluição decimal seriada e semeadas em placas contendo BHIA (Brain Heart Infusion Agar), Chromagar-Candida e SB20 (Ágar Sacarose Bacitracina) para a quantificação de aeróbios totais, Candida sp e estreptococos do grupo mutans, respectivamente. Após incubação em aerobiose por 24 horas; em aerobiose por 48 horas e em microaerofilia por 48-72 horas respectivamente, era realizada a quantificação dos microrganismos pesquisados e a verificação da eficácia dos procedimentos testados. Os resultados entre os tratamentos foram comparados por espécie, por meio de ANOVA para um fator de variação; ou por meio do teste de Kruskal-Wallis (?=0,05), a depender da aderência à distribuição normal. Pôde-se verificar que, frente à C. albicans (ANOVA, P=0,761), C. tropicalis (Kruskal-Wallis, P=0,944) e. C. glabrata (Kruskal-Wallis, P=0,803), os 3 tratamentos testados (pastilha efervescente, ultra-som e associação pastilha efervescente e ultra-som) não diferiram significativamente do controle (escovação e água), quanto à ação antimicrobiana. Por outro lado, o tratamento com pastilha efervescente e a associação pastilha efervescente e ultra-som, mostraram-se altamente eficientes em relação às cepas de estreptococos do grupo mutans (ANOVA, P<0,001). Em relação aos aeróbios totais, o tratamento com pastilhas efervescentes mostrou uma significante ação antimicrobiana, enquanto que a associação pastilha efervescente e ultra-som apresentou uma moderada ação sobre estes microrganismos (ANOVA, P=0,011). / With the increase of life expectation there is a greater number of people denture wearers. However, there isn\'t any protocol properly established about good oral hygiene/ disinfection these dentures by patient after its installation. The aim of this survey was evaluate the antimicrobial action of different hygiene methods to full maxillary dentures in order to establish some efficient protocol to maintenance of dentures and with this to prevent from future denture stomatitis. In this way, the antimicrobial action of a physical-chemical agent, effervescent tablets and of a physical agent, the ultrasonic were tested against Candida sp yeast which are frequently associated with denture stomatitis and against mutans streptococci which are responsible for consolidation and progression of some types of biofilm. 113 individuals who took part in this study were randomly assigned to one of 4 groups: A - Control (25 individuals): They just brushed their dentures with water, three times per day; B - (29 individuals): used of one effervescent tablet per day during five minutes; C - (28 individuals): the same of the group A, with exception of that after 21 days they had had their dentures submitted to ultrasonic for 15 minutes; D - (31 individuals): the same of the group B, with exception of that after 21 days they had had their dentures submitted to ultrasonic for 15 minutes. All procedures were carried out for 21 days and all groups brushed the dentures with dental brushes of soft bristles and water. The samples of dentures material were collected at baseline before any treatment after 21 days of treatment listed above. Prior to the beginning of these hygiene procedures, all dentures received professional prophylactic brushing in order to remote entirely the biofilm existent. The samples were collected by brushing the dentures with PBS, and sent to seriate decimal dilution and plated in BHIA (Brain Heart Infusion Agar), in Chromagar-Candida and in SB20 (Agar Sacarose Bacitracina) to quantification total aerobics, Candida sp and mutans streptococci, respectively. After incubation in aerobiosis for 24 hours, in aerobiosis for 48 hours and in microaerofilic for 48-72 hours, respectively. The outcomes among the treatments were compared by species, using ANOVA test to one factor of variation; or using Kruskal-Wallis test (=0,05), depending on adherence to normal distribution. It was verified that the antimicrobial action of the three treatments tested (effervescent tablets, the ultrasonic and the association between effervescent tablets and ultrasonic) weren\'t statistically different of the Control (brushing and water), against C. albicans (ANOVA, P=0,761), C. tropicalis (Kruskal-Wallis, P=0,944) e. C. glabrata (Kruskal-Wallis, P=0,803). However, the effervescent tablets treatment and the association between effervescent tablets and ultrasonic were highly efficient in relation to mutans streptococci (ANOVA, P<0,001). As for to total aerobics, the treatment with effervescent tablets showed a significant antimicrobial action, whereas the association between effervescent tablets and ultrasonic showed a moderate action against these microorganisms (ANOVA, P=0,011).

O objetivo deste estudo foi avaliar as propriedades físico-químicas, antimicrobianas e biocompatibilidade do MTA branco manipulado com extratos aquoso e/ou em propilenoglicol da Arctium lappa L., Casearia sylvestris Sw. e própolis. Dentre os testes físico-químicos foram avaliados o tempo de presa, escoamento, pH, liberação de íons cálcio e alteração volumétrica. Para verificar o efeito antimicrobiano foram aplicadas as metodologias do contato direto (Enterococcus faecalis e a Cândida albicans) e da descontaminação dentinária, empregando a microscopia confocal de varredura laser para verificar a viabilidade de Enterococcus faecalis. Para a avaliação da biocompatibilidade, 162 ratos Wistar foram utilizados, onde cada animal recebeu dois implantes subcutâneos e um alveolar. Após os períodos experimentais de 15, 30 e 60 dias foram realizadas análises microtomográfica, histológica descritiva e histomorfométrica. Adicionalmente amostras do tecido alveolar foram processadas para dosagem das citocinas TNF-&#x3B1; e IL-10 por meio do ensaio imunoenzimático (ELISA). Os dados obtidos foram analisados estatisticamente com os testes ANOVA e Tukey ou Kruskal-Wallis e Dunn. Os resultados revelaram que a variação do veículo associado ao MTA aumentou significativamente o tempo de presa, no entanto, não houve influência na alteração volumétrica (P>0,05) e na capacidade do cimento em manter o meio alcalino e liberar íons cálcio. Os cimentos manipulados com extratos em propilenoglicol apresentaram maior escoamento (P<0,05). Apenas o extrato da própolis agregou ao MTA efeito contra o Enterococcus faecalis após 24 e 48 horas (descontaminação dentinária e contato direto respectivamente) e contra a Cândida albicans após 10 horas (P<0,05). De acordo com as avaliações histológica e histomorfométrica dos implantes em tecidos subcutâneo e alveolar não foi constatada diferença significativa entre os grupos experimentais quando comparados com o grupo no qual o MTA foi manipulado com água destilada. Segundo a análise microtomográfica e a expressão das citocinas TNF-&#x3B1; e IL-10 houve similaridade (P>0,05) entre todos os grupos. Apesar de ter alterado algumas propriedades físico-químicas, o extrato da própolis potencializou o efeito antimicrobiano do MTA sem, contudo, alterar sua biocompatibilidade. / The aim of this study was to evaluate the physicochemical, antimicrobial properties and biocompatibility of white MTA mixed with aqueous or propylene glycol extracts of Arctium lappa L., Casearia sylvestris Sw. and propolis. Among physicochemical tests were evaluated the setting time, flowability, pH, ion calcium release and volumetric change. To verify the antimicrobial effects were applied the methods of direct contact (Enterococcus faecalis and Candida albicans) and dentin decontamination by using the confocal laser scanning microscopy to verify the Enterococcus faecalis viability. To evaluate the biocompatibility were used 162 Wistar rats. Each animal received one alveolar and two subcutaneous implants. After the experimental periods of 15, 30 and 60 days were performed the microtomography, histological description and histomorphometric analyses. Additionally alveolar tissue samples were processed for the measurement of TNF-&#x3B1; e IL-10 cytokines by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The data were statistically analyzed by the ANOVA and Tukey or KruskalWallis and Dunns tests. The results revealed that the variation of the vehicle associated to MTA significantly increased its setting time, however did not influence the volumetric change (P>0,05) and the cement\'s ability to maintain the alkaline medium and ion calcium release. Cements mixed with propylene glycol extracts showed higher flowability (P<0,05). Only propolis extract added to MTA the effect against E. faecalis after 24 and 48 hours (dentin decontamination and direct contact respectively) and against Candida albicans after 10 hours (P<0,05). According to the histological and histomorphometric evaluation of the implants in subcutaneous and alveolar tissue was not observed significant differences between the experimental groups in comparison to the reference group (MTA was mixed with distilled water). The microtomography analysis and expression of TNF-&#x3B1; and IL-10 showed that the groups were similar (P>0,05). Although the propolis extract modified some physicochemical properties of MTA it is potentiated the antimicrobial effect and did not influence the biocompatibility.

Submitted by Alisson Mota (alisson.davidbeckam@gmail.com) on 2015-07-07T18:57:29Z No. of bitstreams: 1 Dissertação - Karen Kelly Carvalho de Oliveira.pdf: 2064619 bytes, checksum: 99e96187d8cd6db44d7bb15b47d1bbe8 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-07-07T19:07:54Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Karen Kelly Carvalho de Oliveira.pdf: 2064619 bytes, checksum: 99e96187d8cd6db44d7bb15b47d1bbe8 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-07-07T19:11:17Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Karen Kelly Carvalho de Oliveira.pdf: 2064619 bytes, checksum: 99e96187d8cd6db44d7bb15b47d1bbe8 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-07-07T19:11:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação - Karen Kelly Carvalho de Oliveira.pdf: 2064619 bytes, checksum: 99e96187d8cd6db44d7bb15b47d1bbe8 (MD5) Previous issue date: 2014-05-29 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / The increase in microbial resistance to available antibiotics and the continuous decrease observed in the number of the new antimicrobial agents approved by Food and Drug Administration creates a constant search for new compounds. To do so, one of the strategies to be followed consists in exploring understudied natural sources, as often organisms obtained new ecosystems are associated with new chemical diversity. In this context are the basidiomycetes, which have been reported as promising sources of antimicrobial and, despite this potential and great biological diversity, the species found in the Amazon have been insufficiently studied. The objective of this study was to evaluate the antimicrobial activity of eight basidiomycetes isolated from Manaus and Boa Vista. The fungi were grown in two liquid media (malt and GLP) and malt-agar medium, in the latter case were held in two incubation conditions: absence and presence of light. The fungi were maintained at room temperature in all treatments. The tests used the filtered liquid from the growth medium for seven to 63 days, besides extracts with ethyl acetate from growing on solid media (ten days). The pathogens tested were Escherichia coli CBAM 001, Staphylococcus aureus CBAM 324, Candida albicans CFAM 1342, Aspergillus niger CFAM 161 and Penicillium sp. CFAM 059, by agar diffusion method. The filtered with positive activity, were submitted to microdilution test for identification of minimum inhibitory concentration. Molecular identification was performed by amplification and sequencing of the rDNA fragment, with subsequent comparison of the sequences obtained with those deposited in the National Center for Biotechnology Information database. Of filtered tested, seven inhibited the growth of C. albicans CFAM 1342, all of Oudemansiella canarii 1528 cultivation, as medium malt, as in GLP. At medium malt, this basidiomycete produced antifungal compounds at seven and 49 days of cultivation, while in the medium GLP produced from the 21 days of cultivation, until the 49th day. The minimum inhibitory concentration was found for the filtrate obtained after 28 days of GLP cultivation medium (2.5 mg/ml) and the filtrate obtained after 49 days malt medium (5 mg/ml). The extracts obtained with ethyl acetate inhibited C. albicans CFAM 1342, Penicillium sp. CFAM 059, E. coli CBAM 001 and S. aureus CBAM 324. This method was found more satisfactory results, as well as Oudemansiella canarii 1528, six other basidiomycetes (Basidiomycete 347, Pleurotus sp. 474, Gloeophyllum sp. 1153, Trametes sp. 1232, Trametes sp. 1540 e Earliella scabrosa 1552) showed antimicrobial activity. Thus, the results allow to observe the influence of culture conditions for the production of antimicrobial compounds, as well as choice of solvents, further studies are needed to determine the optimum conditions for production and extraction thereof. / O aumento da resistência microbiana aos antibióticos disponíveis e o decréscimo contínuo observado no número de novos antimicrobianos aprovados pela Food and Drug Administration gera uma constante busca por novos compostos. Para tanto, uma das estratégias a ser seguida consiste na exploração de fontes naturais pouco estudadas, pois frequentemente organismos obtidos de novos ecossistemas estão associados à nova diversidade química. Neste contexto destacam-se os basidiomicetos, que vêm sendo relatados como promissoras fontes de antimicrobianos e, apesar deste potencial e da grande diversidade biológica, as espécies ocorrentes na Amazônia têm sido pouco estudadas. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade antimicrobiana de oito basidiomicetos isolados de Manaus e Boa Vista. Os fungos foram cultivados em dois meios líquidos (malte e GLP) e em meio ágar-malte, neste último caso foram mantidos em duas condições de incubação: ausência e presença de luz. Em todos os tratamentos os fungos foram mantidos em temperatura ambiente. Os testes utilizaram os filtrados provenientes do crescimento em meio líquido de sete a 63 dias, além de extratos obtidos com acetato de etila a partir do cultivo em meio sólido (dez dias). Os patógenos testados foram Escherichia coli CBAM 001, Staphylococcus aureus CBAM 324, Candida albicans CFAM 1342, Aspergillus niger CFAM 161 e Penicillium sp. CFAM 059, através do método de difusão em ágar. Os filtrados com atividade positiva foram submetidos a teste de microdiluição para identificação da concentração inibitória mínima. Foi realizada a identificação molecular através de amplificação e sequenciamento do fragmento do rDNA, com posterior comparação das sequências obtidas com as depositadas no banco de dados do National Center for Biotechnology Information. Dos filtrados testados, sete inibiram o crescimento de C. albicans CFAM 1342, todos provenientes do cultivo de Oudemansiella canarii 1528, tanto em meio malte, como em meio GLP. Em meio malte, este basidiomiceto produziu compostos antifúngicos aos sete e 49 dias de cultivo, enquanto em meio GLP produziu a partir dos 21 dias de cultivo, até o 49º dia. A concentração inibitória mínima foi identificada para o filtrado obtido aos 28 dias de cultivo em meio GLP (2,5 mg/mL) e o filtrado obtido aos 49 dias em meio malte (5 mg/mL). Os extratos obtidos com acetato de etila além de inibir C. albicans CFAM 1342, inibiram Penicillium sp. CFAM 059, E. coli CBAM 001 e S. aureus CBAM 324. Esta metodologia apresentou resultados mais satisfatórios, pois além de Oudemansiella canarii 1528, outros seis basidiomicetos (Basidiomycete 347, Pleurotus sp. 474, Gloeophyllum sp. 1153, Trametes sp. 1232, Trametes sp. 1540 e Earliella scabrosa 1552) apresentaram atividade antimicrobiana. Deste modo, os resultados obtidos permitiram observar a influência das condições de cultivo para a produção de compostos antimicrobianos, assim como a escolha de solventes, sendo necessários estudos posteriores para determinar a melhor condição para a produção e extração destes compostos.